培哚普利對維甲酸致骨質疏松大鼠骨組織結構的影響

鐘 奕 薛 青 陳亮華 (中山大學附屬第五醫院老年病科，廣東 珠海 59000)

培哚普利對維甲酸致骨質疏松大鼠骨組織結構的影響

鐘 奕 薛 青 陳亮華1(中山大學附屬第五醫院老年病科，廣東 珠海 519000)

目的探討血管緊張素酶轉化抑制劑(ACEI)培哚普利對骨質疏松大鼠骨組織的作用。方法將大鼠隨機分為A、B、C、D、E五組，A、B、C、D 4組用80 mg·kg-1·d-1的維甲酸(RA)造模，E組為對照組，造模成功后A、B、C 3組再用8、4、2 mg·kg-1·d-1培哚普利給藥，D、E兩組灌予等量蒸餾水。實驗過程中記錄體重變化，2個月后行病理切片蘇木精-伊紅(HE)染色觀察骨組織顯微結構。結果培哚普利干預后骨組織與干預前比較：A組骨小梁中斷較少，連接尚可，間距較前減小；B組骨小梁數量較前增多，仍有稀疏、變細，仍可見中斷，間距無明顯變化；C、D組表現類似，可見骨小梁疏松、中斷，小梁間的網孔增大，小梁間連接減少；E組較前無明顯變化；A、B、C 3組以A組作用較明顯。結論培哚普利可促進骨形成，有效地拮抗RA造模大鼠骨質疏松的進展，且促進骨形成的作用呈劑量依賴性。

培哚普利；骨質疏松；骨組織

血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)類藥物是治療高血壓常用藥物，有研究證實ACEI類藥物之一的卡托普利有改善骨質疏松的效果〔1〕，一項高血壓大鼠的研究也探討了ACEI類藥物可通過阻斷腎素-血管緊張素系統(RAS)途徑起到預防骨質疏松的作用〔2〕。本研究旨在探討培哚普利對維甲酸(RA)致骨質疏松大鼠骨組織結構的影響。

1 材料與方法

1.1主要實驗材料及儀器 10周齡SPF級SD雌性大鼠50只，體重200～250 g，由廣東省醫學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(粵)2008-0002。RA(廣州博新精細化工公司生產，130725)，培哚普利〔雅施達，4 mg/粒，施維雅(天津)制藥有限公司生產，H20034053〕，電子天秤(德國SARTORIUS公司生產，BP110S型)，恒溫箱式切片機(中國天津航空機電公司生產，HQP-101型)，烘片機(德國徠卡公司，HI1220)，倒置顯微鏡配套照相裝置(日本CANON公司生產，A95型)。

1.2動物分組及模型制作 適應性喂養飼料1 w后，精確稱重，隨機分為A、B、C、D 4個模型組和對照(E)組，每組10只。模型組用去離子純凈水加入RA調配成適當濃度，于每天上午9時按照80 mg·kg-1·d-1連續灌胃14 d，每天一次，而對照組給予等容積去離子純凈水。14 d后，各組隨機處死5只大鼠，取其一側股骨，行病理切片蘇木素-伊紅(HE)染色觀察骨組織顯微結構，余下的大鼠繼續進行下一步實驗。

1.3藥物干預及檢測指標 A組：高劑量培哚普利組(8 mg·kg-1·d-1)；B組：中劑量培哚普利組(4 mg·kg-1·d-1)；C組：低劑量培哚普利組(2 mg·kg-1·d-1)；D、E組分別灌等量蒸餾水，連續2個月。實驗過程中觀察大鼠進食量、行動及對外界反應，每周稱體重1次，在藥物干預結束時處死實驗大鼠，取一側股骨，行病理切片HE染色觀察骨組織顯微結構。

1.4統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行ANOVA分析、LSD檢驗。

2 結 果

2.1RA造模結束后各組存活情況及體重變化 連續14 d RA造模過程中，大鼠開始出現不同程度少食、活動減少，E組逐漸恢復正常，食欲及活動尚可，A、B、C、D組食欲亦逐漸好轉，但活動仍較前減少，大鼠體重總體呈上升趨勢，但A、B、C、D組體重上升均不如E組顯著，除D組與E組有統計學差異(P<0.05)，其余無統計學差異(P>0.05)，A、B、C、D組間無統計學差異(P>0.05)。造模結束時，未見大鼠出現RA中毒癥狀。見表1。

表1 造模過程中各組體重對比

1)差值=第14天體重-第1天體重；與E組比較：2)P<0.05

2.2RA對骨組織顯微結構的影響 A、B、C、D組可見骨組織顯微結構受損的表現，如骨松質小梁明顯稀疏、變細，小梁間連接減少，間距加大，皮質骨變薄，骨髓腔相對擴大，部分區域骨小梁中斷、消失，說明RA組骨量減少，微結構受損，從骨組織顯微結構看已達到骨質疏松模型標準〔3,4〕。E組股骨干骺端骨小梁豐富，連續性較好，皮質骨致密(見圖1)。

2.3培哚普利干預后各組存活情況及體重變化 連續2個月給予培哚普利灌胃過程中，大鼠食欲下降，體重波動，活動未見明顯異常。培哚普利干預前后，大鼠體重均增長，A、B組上升不如C、D、E組明顯，但差異均不顯著(P>0.05)。見表2。

2.4培哚普利對骨組織顯微結構的影響 培哚普利干預后骨切片結果顯示：A組可見骨小梁中斷較少，連接尚可，間距較前減小；B組骨小梁數量較前增多，仍有稀疏、變細，仍可見中斷，間距無明顯變化；C、D組表現類似，可見骨小梁疏松、中斷，小梁間的網孔增大，小梁間連接減少；E組較前無明顯變化(見圖2)。

表2 培哚普利干預后各組體重對比

圖1 造模結束后各組股骨組織切片(HE，×100)

圖2 培哚普利干預后大鼠股骨組織切片(HE，×100)

3 討 論

大鼠生長至2個月齡時已達到性成熟，但骨骼仍可發育，骨量呈現增加趨勢。本實驗采取10周齡的大鼠，經適應性喂養及造模后，至藥物干預時大鼠已達3個月齡，骨量變化已基本穩定，與成年人代謝水平相似。

ACEI作為治療高血壓的一線藥物普遍應用于臨床，多個流行病學研究發現，ACEI類藥物可增加骨量，降低骨折風險〔5～7〕，也有動物實驗證實了依那普利可增加子宮萎縮小鼠的骨密度〔8〕。這些研究表明ACEI不只對治療高血壓有利，對治療老年人的骨質疏松也有一定作用，本實驗結果說明培哚普利能夠在一定程度上改善骨質疏松，本實驗可推斷8 mg·kg-1·d-1劑量的效果最好。由于實驗條件的限制，無法實現通過雙能X線或顯微CT測量大鼠的骨密度，本研究發現培哚普利可促進骨形成，有效拮抗RA造模大鼠骨質疏松的進展，考慮其機制可能是骨組織中的血管緊張素(Ang)Ⅱ通過誘導負責骨吸收的破骨細胞活化、分化，導致骨吸收和骨形成失衡，最終骨量下降，骨微結構損壞〔9〕，而作為ACEI藥物之一的培哚普利通過抑制AngⅡ而抑制破骨細胞活化、分化，從而改善骨質疏松；培哚普利促進骨形成的作用呈劑量依賴性。

1陳 方,吳 鐵,崔 燎,等.卡托普利抗小鼠維甲酸性骨質疏松的作用探討〔J〕.中國藥理學通報,2002;18(5):572-5.

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6Rejnmark L,Vestergaard P,Mosekilde L.Treatment with beta-blockers,ACE inhibitors and calcium-channel blockers is associated with a reduced fracture risk:a nationwide case-control study〔J〕.J Hypertens,2006;24(3):581-9.

7Goemans N,Buyse G.Current treatment and management of dystrophinopathies〔J〕.Curr Treatment Option Neurol,2014;16(5):1-13.

8Kang KY,Kang Y,Kim M,etal.The effects of antihypertensive drugs on bone mineral density in ovariectomized mice〔J〕.J Korean Med Sci,2013;28(8):1139-44.

9Nakagami H,Osako MK,Morishita R.Potential effect of angiotensin Ⅱ receptor blockade in adipose tissue and bone〔J〕.Curr Pharmaceutical Design,2013;19:3049-53.

R592

A

1005-9202(2017)24-6052-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.020

1 珠海市人民醫院干部保健老年病科

薛 青(1970-)，女，教授，碩士生導師，主要從事老年內分泌疾病研究。

鐘 奕(1989-)，女，在讀碩士，主要從事老年內分泌疾病研究。

〔2016-12-05修回〕

(編輯 苑云杰/杜 娟)