原發性高血壓血管緊張素轉化酶基因I/D多態性與厄貝沙坦降壓療效及血漿腎素血管緊張素-醛固酮系統水平的相關性

黃 紅 李 燕 全勝麟 李宗禹 陳曉云 唐林青 沙艷梅 葉海瓊 周 黎 黃順算

(昆明理工大學附屬醫院 云南省第一人民醫院內干科，云南 昆明 650032)

·心、腦血管及代謝性疾病·

原發性高血壓血管緊張素轉化酶基因I/D多態性與厄貝沙坦降壓療效及血漿腎素血管緊張素-醛固酮系統水平的相關性

黃 紅 李 燕 全勝麟 李宗禹1陳曉云2唐林青1沙艷梅2葉海瓊3周 黎 黃順算1

(昆明理工大學附屬醫院 云南省第一人民醫院內干科，云南 昆明 650032)

目的分析原發性高血壓(EH)ACE基因I/D多態性與厄貝沙坦降壓療效及血漿腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)水平的相關性。方法納入云南漢族、白族及傣族EH患者450例，檢測ACE基因多態性，根據基因型進行分組，所有患者給予厄貝沙坦治療8 w后評估降壓療效，監測治療前后血漿RAAS活性的變化。結果EH患者中ACE基因I/D多態性分布與種族無明顯關系(P>0.05)；不同基因型中厄貝沙坦降壓療效、治療前后血漿RAAS活性降低程度具有差異性，表現為DD型>ID型>Ⅱ型；采用Logistic回歸分析治療有效率的影響因素，血管緊張素Ⅱ活性改變與治療有效率呈正相關(OR值1.038)。結論ACE I/D多態性可能是影響EH患者對厄貝沙坦降壓反應的重要指標，通過調節血管緊張素Ⅱ活性形成。

原發性高血壓；血管緊張素轉化酶；腎素-血管緊張素-醛固酮系統

原發性高血壓(EH)是最常見的心血管疾病之一，血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)厄貝沙坦作為一線抗高血壓藥物，通過選擇性拮抗血管緊張素轉換酶(AT)1受體，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)而發揮降壓作用，但往往存在降壓療效的個體差異，影響治療的依從性。血管緊張素轉化酶(ACE)基因能影響ACE活性，已成為研究RAAS公認的主要基因型，也是EH相關研究最重要的候選基因〔1〕。目前，對于降壓藥物療效差異形成機制的研究，僅局限于基因多態性的研究，缺乏血漿RAAS水平的對照研究。本研究探討EH患者ACE基因I/D多態性與血漿RAAS水平及ARB藥物的降壓療效的關系。

1 資料與方法

1.1資料 納入云南省第一人民醫院門診及住院的漢族、大理白族及德宏傣族初發EH患者450例，漢族、白族及傣族各150例，男259例，女191例，平均年齡(61.11±11.74)歲，均為1～2級高血壓，排除繼發性高血壓、糖尿病和肝、腎病史及可能影響本試驗的其他疾病者。所有患者未服用任何降壓藥物。

1.2ACE基因I/D多態性檢測及分組 ①基因組DNA的提取：應用小劑量血液基因組DNA抽提試劑盒提取外周血白細胞DNA。制備的DNA樣品于紫外分光光度計測定其260 nm、280 nm OD值，檢測DNA的純度和含量，并用瓊脂糖凝膠電泳觀察其完整性。②ACE基因型分析：采用聚合酶鏈反應(PCR)進行ACE基因I/D多態性，以外周血提取的DNA為模板，以人工合成的寡核苷酸為引物，PCR儀上進行擴增。上游引物：5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′，下游引物：5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′，擴增產物片段大小為490 bp和190 bp。PCR反應體系20 μl，94℃預變性5 min，94℃變性1 min，58℃退火1 min，72℃延伸1 min，共35個循環，最后72℃延伸10 min，4℃保溫。產物經2%的瓊脂糖凝膠進行電泳分析，隨機選取490 bp擴增片段和190 bp擴增片段進行測序，以確定擴增片段正確。③根據ACE基因I/D多態性檢測結果將患者分為II基因型組、ID基因型組和DD基因型組。

1.3血樣采集 分別抽取EH患者治療前、厄貝沙坦治療8 w后清晨空腹平臥位靜脈血，應用放射免疫法測定血漿腎素、血管緊張素Ⅰ4℃、血管緊張素Ⅰ37℃、血管緊張素Ⅱ、醛固酮活性，試劑盒由北京北方生物技術研究所提供。

1.4血壓觀察指標 ①主要指標試驗開始前及治療后2、4、6、8 w分別測量血壓，根據治療后8 w血壓較治療前下降程度來進行降壓療效判斷。②療效評價指標治療前后血壓值對比，根據中華人民共和國衛生部藥物臨床試驗規范抗高血壓藥物的療效判斷標準分為顯效、有效及無效，有效率=顯效+有效。顯效：舒張壓(DBP)下降≥10 mmHg并降至正常或DBP未降至正常但下降≥20 mmHg。有效：DBP下降未達10 mmHg但已降至正常或下降10～19 mmHg。無效：未達以上標準。

1.5統計學方法 應用SPSS17.0軟件進行χ2、秩和及t檢驗，Logistic回歸分析相關影響因素。

2 結 果

2.1ACE基因I/D多態性結果 PCR產物經2%的瓊脂糖凝膠進行電泳分析：只出現490 bp條帶者為插入純合型(II型)；只出現190 bp條帶者為缺失純合型(DD型)；出現490 bp和190 bp兩條帶者，則為插入/缺失雜合型(ID型)，見圖1。云南漢族、傣族及白族ID、II、DD基因構成比無統計學差異(P>0.05)，見表1。

2.2各基因型組間治療有效率比較 不同基因型組間高血壓患者治療效果有統計學差異(H=40.398，P<0.001)。II組、DD組與ID組間任意兩組間比較有統計學差異，而且依據平均秩次值判斷，治療效果：DD組>ID組>II組，見表2。

1：II；2：ID；3：ID；4：II；5：II；6：ID；7：II；8：ID；9：ID；10：ID；11：ID；12：II；13：ID；14：II；15：II；16：ID；17：II；18：DD；19：ID；20：II圖1 ACE基因I/D多態性

組別IDIIDDχ2值P值漢族55(367)76(507)19(126)02710992白族56(373)69(460)25(167)傣族54(360)72(480)24(160)

2.3各基因型組間治療前后RAAS活性差值比較 方差分析結果顯示：不同基因型組間接受治療后腎素、血管緊張素Ⅰ 4℃、37℃、血管緊張素Ⅱ和醛固酮的下降值有統計學差異(P<0.05)。兩兩比較(調整檢驗水準為α=0.017)后均表現為DD組>ID組>II組。見表3。

表2 不同基因型組間高血壓患者治療效果比較〔n(%)〕

與ID組比較：1)P<0.05

表3 三種基因型組間治療前后RAAS活性差值比較

2.4治療前后血漿RAAS活性改變與厄貝沙坦降壓有效性的關系 采用Logistic回歸分析，以厄貝沙坦治療后有效率為應變量，而以腎素、血管緊張素Ⅰ 4℃、血管緊張素Ⅰ 37℃、血管緊張素Ⅱ、醛固酮降低值為自變量，采用后退法分析，結果進入方程的自變量僅有血管緊張素Ⅱ下降值，回歸系數為正值(β=0.038)，表示血管緊張素Ⅱ下降值與治療的有效率呈正相關(SE=0.009,Waldχ2=17.910,P<0.001)。血管緊張素Ⅱ下降值增加1個單位，治療結局為有效的可能性增加1.038倍(95%CI1.020～1.057)。

3 討 論

RAAS的激活是EH發病的主要機制。藥物治療是EH主要治療手段，ARB作為一線抗高血壓藥物往往存在著降壓療效的個體差異。厄貝沙坦作為ARB代表性藥物，是血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，抑制血管緊張素Ⅰ轉化為血管緊張素Ⅱ，能特異性地拮抗AT1受體，選擇性地阻斷血管緊張素Ⅱ與AT1受體的結合，抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產生降壓作用。ACE是RAAS的重要組成部分，在高血壓發病中起著至關重要的作用〔2〕。目前大多數研究支持ACE基因I/D多態性是研究EH遺傳基礎的最有吸引力的候選基因，與EH發病具有相關性〔3～5〕。隨著人類基因組計劃的實施及藥物基因組學研究的進展，ACE I/D多態性不僅與EH發病有關，還與EH降壓藥物治療差異有關〔6,7〕，是導致藥物療效差異的重要原因。基因多態性是如何導致降壓療效的差異，與血漿RAAS活性變化有關嗎？本研究發現EH患者中ACE基因I/D多態性分布與種族無明顯關系；厄貝沙坦降壓療效在不同基因型中具有差異性，降壓療效DD型>ID型>II型，這與以往研究結果相符〔8～10〕。本研究顯示EH患者不同基因型對ARB藥物治療反應性有差異，可能是通過調節血管緊張素Ⅱ活性形成。基因多態性是影響個體對藥物治療反應的重要因素，尤其是藥物作用靶點的遺傳多態性是藥物在人體內處置過程和產生效應的決定因素，是藥物代謝和效應個體差異的重要因素。個體遺傳背景不同所致的降壓藥物療效的差異，一直是困擾臨床醫師合理選擇降壓藥物的難點之一，檢測高血壓患者ACE基因多態性，篩選出ARB治療最合適的基因型，指導合理選擇最佳降壓治療方案，進行個體化治療，已成為一個新的挑戰，也是個性化醫療的要求。

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R544.1

A

1005-9202(2017)24-6057-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.022

2013年度云南省教育廳科學研究基金項目(2013C211)；云南省科技廳-昆明醫科大學應用基礎研究聯合專項資助(2013FB202)；云南省衛生和計劃生育委員會內設研究機構老年病防治研究中心科研項目(2016NS201)

1 德宏州第二人民醫院內一科 2 大理州人民醫院干療科

3 云南省第一人民醫院內分泌科

李 燕(1961-)，女，碩士，主任醫師，碩士生導師，主要從事老年病學及神經病學研究。

黃 紅(1974-)，女，碩士，副主任醫師，主要從事老年心血管及消化系統疾病研究。

〔2016-10-13修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)