樹突細胞-細胞因子誘導殺傷細胞聯合術后化療治療非小細胞肺癌的療效

姜海燕 劉達興 徐 剛 宋永祥 (六盤水市人民醫院胸心外科,貴州 六盤水 553000)

樹突細胞-細胞因子誘導殺傷細胞聯合術后化療治療非小細胞肺癌的療效

姜海燕 劉達興1徐 剛1宋永祥1(六盤水市人民醫院胸心外科,貴州 六盤水 553000)

目的評價Ⅱa～Ⅲa期非小細胞肺癌(NSCLC)術后輔助化療聯合樹突細胞(DC)-細胞因子誘導殺傷(CIK)細胞治療的效果。方法NSCLC手術病例79例，隨機分為術后輔助化療組40例(對照組)和術后輔助化療聯合3個療程DC-CIK細胞治療組39例(治療組)；兩組完成術后4個療程化療后，對比隨訪1年的復發率和生存率、每次化療前血清癌性標志物癌胚抗原(CEA)、CYFRA21-1含量；密切觀察細胞回輸不良反應，評價患者生活質量評分。結果術后1年，治療組腫瘤復發率明顯低于對照組(P<0.05)；死亡率兩組無明顯差異(P>0.05)。治療結束后6個月，兩組功能狀況(KPS)、生活質量(QOL)評分無明顯差異(P>0.05)；治療結束后12個月治療組KPS、QOL評分較對照組明顯增高 (P<0.05)。治療結束后6個月、12個月治療組體力狀態(ZPS)評分明顯低于對照組(P<0.05)。兩組患者第2、3、4次化療前比第1次化療前CEA 和CYFRA21-1含量明顯降低(P<0.05)。第4次化療前，治療組CEA水平明顯低于對照組 (P<0.05)。第2、3、4次化療前治療組CYFRA21-1水平均低于對照組(P<0.05)。治療組發生惡心，嘔吐，納差，失眠的人次均明顯低于對照組(P<0.05)；而發生乏力人次兩組無明顯差異 (P>0.05)。結論術后化療聯合3個療程DC-CIK細胞治療可降低NSCLC術后1年腫瘤復發率，降低血清癌性標志物CEA和CYFRA21-1的含量，提高患者生活質量。

肺癌；手術；化療；DC-CIK細胞治療

采用手術為主，放、化療為輔的綜合治療是目前中晚期肺癌最有效的治療手段，但肺癌患者總體5年生存率仍不足15%，其治療給患者帶來極大的毒副作用，嚴重影響了肺癌患者的生活質量。相關研究表明樹突細胞(DC)-細胞因子誘導殺傷(CIK)細胞治療晚期肺癌可明顯提高晚期肺癌患者機體免疫功能，減輕放化療引起的不良反應等〔1，2〕。本文觀察DC-CIK聯合術后化療對非小細胞肺癌(NSCLC)的療效。

1 資料與方法

1.1病例納入和剔除標準 (1) 納入標準：①手術病理證實為NSCLC患者；②臨床TNM分期為Ⅱa～Ⅲa期(2011年UICC標準)；③均實施根治性手術+規范化系統淋巴結清掃術；④45歲≤年齡≤70歲；⑤術后患者一般情況好，臨床判斷能耐受術后輔助化療≥3 w，體力狀況(ZPS)評分≤ 2分，功能狀況(KPS)評分≥70分；⑥預計生存期≥3個月，心、肝、腎功能、造血系統正常；白細胞數≥3.5×109/L，血小板數≥90×109/L， 血清谷丙轉氨酶≤40 IU/L；血清總膽紅素≤18 μmol/L，肌酐≤130 μmol/L；⑦醫護人員知情告知，患者簽署知情同意書。(2) 剔除標準：①實驗期間病情惡化者；患者出現無法耐受的副作用；要求退出治療者；②器官衰竭者；③患有其他獲得性、先天性自身免疫缺陷疾病，或有器官移植史者；④患有不可控制的嚴重感染性疾病者；⑤對本細胞治療中所有生物試劑過敏者；⑥患有或并發T細胞淋巴瘤者。

1.2臨床資料 收集2012年3月至2013年3月遵義醫學院附屬醫院治療的Ⅱa～Ⅲa期NSCLC手術患者79例，根據住院號末尾數隨機分組，奇數設為治療組，偶數設為對照組。對照組僅予術后輔助化療，共40例，男25例，女15例，腺癌16例，鱗癌24例，年齡45～69〔平均(53.50±8.79)〕歲。治療組予術后輔助化療聯合DC-CIK細胞治療3個療程，共39例，男22例，女17例，腺癌16例，鱗癌23例，年齡45～69〔平均(57.23±9.30)〕歲。對照組與治療組性別、年齡、病理分型、臨床TNM分期比較無明顯差異(P>0.05)。

1.3治療前準備 使用COM.TEC血細胞分離機(Fresenius Kabi)采集患者自體外周血單個核細胞(PBMNCs)，立即送細胞制備室。在嚴格無菌條件下，由實驗室技術人員對采集送至臨床級GMP實驗室的患者PBMNCs參照文獻〔3〕及相關標準進行DC-CIK細胞制備，化療前1 d通過細胞分離機與淋巴細胞分離液獲取患者本人PBMNCs。DC培養：經淋巴細胞分離液密度梯度離心獲得PBMNCs，經 RPMI1640培養液洗滌，置于無血清培養基中混懸，在 37℃、5%CO2培養箱中培養 4 h 后加入粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)(1 000 U/ml)和白細胞介素(IL)-4(5 000 U/ml) 繼續培養，每隔2 d換液1次，第5天加入腫瘤壞死因子(TNF)-α(500 U/ml)誘導成熟DC。CIK 細胞培養：分離后淋巴細胞加入重組人干擾素(IFN)-γ(1 000 U/ml)和 10%AB 型人血清RPMI1640培養液，24 h后加入小鼠抗人CD3單抗 (100 ng/ml)、IL-2(1 000 U/ml)，以后隔天半量換液維持培養。DC-CIK細胞聯合培養：收獲第7天DC及CIK細胞按1∶5計數混合培養 3 d，隔天補加IL-2(1 000 U/ml) 培養液。

1.4術后治療方案 (1)對照組：遵抗癌協會NSCLC化療指南〔4〕，采用含鉑二聯方案。具體為：長春瑞濱(上海旭東海普藥業有限公司，生產批號11122534)25 mg/m2靜脈注射，第1、8日；順鉑(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，生產批號：12011023)25 mg/m2靜脈注射，第1～3天，4 w為1個周期，共4個周期。(2)治療組：在對照組治療方案的基礎上，聯合DC-CIK細胞治療。在化療周期間隔第 2、4、6、8、10 d，將 DC-CIK細胞用100 ml 0.9%生理鹽水液回輸體內，每次回輸細胞(4～5)×109個，5 次為1個療程，使用3個療程。治療過程中出現胃腸道反應、骨髓抑制、肝腎功損害等對癥處理。

1.5觀察指標 ①治療結束后，評價完成化療6個月和12個月的生存情況并評價其生活質量，主要包括KPS評分、ZPS評分、生活質量(QOL)評分；②每次化療前檢測血清癌性標志物：所有研究對象抽取空腹肘靜脈血3.0 ml，3 000 r/min離心10 min，取上清待測。采用化學發光法測定血清癌胚抗原(CEA)、CYFRA21-1的含量；③記錄并評估兩組治療過程中發生不良反應的人次數。

1.6統計學方法 采用SPSS19.0軟件進行χ2及t檢驗。

2 結 果

2.1兩組腫瘤復發和死亡情況比較 治療后12個月內，治療組腫瘤復發率明顯低于對照組〔2.6%(1/39) vs 17.5%(7/40)，χ2=4.840,P=0.028〕；治療組死亡率低于對照組〔7.7%(3/39) vs 15.0%(6/40)〕，但無統計學差異(χ2=1.045，P=0.307)。其中治療組1例死于化療后6個月內，2例死于化療后12個月內；對照組4例死于化療后6個月內，2例死于化療后12個月內。

2.2兩組KPS、ZPS、QOL評分比較 化療后6個月兩組KPS、QOL評分無明顯差異(P>0.05)；化療后12個月治療組KPS、QOL評分明顯高于對照組(P<0.05，P<0.01)。化療后6和12個月ZPS評分治療組均明顯低于對照組(P<0.05)，見表1。

2.3兩組化療前血清CEA、CYFRA21-1水平比較 兩組第2、3、4次化療前血清CEA 和CYFRA21-1水平均明顯低于第1次化療前(P<0.05)。第4次化療前，治療組血清CEA水平明顯低于對照組(P<0.05)；第2、3、4次化療前治療組血清CYFRA21-1水平均明顯低于對照組(P<0.05，P<0.01)，見表2。

2.4兩組不良反應比較 治療組發生惡心、嘔吐(34人次)、納差(45人次)、失眠(45人次)人次均明顯低于對照組(67、60、67人次；χ2=7.82,P=0.00;χ2=6.17,P=0.00;χ2=5.03,P=0.02)；而乏力人次數治療組與對照組比較無明顯差異 (33人次vs 29人次，χ2=2.11,P=0.19)。

表1 兩組KPS、QOL、ZPS評分比較分)

與對照組比較:1)P<0.05，2)P<0.01

表2 兩組不同時點化療前血清CEA及CYFRA21-1水平比較

與本組第1次化療前比較:1)P<0.05；與對照組同一時點比較:2)P<0.05,3)P<0.01

3 討 論

DC-CIK細胞在臨床應用中特別是對于手術后的癌癥患者，清除殘留極微轉移病灶，防止癌細胞的擴散和復發，提高患者的自身免疫能力等具有重要作用〔5〕，廣泛應用于肝癌、食管癌、直腸癌、乳腺癌、腎癌、宮頸癌、卵巢癌、白血病等惡性腫瘤的術后治療中〔6～9〕。研究表明〔10〕，化療聯合DC-CIK治療NSCLC的有效率高達 41.6%～42.9%。本研究結果顯示，DC-CIK聯合化療治療NSCLC的復發率明顯低于對照組與既往相關研究報道一致〔11〕，其可能的機制是：CIK 細胞是人PBMNCs在體外經多種細胞因子刺激后獲得一群異質性細胞，該細胞表面可以表達 CD3和CD56 這2種膜蛋白分子，兼有T淋巴細胞溶瘤活性和NK細胞非主要組織相溶性復合物限制性殺瘤特點。CIK細胞體外培養細胞表型發生變化，其細胞毒活性與增殖能力大為增強，且對人體骨髓干細胞和造血祖細胞幾乎沒有毒性，因而在腫瘤生物治療上表現出強大優勢。CIK細胞進入體內活化后可以分泌 IL-2、IL-6、TNF-α等多種細胞因子，此類因子可直接發揮細胞毒作用，并可誘導癌細胞表達 Fas 和 FasL 細胞表面分子，加速細胞凋亡。體外實驗表明 CIK 細胞能誘導并加速人肺癌細胞株A549早期凋亡〔12〕。CIK 細胞在體內受到其他因子刺激后，可以將胞質顆粒釋放到胞外，而促進癌細胞裂解。DC是目前功能最強專職抗原提呈細胞，成熟DC可通過Ⅱ型組織相容性抗原等途徑呈遞腫瘤抗原，誘導特異性免疫反應，抵制腫瘤細胞免疫逃逸。它既可有效誘導靜止T細胞增殖，也可促進細胞毒性T淋巴細胞和輔助性T淋巴細胞生成〔13〕。將具有腫瘤抗原提呈能力 DC與細胞毒效應CIK細胞聯合培養，理論上可明顯提高CIK細胞毒活性。肺癌患者外周血清CEA、CYFRA21-1水平的連續動態監測對肺癌的轉移和預后判斷有一定臨床意義，其化療前、后血清中含量變化與治療效果密切相關〔14〕。腫瘤患者生活質量的評價已成為評價腫瘤患者治療療效的重要標準〔15〕。本研究顯示Ⅱa～Ⅲa期NSCLC患者術后化療聯合3個療程DC-CIK細胞治療，可提高肺癌患者綜合治療效果。

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R73

A

1005-9202(2017)24-6118-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.049

貴州省省長資金臨床應用課題(黔省專合字號2012107號)

1 遵義醫學院附屬醫院胸心血管外科

劉達興(1970-)，男，碩士，主要從事心臟血管外科研究。

姜海燕(1986-)，女，碩士，主要從事肺癌的診斷與治療研究。

〔2016-07-19修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)