2017年春季成都市豬瘟免疫抗體監(jiān)測與分析

李俐睿+李敏+周瀟瀟+李桂黎+肖金鵬+楊澤曉+岳建國

摘要 為評估成都市豬瘟疫苗接種的免疫效果，采用ELISA方法對從成都市15個(gè)管轄區(qū)（市）縣規(guī)模化豬場、散養(yǎng)戶和屠宰廠采集的910份豬血清樣品進(jìn)行了豬瘟病毒免疫抗體的檢測。結(jié)果表明，規(guī)模化豬場、散養(yǎng)戶和屠宰廠受檢樣品的豬瘟病毒免疫抗體合格率分別為95.71%、99.29%、89.76%，免疫抗體平均合格率為94.07%，散養(yǎng)戶豬瘟病毒免疫抗體合格率稍高于規(guī)模化豬場。

關(guān)鍵詞 豬瘟；免疫抗體；監(jiān)測；四川成都；2017年春季

中圖分類號 S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）22-0228-02

Abstract In order to evaluate the immune effect of swine fever vaccine in Chengdu City，the swine fever virus immune antibody of 910 samples which collected from large-scale pig farms，scatter-feed households and slaughterhouses were detected by ELISA method.The results showed that the qualified rate of swine fever virus immune antibody of the detected samples collected from large-scale pig farms，scatter-feed households and slaughterhouses were 95.71%，99.29% and 89.76% respectively，the average qualified rate of immune antibody was 94.07%，and the qualified rate of swine fever immune antibody of the scatter-feed household was slightly higher than the large-scale pig farms.

Key words swine fever；immune antibody；surveillance；Chengdu Sichuan；spring of 2017

豬瘟俗稱“爛腸瘟”，是一種由豬瘟病毒引起的具有高度傳染性疫病，致死率高，是威脅養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病之一。其臨床典型特征是全身皮膚、漿膜、黏膜和內(nèi)臟器官有不同程度的出血，而現(xiàn)在臨床上的普遍情況是非典型化的、亞臨床感染、持續(xù)感染及隱性感染等[1-2]。豬瘟被國際獸醫(yī)局列為A類傳染病[3]，我國將其列為一類疫病。

為有效做好豬瘟的防疫工作，成都市在每年2月和8月為管轄的15個(gè)區(qū)（市）縣發(fā)放豬瘟疫苗，進(jìn)行春、秋2季集中免疫。為切實(shí)了解2017年春季豬瘟疫苗免疫實(shí)施情況和評估免疫效果，根據(jù)免疫計(jì)劃要求，于2017年5月對所有發(fā)放疫苗的區(qū)（市）縣的部分規(guī)模場、散養(yǎng)戶和屠宰廠采集血清樣品，采用豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒對采集樣品進(jìn)行免疫抗體水平的檢測。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

檢測試劑為武漢科前生物股份有限公司豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒，批號為160507。

樣品血清樣品采集自成都市管轄的15個(gè)區(qū)（市）縣的規(guī)模養(yǎng)殖豬場、散養(yǎng)戶和屠宰廠，共計(jì)910份樣品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 準(zhǔn)備。使用前將所有試劑平衡至室溫。用樣品稀釋液2倍稀釋待檢血清和陽性、陰性對照；搖勻洗滌液后，用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

1.2.2 檢測步驟。每孔加入稀釋好的洗滌液200 μL到抗原包被板，靜置1 min倒掉液體，洗板3次，最后一次在吸水紙上拍干。再分別將稀釋好的待檢血清和對照各取100 μL加入到抗原包被板孔中，陰性對照和陽性對照各設(shè)2孔，輕輕振勻孔中樣品，置37 ℃ 溫育2 h。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200 μL，靜置1 min倒掉，洗滌3次，最后在吸水紙上拍干。每孔加酶標(biāo)記物100 μL，置37 ℃ 溫育30 min。洗滌5次，方法同上。每孔先加底物液A（50 μL）、再加底物液B（50 μL），混勻，室溫（20～25 ℃）避光顯色10 min。每孔加終止液（50 μL），10 min內(nèi)測定結(jié)果。

1.2.3 檢測結(jié)果判定。在酶標(biāo)儀上測各孔的OD630 nm值。試驗(yàn)成立的條件為陰性對照平均OD630 nm值≥0.500，陽性對照的阻斷率>50%。

阻斷率（%）=（1-S/N）×100

式中，S為樣品孔OD630 nm值，N為陰性對照孔平均OD630 nm值。樣品阻斷率≤30%，該樣品判為豬瘟病毒抗體陰性；樣品阻斷率≥40%，該樣品判為豬瘟病毒抗體陽性；樣品阻斷率在30%～40%之間，該樣品判為可疑。

2 結(jié)果與分析

從表1可以看出，2017年春季成都市共檢測免疫豬瘟血清910份，合格856份，平均合格率為94.07%。在210份規(guī)模場豬血清中，合格201份，平均合格率為95.71%。在280份散養(yǎng)戶豬血清中，合格278份，平均合格率為99.29%。在420份屠宰廠豬血清中，合格377份，平均合格率為89.76%。

3 結(jié)論與討論

豬瘟是一類動(dòng)物疫病，無有效治療方法，制定科學(xué)的免疫程序并按計(jì)劃接種疫苗是防控該病的主要方針。為評估成都市春防后豬瘟病毒免疫的效果，對910份不同豬群來源豬血清樣品中豬瘟病毒的抗體進(jìn)行了檢測，其中檢出陽性856份，平均免疫合格率為94.07%，符合農(nóng)業(yè)部規(guī)定要求的免疫抗體平均合格率在70%以上，在臨床上可以對豬群產(chǎn)生相應(yīng)的免疫保護(hù)作用，表明成都市在春季防疫工作中對豬瘟的強(qiáng)制免疫工作基本達(dá)到了預(yù)期的效果。endprint

研究表明，散養(yǎng)戶的免疫效果要略好于規(guī)模場，屠宰廠血清樣品豬瘟病毒免疫抗體陽性率最低，僅有89.76%。據(jù)了解，在發(fā)放疫苗后，散養(yǎng)戶對政府采購的疫苗使用率要高于規(guī)模場，并且更樂意接受專業(yè)指導(dǎo)并科學(xué)地接種疫苗，而規(guī)模場一方面可能使用自行購買的豬瘟疫苗，另一方面隨著近幾年豬瘟防控措施的實(shí)施并得到了較好控制，對豬瘟疫苗接種工作重視程度有所下降。同時(shí)需要考慮的是，該試劑盒中抗原包被板上的E2蛋白并不能選擇性地結(jié)合由疫苗免疫產(chǎn)生的豬瘟抗體，對由野毒感染所產(chǎn)生的豬瘟抗體同樣能反應(yīng)，因而這可能是散養(yǎng)戶的免疫效果要偏高于規(guī)模場的原因之一。屠宰廠豬只免疫抗體可能與抗體的自然消長有關(guān)。此次監(jiān)測結(jié)果也提示養(yǎng)殖場在自行購買商品豬瘟疫苗時(shí)要注意疫苗的質(zhì)量、使用和保存，同時(shí)注意免疫抑制疫病的防控，以減少免疫失敗的發(fā)生幾率。

在加強(qiáng)豬瘟診斷和免疫監(jiān)測的同時(shí)，必須從源頭控制，從種源入手扎實(shí)抓好種豬場豬瘟的防疫工作。為避免免疫失敗，淘汰隱性感染或潛伏感染的種公豬和母豬，特別是母豬一旦感染豬瘟病毒會(huì)發(fā)生水平和垂直傳播，因而從源頭上消除引起仔豬先天感染和免疫耐受的傳染源特別重要[4-6]。同時(shí)制定科學(xué)合理的免疫程序，適當(dāng)加大免疫劑量[7-9]，免疫仔豬時(shí)要排除母源抗體的感染，確定合適的首免日期，保證豬群具有抵抗豬瘟病毒感染的抗體水平。加強(qiáng)飼料管理，優(yōu)先選用配合飼料，保證豬群的營養(yǎng)全面，使機(jī)體擁有較強(qiáng)的免疫力[10]。豬場必須實(shí)施嚴(yán)格的生物安全措施，定期對圈舍、墊草、糞水和用具等進(jìn)行徹底消毒；來訪人員和工作人員進(jìn)入豬場必須經(jīng)過淋浴等消毒程序；禁止外來人員或車輛進(jìn)入豬場。需引進(jìn)豬時(shí)，必須做好隔離觀察和免疫檢測[11-12]。

本次監(jiān)測的910份不同來源豬群的血清樣品中抗體陽性率幾乎都在90%以上，但是尚無100%免疫合格率豬群，因而需要重視免疫密度，提高防止野毒感染的幾率。鑒于豬瘟的高度接觸性的性質(zhì)和對養(yǎng)殖業(yè)的巨大危害，仍需認(rèn)真分析豬瘟防疫過程中出現(xiàn)的各種問題，重視和加強(qiáng)豬瘟的防控工作，切實(shí)根據(jù)農(nóng)業(yè)部農(nóng)醫(yī)發(fā)[2017]10號文件中《國家豬瘟防治指導(dǎo)意見》的防治目標(biāo)，到2020年底，成都市所有豬場和部分地區(qū)達(dá)到豬瘟凈化標(biāo)準(zhǔn)，并進(jìn)一步擴(kuò)大豬瘟凈化區(qū)域范圍。在平時(shí)開展的流行病學(xué)調(diào)查工作中，仍需繼續(xù)在各個(gè)區(qū)（市）縣選擇一定數(shù)量的養(yǎng)殖場、屠宰廠和交易市場作為定點(diǎn)監(jiān)測點(diǎn)，持續(xù)開展豬瘟疫情監(jiān)測工作。同時(shí)，定期對區(qū)（市）縣的基層防疫員進(jìn)行技術(shù)培訓(xùn)，對養(yǎng)殖戶推廣最科學(xué)、最新的免疫程序和豬瘟的防疫知識，保障成都市畜牧業(yè)生產(chǎn)的健康發(fā)展。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 杜念興.豬瘟的回顧與展望[J].中國畜禽傳染病，1998（9）：317-319.

[2] 寧宜寶，王琴，趙耘.豬瘟病毒持續(xù)感染與豬瘟預(yù)防控制[J].中國獸藥雜志，2005，39（5）：12-13.

[3] 楊克禮，徐滌平，梁望旺，等.豬瘟病毒檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（16）：4853-4854.

[4] 王克領(lǐng)，郎利敏，熊華東，等.豬瘟免疫情況調(diào)查及防制對策[J].養(yǎng)豬，2004（6）：31-32.

[5] 范雅芬，柳林.規(guī)模化豬場豬瘟的預(yù)防與控制[J].畜牧與飼料科學(xué)，2010，31 （10）： 168-169.

[6] 諶靈，孫寶權(quán)，劉二松.規(guī)模化豬場豬瘟抗體跟蹤監(jiān)測結(jié)果與分析[J].中國獸醫(yī)雜志，2007，12（43）：39-41.

[7] 張玉梅，陳平.豬瘟的流行特點(diǎn)及防制中存在的問題和對策[J].畜禽業(yè)，2006（1）：38-40.

[8] 汪令波.提高豬瘟疫苗免疫效果的措施[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2006（8）：144.

[9] 陳田梅，王榮祥，王強(qiáng)，等.豬瘟防制中存在的問題和對策[J].畜牧與飼料科學(xué)，2009，30（1）：111-113.

[10] 葉秀娟，付云玲，章紅兵.規(guī)模豬場豬瘟發(fā)生的新特點(diǎn)和防制[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2005（5）：57-59.

[11] 陳遠(yuǎn)濤，麥小明，李松坤.豬瘟的綜合防制[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2008（24）：247-248.

[12] 杜森有，朱景利，王文學(xué).陜西省安塞縣豬瘟免疫情況調(diào)查及防制措施[J].畜牧與飼料科學(xué)，2007，28（4）：67-68.endprint