研究核酸檢測法對血液標本內乙肝病毒的檢測價值

師延娟

（青海省海東市中心血站，青海 海東 810600）

酶聯免疫吸附法（ELISA）是常用血液檢測方法，通過酶復合物與抗體相結合而顯色，具有良好的保持免疫活性的功能，且靈敏性較高，價格低廉等優勢在臨床中應用廣泛。核酸檢測法（NAT）可有效縮短檢測窗口期，針對隱匿性乙肝病毒具有良好的檢測效果，還可降低輸血時病原體的傳播風險[1]。為明確兩種檢測方式對乙肝病毒診斷效果，特開展相應研究，現匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

于2018年1月至2018年5月隨機抽取1128份無償獻血者的血液標本，ALT化學檢測結果顯示初篩合格。

1.2 儀器設備與方法

檢測方法：將每份標本平均分為兩份，一份裝入抗凝真空管中行ELISA檢測；一份裝入分離膠抗凝真空管中行NAT檢測。每個試管均貼唯一條形碼。使用離心機對標本進行離心處理，后將其放置于溫度為4℃的環境中靜置待檢，所有標本檢測均需于48 h內完成。

試劑與儀器：ELISA檢測設備選擇瑞士哈密頓公司生產的全自動酶聯免疫分析儀；NAT檢測設備選擇美國羅氏公司生產的實時熒光定量檢測系統。乙肝病毒檢測試劑選擇廈門英科新創公司生產的常規血清篩查試劑盒及配套試劑。

1.3 質量控制方法

標本采集后直至開展NAT檢測過程中，按照生化實驗室SOP標準進行相關操作，根據試劑盒內標、實驗室內質控品、檢測結果陰陽性質控品全程對NAT操作質量進行控制。同時本次研究所在實驗室為定期參加國家衛生部門臨床檢驗中心開展的國家國際輸液感染防控質量評價環節，結果顯示質量測評合格。同時參與國家血站核酸擴增檢測相關實驗室質量評價環節，結果顯示質量測評合格。

1.4 觀察指標

①記錄兩種檢測方法對血液標本中乙肝病毒的陽性檢出率，以1g HBV-DNA水平超過2.7可標記為陽性[2]，乙肝病毒HBV標志物主要包含乙型肝炎表面抗原及抗體（HBsAg、HBsAb）、乙肝e抗原及抗體（HBeAg、HBeAb）以及乙肝核心抗體（HBcAb）。②同時記錄并比較兩種檢測方法對乙肝病毒檢測的窗口期。

1.5 統計學方法

本次實驗過程中擇取SPSS 17.0版本的統計學軟件對數據進行分析，計量資料以“±s”表示，采用t檢驗；計數資料以百分數（%）表示，采用x2檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩種檢測方法陽性率比較

ELISA法陽性標本10份，陽性率（0.89%）；NAT法陽性標本16份，陽性率（1.42%），組間數據差異有統計學意義（x2=1.4008，P＞0.05）。

其中，ELISA法檢測呈陽性，而NAT檢測呈陰性標本3份，ELISA法檢測呈陰性，而NAT檢測呈陽性標本5份。

2.2 兩種檢測方法敏感性、特異性比較

ELISA法敏感性96.81%（1092/1128），NAT法敏感性98.49%（1111/1128），組間數據差異有統計學意義（x2=6.9752，P＞0.05）；ELISA法特異性96.54%（1089/1128），NAT法敏感性98.22%（1108/1128），組間數據差異有統計學意義（x2=6.2830，P＞0.05）。

2.3 兩種檢測方法窗口期及漏診率比較

ELISA法窗口期（35.12±1.08）d，NAT法窗口期（20.35±1.04）d，組間數據差異有統計學意義（T=330.8544，P＜0.05）。

ELISA法漏診率0.62%（7/1128），NAT法漏診率0.09%（1/1128），組間數據差異有統計學意義（x2=4.5160，P＞0.05）。

3 討 論

乙肝病毒（HBV）可通過血液傳播，患者感染后可引發乙型肝炎疾病，屬于病毒性傳染疾病之一[3]。大年我國HBV流行度較高，受到多種因素的影響乙肝在我國發病率有著不斷上升的趨勢。HBV傳播預防的有效措施是加強獻血人群的血液篩查，其中ELISA是檢測HBV常見方法，主要以HBsAg為常規檢測指標，操作簡單、檢測快捷，價值檢測費用較低等優勢具有廣泛的應用。但是HBV感染有一定的隱匿性和窗口期，因此其漏檢率較高。而NAT是血清學檢測的補充方法之一，屬于分子生物學診斷方法。NAT可對HBV-DNA含量進行測定，以直觀對感染情況進行反映，具有較高的靈敏度，在獻血人群血液篩查中的應用較多[4]。

在本次研究中，隨機抽取1128份血液標本進行ELISA及NAT檢測，結果顯示二者HBV陽性率無顯著差異，而NAT相比ELISA具有更高的檢測敏感性和特異性，窗口期更短，可見NAT的應用價值更高。其中ELISA法檢測呈陽性，而NAT檢測呈陰性標本3份，造成這種情況的原因可能與患者在臨床治療過程中，使用藥物方案，導致其血液中有一定量的HBsAg殘留所致，因為HBsAg中無病毒DNA，且其傳染性偏低，復制率不高，因此檢測在NAT中呈陰性[5]。另有ELISA法檢測呈陰性，而NAT檢測呈陽性標本5份，經分析造成該種情況出現的原因，可能與HBV早期感染時只有較少的病毒數量，ELISA法檢測指標為HBsAg，對其無法檢測，而在血清中存在一定的DAN，因此導致NAT檢測結果呈陽性[6]。有研究結果顯示，NAT檢測可有效縮短窗口期，在本次研究中，該結論也被證明。

綜上，NAT及ELISA針對HBV陽性具有良好一致性，但是相對來講NAT可靠性更高，針對HBV傳播具有良好的控制效果，因此可在各地區血液篩查中開展NAT檢測，有效控制乙肝發病率。