拉喹莫德對中樞神經系統脫髓鞘小鼠胼胝體區少突膠質細胞的保護作用

劉思含，耿德勤，吳明鳳，劉芷含

雙環己酮草酰二腙(CPZ)誘導的脫髓鞘動物模型是CNS脫髓鞘疾病常見的研究模型之一。拉喹莫德(LAQ)是一種新型的免疫調節藥物，近年來它被建議作為多發性硬化治療的口服制劑。過去動物研究表明，它有抗炎、抑制抗原表達的基因等作用，但目前拉喹莫德作用機制尚未充分理解。研究[1-2]發現，拉喹莫德能減輕實驗性變態反應性腦脊髓炎(EAE)及CPZ造模小鼠胼胝體區髓鞘脫失癥狀，但目前它保護神經功能的機制尚不清楚。本研究通過應用拉喹莫德，觀察其對CPZ誘導的CNS脫髓鞘小鼠胼胝體區髓鞘堿性蛋白(MBP)、膠質纖維酸性蛋白(GFAP)及其分泌的TNF-α和IL-1β表達的影響，以探討LAQ對髓鞘保護的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物及分組 80只健康雄性C57BL/6小鼠，體質量23～25 g，由徐州醫科大學實驗動物中心提供。隨機分為正常對照組(20只)、CPZ模型組(40只)及LAQ處理組(20只)。

1.1.2 主要試劑和儀器 CPZ(美國Sigma公司)；LAQ (ABR-215062)；羊血清(北京中杉金橋生物技術有限公司)；鼠抗MBP(美國Abcam公司)；雞抗GFAP(美國Abcam公司)；IL-1β 小鼠ELISA試劑盒(美國Abcam公司)；TNF alpha小鼠ELISA試劑盒(美國Abcam 公司)；冰凍切片機(德國Leica公司)；正置顯微鏡(日本Olympus BX60)。

1.2 方法

1.2.1 CPZ模型及藥物干預方法 將CPZ摻入正常飼料組成0.3%的混合粉末。正常組給予正常飼料喂養，CPZ組給予喂養含有0.3% CPZ混合飼料，LAQ處理組喂食0.3% CPZ混合飼料同時給予LAQ灌胃(25 mg/kg)，每日1次，共8周。

1.2.2 MBP及GFAP免疫熒光檢測 采用免疫熒光法檢測腦組織MBP及GFAP陽性細胞分布。制備小鼠脫髓鞘后, 將CPZ組各時間點(0 d, 3 d, 7 d, 2周, 4周, 8周)小鼠(均隨機取3只)經10%水合氯醛(1 ml/kg)腹腔注射麻醉，迅速開胸暴露心臟。……