綠色蔬菜中常用維生素C檢測方法比較及優化策略研究

□ 盧 蕊 朱 山 曾慶真 張 乾 菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院

維生素C是一種結構簡單的維生素，性狀表現為無色結晶，能夠溶于水。維生素具有非常多的效用，能夠有效地防治壞血病，因此也稱作抗壞血酸。維生素有助于激發巰基酶的活性，并且維持谷胱甘肽的還原狀態，從而實現解毒的作用[1]。另外，維生素C能夠將人體中的膽固醇轉變為膽汁酸，降低人體的膽固醇含量，還能夠有效預防消化性潰瘍等疾病[2]。

綠色蔬菜中維生素C的檢測方法較多，有滴定法、光度分析法、高效液相色譜法等。目前，最為常見的檢測方法為滴定法和高效液相色譜法，但是根據相關報道可知，滴定法和高效液相色譜法檢測維生素C時，試劑、待測液的保存以及提取劑的差異會對檢測結果造成極大的影響[3]。本文以綠色蔬菜黃瓜作為材料，采取滴定法和高效液相色譜法對維生素C進行檢測，對檢測條件的設置以及樣液的保存和提取等進行對比研究，從而為滴定法與高效液相色譜法對維生素C檢測的操作和使用提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料、試劑

材料：本次研究選擇2017年7月期間市場出售的黃瓜作為實驗材料。

試劑：抗壞血酸（標準品質）、2,6-二氯淀粉鈉鹽（分析純）、碳酸氫鈉（分析純）、草酸（分析純）、偏磷酸（分析純）、醋酸（分析純）、活性炭、甲醇（色譜純）以及超純水。

儀器：國產電子分析天平、國產搗碎機、國產超聲波清洗儀、國產恒溫水浴鍋、國產高速離心機、國產過濾裝置以及美國產高效液相色譜儀。

1.2 方法

1.2.1 2，6-二氯靛酚鈉滴定法

2，6-DCIP溶液的制備：準備52 mg的碳酸氫鈉溶于200 mL的沸水中，隨后加入50 mg的2，6-二氯靛酚，在冷卻后進行過濾，2,6-二氯靛酚鈉溶液存于棕色容量瓶中，并且存放于冰箱。

標定：在滴定前，用濃度為1 mg/mL的維生素C標準液進行標定。操作時，在1 mL維生素C中滴入濃度為2%的草酸9 mL，充分均勻后以制備的2,6-DCIP溶液滴定，當顏色變為紅色且持續15 s顏色不退時，記錄下2,6-DCIP溶液的用量，計算維生素C的量。

樣品測定：選取待測樣液10 mL，用制備的2,6-DCIP滴定，當顏色變為紅色且持續15 s顏色不變時，記錄下2,6-DCIP溶液的用量，重復操作兩次。另外，選擇濃度為2%的草酸10 mL進行空白對照滴定，同樣操作兩次。

維生素C含量的計算：根據滴定中2,6-DCIP溶液的用量計算出維生素C的含量，公式如下。

公式中，VA表示樣品兩次滴定時，2,6-DCIP溶液使用的平均體積（mL）；VB表示草酸兩次空白滴定時，2,6-DCIP溶液使用的平均體積（mL）；C是指樣品提取液定容體積（mL）；T值表示每毫升2,6-DCIP對應的維生素C的mg數；D表示滴定時樣液的體積（mL）；W表示被測樣品的質量（g）。

1.2.2 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法檢測的條件為C18（5 μm，4.6 mm× 250 mm）色譜柱、濃度為0.1%草酸作為流動相、流速控制在每分鐘1 mL，同時柱溫控制為30 ℃，檢測的波長為254 nm。準備6份濃度為1 mg/mL的維生素標準液，分別稀釋成濃度為0.025、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3 mg/mL的維生素C使用液，分別用HPLC法進行檢測，每次檢測的樣液容量為20 μL，分別記錄圖譜的峰面積數據，計算維生素C的含量。

2 結果

2.1 2,6-DCIP法檢測結果

2,6-DCIP法檢測后，黃瓜中每100 g樣品中，維生素C的平均含量為1.03 mg；另外，檢測的回收率為103.7%。

2.2 HPLC法檢測結果

HPLC法檢測后，黃瓜中每100 g樣品中，維生素C的平均含量為1.06 mg；另外，檢測的回收率為104.1%。

3 討論

3.1 維生素C含量檢測方法比較

綠色蔬菜中常用維生素C含量的檢測方法較多，但是最為常見的主要包括2,6-DCIP法和HPLC法。在本次研究中，采用上述兩種方法對黃瓜中的維生素C含量進行檢測。兩種檢測方法結果均能夠滿足測定要求，但HPLC法精準度高于2,6-DCIP法。

3.2 維生素C檢測方法的優化

首先，試劑的存放時間會對維生素C含量檢測的結果造成影響，當維生素C標準液存放時間超過48 h后，維生素C含量降低，因此標準液需要在48 h內完成檢測。另外，2,6-DCIP溶液超過12 d后，維生素C含量值下降，因此需要在12 d內使用。第二，待測液保存條件會對維生素C的結果造成影響。存放時間越長，維生素C含量越低。因此，待測液制備后要立即測定，時間不能夠超過1.5 h；第三，提取方法對維生素C含量的影響。草酸的濃度會影響維生素C的測定，因此草酸濃度要控制在2%。同時，超聲波提取和常溫振蕩提取的時間都要控制，時間越長，測定的含量越低。因此，樣品提取后應該快速定容、過濾，盡快檢測。

[1]國增超.果蔬中維生素C含量檢測方法的述評[J].農業與技術,2016(5).

[2]謝軼,蘇冰霞,周鵬.高效液相色譜法測定不同品種番木瓜果實中維生素C含量[J].熱帶農業科學,2016(2).

[3]何保山,張長輝,左春艷,等.食品中維生素C含量檢測研究進展[J].江西農業學報,2010(10).