等效色譜柱選擇在大黃和補骨脂多成分高效液相色譜分析中的應用

張傳燕

（宜賓市第三人民醫院藥劑科 四川 宜賓 644000）

高效液相色譜法，簡稱HPLC，是現今各國藥典收錄過程中最常用的分析方法，因為其高效、靈敏、選擇性好等諸多優點被廣泛應用于藥物和制劑的含量測定以及雜質的分析過程中。就目前的實際情況而言，在市場中，色譜柱是多種多樣的，不僅品牌繁多，而且種類繁多，而在色譜柱的選擇過程中對某種具體樣品進行具體分析時，也往往因為色譜柱在選擇性上存在差異，最終導致在溶質的保留值、色譜峰之間的分離度以及在色譜峰的出峰順序都存在較大的差異。由此可見，在高效液相色譜法中，對色譜柱進行選擇是尤為重要的，直接關系到中藥成分分析的好壞以及成敗。

1.資料和方法

1.1 一般資料

儀器：Agilent1260高效液相色譜儀、Waterse2695高效液相色譜儀、Agilent6320Ion Trap型質譜儀。

對照品：蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃酚、補骨脂素、異補骨脂素、大黃對照藥材、補骨脂對照藥材等[1]。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 大黃：將乙腈作為流動相A，將0.1%磷酸水溶液作為B，梯度洗脫為：0～50分鐘，95%A→64%A；50～73分鐘，64%A→15%A；73～74分鐘，15%A→95%A；74～80分鐘，95%A，其流速為1.0毫升/每分鐘，檢測波長為254、431nm，柱溫為40攝氏度，進樣量在10μL。

補骨脂：將甲醇作為流動相A，將水作為B，梯度洗脫為：0～20分鐘，50%A→70%A；20～45分鐘，70%A→85%A；45～50分鐘，85%A→90%A；50～60分鐘，90%A，其流速為1.0毫升/每分鐘，檢測波長為308nm，柱溫為30攝氏度，進樣量在10μL[2]。

1.2.2 制備對照品溶液 首先，取適量的對照品，其次，在其中加入甲醇，使其變成1毫升且含有蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃酚各16μL，另外，番瀉苷A、HBGG等各8μL。最后，在對照品溶液中加入乙醇，制成每1毫升對照品中就含有10μL補骨脂素、異補骨脂素的溶液。

1.2.3 植被供試品溶液 大黃：取0.5克的大黃對照藥材，將其放入錐形瓶中，在其中加入50毫升有70%乙醇，再采用超聲對其進行30分鐘的處理（300w，45kHz），最后，采用0.45μL的濾膜進行過濾，取續濾液即可得到[3]。

補骨脂：取0.5克的大黃對照藥材，將其放入錐形瓶中，在其中加入25毫升70%乙醇，再采用超聲對其進行30分鐘的處理（300w，45kHz），最后，采用0.45μL的濾膜進行過濾，取續濾液即可得到[4]。

2.結果

色譜柱的相似度越高，對大黃的分離效果也就越弱，對補骨脂的分離規律也就越不明顯。

3.討論

在USP法中，高效液相色譜在進行性能評價時，一般采用NIST標準參照物來評價色譜柱，具體而言，參照物可包括尿嘧啶、甲苯、乙苯、阿米替林等。而通過一系列的測試，最終得出了色譜柱的四個參數，即：疏水性、螯合性、硅醇基活性、空間選擇性。而在對這四個參數進行比較時，一般采用5個值來進行表示，即：Hy、CTF、CFA、TFA、BD，分別表示為乙苯的容量因子、醌茜的拖尾因子、阿米替林的容量因子、阿米替林的拖尾因子、結合密度。

通過上文的應用試驗證明，色譜柱的相似度越高，對大黃的分離效果也就越弱，對補骨脂的分離規律也就越不明顯。而通過對大黃、補骨脂的分析，可以對以下三點進行明確，即：

（1）現今所存在的色譜柱選擇方法可以應用在中藥分析中，不僅可以提升分析方法的重現性，而且可以實現實驗室數據的傳遞。

（2）色譜柱的評價較為復雜，且分離效能不僅與色譜柱本身存在聯系，而且和藥材的性質存在一定的聯系。

（3）色譜柱選擇方法不夠完整，有待改善，一種色譜柱選擇方法也難以適應多種中藥材的分析。

[1]童杰文，張盛，李娟，李佳銀，蔡燕南，李銀花.高效液相色譜法測定補骨脂中補骨脂素和異補骨脂素的分析[J].農產品加工，2015，(02):44-46.

[2]葉六平，孫磊，王明娟，金紅宇，汪暐東，馬雙成.等效色譜柱選擇在大黃和補骨脂多成分高效液相色譜分析中的應用[J].藥物分析雜志，2015，35(06):945-953.[2017-08-04].DOI：

[3]陳永剛，張培影，馬傳學，吳世強，劉大躍.五參二連顆粒高效液相色譜指紋圖譜研究及多成分定量分析[J].中國醫藥工業雜志，2013，44(06):604-608.[2017-08-04].

[4]賴正權，易宇陽，廖慧君，蘇冀彥，廖祝元，林吉，蘇子仁.苦木注射液高效液相色譜指紋圖譜研究及多成分定量分析[J].中國中藥志，2011，36(13):1739-1743.[2017-08-04].