CLIP3啟動子區(qū)3bp indel與大腸癌發(fā)生相關(guān)性研究

王會平 楊 雪 朱占勝

1徐州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)教研室 江蘇省徐州市 221004 2徐州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 江蘇省徐州市 221004 3徐州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室 江蘇省徐州市 221004

結(jié)直腸癌（CRC）是世界第三大最常見的癌癥，其死亡率在惡性腫瘤中列第三位[1]，目前CRC發(fā)病機(jī)制仍未完全揭示，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)其與遺傳相關(guān)[2]。凋亡是基因調(diào)控的程序化細(xì)胞死亡，細(xì)胞增殖與細(xì)胞凋亡的比例決定腫瘤的生長。TNF-α信號途徑是細(xì)胞凋亡的主要途徑之一。在CRC發(fā)生過程中，CLIP3通過調(diào)控RIP1的泛素化參與激活TNF-α信號途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生[3]，因此CLIP3與CRC的關(guān)系逐漸成為目前研究的熱點(diǎn)。本項(xiàng)目首次發(fā)現(xiàn)并提出了CLIP3基因啟動子區(qū)一個3-bp插入/缺失多態(tài)性（rs372459950）和CRC患病風(fēng)險相關(guān)聯(lián)，本研究對于CRC的預(yù)測和防治具有重要意義。本課題組調(diào)查了徐州市第二醫(yī)院就診的CRC患者與健康對照體檢人群的rs372459950，試探討其與CRC患病風(fēng)險的相關(guān)度。

1 對象與方法

1.1 研究對象

CRC患者450例，男289例，女161例，年齡51.6±10.4歲，無高血壓、糖尿病、嚴(yán)重肝腎疾病及心肺功能不全史，收集2015年5月至7月在徐州市二院入院治療的CRC患者，患者符合我國衛(wèi)生部2010年關(guān)于結(jié)直腸癌的命名和診斷標(biāo)準(zhǔn)。健康對照799例，選自健康體檢人群的隨機(jī)個體，男512例，女287例，年齡52.1±10.3歲，無相關(guān)病史。受試對象為徐州地區(qū)本地人群、漢族并且沒有血緣聯(lián)系。

1.2 標(biāo)本收集

各受試對象均抽取靜脈全血1.5 mL，采用DNA抽取試劑 (Qiagen)從全血標(biāo)本提取DNA留用。

1.3 基因分型

基因分型采用基因測序的方法，抽提DNA的樣本送上海生工公司測序。測序結(jié)果比照NCBI SNP database確定樣本基因型，最終計(jì)數(shù)由不同二個實(shí)驗(yàn)者進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用Χ2檢驗(yàn)分析除年齡外臨床資料各因素差別；年齡兩組差別采用雙側(cè)t檢驗(yàn)；使用Χ2檢驗(yàn)分析受試兩組的基因型和等位基因頻率差別；遺傳多態(tài)性與CRC患病風(fēng)險的相關(guān)度用邏輯回歸分析進(jìn)行分析，選取校正臨床資料各因素后的比值比（OR）和95%置信區(qū)間（CI）表示， P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 受試對象各組臨床資料

450例CRC樣本和799例健康對照樣本人口學(xué)資料情況比較（見表1），數(shù)據(jù)提示各臨床資料間無明顯差別（P＜0.05）。

表1：病例組和對照組的臨床資料

2.2 rs372459950基因座分型結(jié)果

經(jīng)測序比對，分別得到插入/缺失（Ins/Del），插入/插入Ins/Ins），缺失/缺失（Del/Del）三種基因型。我們觀察到缺失的堿基序列為CTT，對照組基因座基因型分布頻率 Phwe＞0.05。

2.3 CLIP3基因插入/缺失多態(tài)性頻率分布

研究中插入缺失多態(tài)的基因型及等位基因頻率分布特點(diǎn)見表2，從表中可以看出，Del/Del基因型頻率在病例組中的頻率為8.2%，而在正常對照組中的頻率為4.8%，顯然病例組中Del/Del基因型頻率高于正常對照組。

表2：CLIP3基因插入/缺失多態(tài)基因型分布

2.4 多態(tài)性與CRC易感性分析

邏輯回歸分析（校正各臨床資料因素）結(jié)果表明：帶有雜合子和缺失型純合子的個體CRC患病風(fēng)險升高（OR=1.21，95%CI: 1.01-1.56，P=0.09）（OR=1.80，95%CI: 1.20-2.35，P=0.001）， 即 在 95%置信區(qū)間中，以插入型純合子為對照，攜帶雜合子個體CRC患病風(fēng)險增加21%（P=0.09），攜帶缺失型純合子個體CRC患病風(fēng)險增加80%（P=0.001）。上述分析數(shù)據(jù)表明rs372459950與CRC患病風(fēng)險顯著關(guān)聯(lián)，并且雜合子和缺失型純合子促CRC發(fā)生。

3 討論

CLIP3啟動子區(qū)3-bp插入/缺失多態(tài)有可能影響該啟動子區(qū)活性，進(jìn)而干擾CLIP3基因的轉(zhuǎn)錄，從而來調(diào)控CLIP3基因表達(dá)，而CLIP3在調(diào)節(jié)TNF-α介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中起著重要的作用，然而，在目前的研究中我們僅發(fā)現(xiàn)了CLIP3基因多態(tài)與CRC的關(guān)聯(lián)性，CLIP3在CRC發(fā)生過程中促癌還是抑癌還需要進(jìn)一步的功能實(shí)驗(yàn)鑒定。

近年來的研究發(fā)現(xiàn)在多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞中CLIP3表達(dá)下降，患者的生存率明顯下降。CLIP3與spy1作用，可以調(diào)節(jié)腫瘤抑制基因CYLD的表達(dá)。到目前為止，尚無在CRC中該調(diào)節(jié)通路被激活的相關(guān)報道，課題組猜測CLIP3可能通過不依賴TNF-α介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑進(jìn)行調(diào)控，這種潛在的通路有待探索。

本論文是首次發(fā)現(xiàn)在中國漢族人群中CLIP3基因啟動子區(qū)域插入/缺失多態(tài)與CRC易感性之間存在顯著關(guān)聯(lián)，但本次實(shí)驗(yàn)人力，物力，財(cái)力都有限，調(diào)查范圍僅局限在徐州地區(qū)的漢族人群，且未檢測基因表達(dá)情況，得出更加明確的結(jié)論還有待于更大樣本量和其他不同人群中相關(guān)研究數(shù)據(jù)的支持。

（通訊作者：朱占勝）

[1]Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2013.CA：a cancer journal for clinicians.2013;63(01)：11-30.

[2]侯睿智,舒振波,侯睿達(dá),劉艷.大腸癌相關(guān)基因突變與大腸癌遺傳易感性的研究.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué) ,2017;21(01)：173-176.

[3]Fujikura D,Ito M,Chiba S,Harada T,Perez F,Reed JC, Uede T,Miyazaki T.CLIPR-59 regulates TNF-αinduced apoptosis by controlling ubiquitination of RIP1.Cell Death Dis.2012;3(02)：e264.