新型微生物源天然食品防腐劑的抑菌效果分析

□ 李智高 毛永楊 蘇 濤 田金蘭 大理州食品檢驗檢測院

隨著食品工業的不斷發展以及人們對健康問題的重視，食品安全受到越來越多的關注[1]。當前，在食品安全性要求越來越高的背景下，天然食品防腐劑成為研究重點。在天然食品防腐劑中，乳酸鏈球菌肽、溶菌酶是比較常見的三類。根據相關的報道，乳酸鏈球菌肽、溶菌酶的抑菌效果十分好，本實驗擬在符合GB 2760-2014規定的情況下，研究乳酸鏈球菌肽、溶菌酶的抑菌效果，為其應用范圍的擴大提供參考資料。大腸桿菌和金黃色葡萄球菌是導致食品污染的常見微生物，因而選擇這兩種菌為供試菌種。

1 材料與方法

1.1 材料

乳酸鏈球菌肽、溶菌酶均購自安徽省某化學試劑廠，而大腸桿菌和金黃色葡萄球菌由某學院生命科學系提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 試劑制備

進行試劑制備時，分別制備質量濃度為0、2、5、10、30、50 g/L的乳酸鏈球菌肽、溶菌酶溶液備用。

1.2.2 培養基制備

根據相關文獻進行牛肉膏蛋白胨液體培養基制備，高壓蒸汽滅菌備用。

1.2.3 菌懸液制備

在制備過程中，在無菌條件下，將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別接種在2個試管斜面上，放置在溫度為37 ℃的培養箱中進行活化培養，時間為24 h。將活化培養完成的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌使用2 mL、0.85%氯化鈉溶液進行洗脫，并將洗脫液分別倒入包含一定量液體培養基的三角瓶中，將恒溫振蕩器放置其中，并進行2 h震蕩培養，然后就可以獲得兩種細菌的混懸液。

1.2.4 接種培養

使用移液管取出9 mL培養基，然后將其倒入50 mL的三角瓶中，并在三角瓶中加入1 mL、質量濃度為50 g/L的乳酸鏈球菌肽試液，均勻搖晃，將其搖勻。根據同樣的方法，分別添加質量濃度為0（無菌水，為對照組）、2、5、10、30 g/L的乳酸鏈球菌肽試液，因而，乳酸鏈球菌肽的實際使用量分別是0.0、0.2、0.5、1.0、3.0、5.0 g/L。然后使用移液管在上述三角瓶中分別添加1.0 mL的制備好的菌懸液。每一個質量濃度共做3組重復，并使用細菌過濾膜對每一個瓶口進行包裹。置恒溫振蕩器內37 ℃進行18 h的震蕩培養。另外取1.1 mL無菌水，將其加入到包含9 mL培養基的三角瓶中，將其用作調零。

使用同樣的方法分別制備溶菌酶的質量濃度為0.0、0.2、0.5、1.0、3.0、5.0 g/L的培養液，使用與上述相同的方法進行接種培養。

1.2.5 OD值測定

在培養完成后，從每一個三角瓶中取出1 mL培養液，同時利用無菌水對其進行10倍稀釋，然后使用分光光度計，在550 nm波長的位置對其吸光值進行測定，每一個樣品都進行3次測定[2]。

1.3 統計學分析

將實驗中獲得的數據使用SPSS 19.0統計學軟件進行分析。

2 結果與分析

與對照組相比，乳酸鏈球菌肽對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果隨著質量濃度的增加不斷增強。在乳酸鏈球菌肽的質量濃度為0.2 g/L，乳酸鏈球菌肽對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果已經比較明顯，在乳酸鏈球菌肽的質量濃度為3.0 g/L和5.0 g/L時，其OD值已經接近或者為0。在溶菌酶質量濃度為0.3 g/L時，與對照組相比，其對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果已經比較明顯，在溶菌酶質量濃度為3.0 g/L和5.0 g/L時，其OD值已經接近或者為0。

從總體上看，乳酸鏈球菌肽、溶菌酶對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果隨著其質量濃度的增加而不斷增強。

3 討論

乳酸鏈球菌肽又可以稱為乳球菌肽，它是一種通過蛋白質發酵而提取的。乳酸鏈球菌肽可以很好地抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等細菌的生長。通常情況下，它對革蘭氏陰性菌的作用不是十分明顯，但是在冷凍、加熱等特定條件下，會使革蘭氏陰性菌死亡，起到好的殺菌效果。溶菌酶是一種水解酶，多存在于哺乳動物的體液、乳汁以及禽類蛋白中，同時在微生物以及植物中也有。溶菌酶一種很好的抑菌蛋白，分為酵母菌細胞壁溶解酶、細菌細胞壁溶解酶以及霉菌細胞壁溶解酶。溶菌酶在枯草桿菌、革蘭氏陽性菌等細菌中的效果很好，其本身無毒害，安全性很高，放心使用。

4 結語

乳酸鏈球菌肽、溶菌酶均對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有很好的抑制作用。考慮到乳酸鏈球菌肽、溶菌酶均安全無害，因而其最佳抑菌濃度可以為1.0 g/L ，此時其細菌殺滅相對比較好。