蜂花粉中喹諾酮類藥物殘留的檢測

□ 王 瑋 重慶市涪陵食品藥品檢驗所

1 蜂花粉的功效

蜂花粉中富含人體所需的氨基酸、維生素等多種營養物質，提高人體的免疫力，減緩疲勞。適量食用可以使皮膚紅潤有光澤，延緩衰老，同時還可以防治心腦血管疾病，調節腸胃功能，增強骨質，對于便秘也有良好的治療作用。蜂花粉還具有較高的藥用價值，是恢復肝功能的高級營養劑，也可以治療慢性肝炎以及脂肪肝[1]。

2 喹諾酮類抗生素的危害

大量研究資料表明，喹諾酮類藥物及其藥物殘留在對食用者產生致癌、致畸、致突變的潛在作用的，也會造成遠期的毒性作用。喹諾酮類藥物會對消化系統造成損害，臨床癥狀為惡心，嘔吐，腹部不適，腹痛和食欲不振。更嚴重的是，食品中的殘留藥物會使人體的致病菌產生耐藥性，導致喹諾酮類藥物的療效降低甚至失效。喹諾酮類藥物主要指恩諾沙星、環丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星等。因此，人們必須十分重視動物性食品中喹諾酮類藥物殘留的問題。

3 蜂花粉的預處理方法

由于蜂花粉的基質較為復雜，蛋白質等營養物質的含量較高，為了保證檢測過程的高效性和實驗結果的準確性，有必要建立一種高效的前處理方法對蜂花粉樣本進行處理。通過矩陣試驗，2%高氯酸能更好地沉淀蛋白，消除雜質，宜作為蜂花粉中喹諾酮類藥物的最佳提取試劑。

4 喹諾酮類藥物檢測方法

本文主要介紹一種喹諾酮類藥物的檢測方法，即高效液相色譜（HPLC）。

4.1 高效液相色譜法（HPLC）

液相層析法與氣相層析理論相結合而得到的檢測方法即為高效液相色譜法。是溶質的流動相和固定相，在高壓條件下進行的，持續多次的交換過程。在交換過程中，由于兩相之間存在諸如分配系數或分子大小等差異，產生排阻作用導致不同的溶質相互分離。這種檢測方法對環境溫度的要求較低，可在室溫下進行，因此應用范圍較廣，同時具有很強的分離能力和較高的靈敏度。主要的檢測器為電化學探測器或熒光檢測器等。整體而言，高效液相色譜法具有較強的特異性和較高的精確度，靈敏度高且結果較為穩定，適合于作確證性試驗。另外，基于喹諾酮類藥物自身的性質，在高效液相色譜法中利用熒光法以及紫外可見分光光度法，可以有效降低實驗樣品中存在的蛋白質等干擾物質會對實驗產生的影響。在該實驗方法中，對樣品施行預處理操作，有助于除去干擾。除此之外，利用高效液相色譜法還能夠通過固液萃取的方法提取水中含有的抗生素[2]。

4.2 HPLC方法的精密度、準確度、靈敏度

4.2.1 精密度

高效液相色譜法的批內變異系數≤15%，批間變異系數≤20%。

4.2.2 精確度

高效液相色譜法在20 ～500μg/kg添加濃度的回收率為60%～100%。

4.2.3 靈敏度

實驗結果表明，恩諾沙星、環丙沙星等喹諾酮類藥物，在蜂花粉中的最大殘留限量為100 μg/kg，檢測限為 20 μg/kg。

5 檢測實例

為了檢測蜂花粉中殘留的喹諾酮類藥物，科學上做了許多實驗，以下以恩諾沙星的檢測實驗為實例進行敘述。實驗人員將恩諾沙星分別和兩種性質不同的蛋白進行偶聯，進而形成了恩諾沙星牛血清蛋白完全抗原和恩諾沙星抗原。以家兔為實驗對象，用恩諾沙星牛血清蛋白使家兔產生免疫，制備有較高特異性的恩諾沙星血清，然后用恩諾沙星蛋白將抗原包住，構建恩諾沙星測定方案?；驹硎菍嶒瀸ο蟮目贵w與酶標抗體相互競爭，從而與固相抗原結合。由實驗結果可知，標本中抗體的數量越大，那么與固相抗原結合的酶標抗體數量越少，所以陽性反應的顏色比陰影反應的淺。也就是說標本中的牛血清和被過氧化物標記過的牛血清相互競爭，與數量有限的牛血清抗體結合，與此同時牛血清抗體又會和覆蓋在微孔板條上的特定抗體結合。所以，通過洗滌除去沒有結合的牛血清，加入酶底物以及生色劑等藥品，與酶標記物融合使無色的發色劑轉換成藍色。

6 結論

現如今，尚沒有明確國家標準或行業規定來規范蜂花粉中恩諾沙星、環丙沙星等喹諾酮類藥物殘留的檢測標準，相關文獻資料報道較少?，F有的檢測標準也只適用于飼料、蜂王漿、蜂蜜和動物性食品中喹諾酮類藥物殘留量的檢查。因此，為了確保蜂花粉的安全性，有必要建立一種檢測蜂花粉中恩諾沙星、環丙沙星等喹諾酮類藥物殘留的方法。