高通量檢測技術對假肥大型肌營養不良分子診斷結果觀察

汪先桃 劉靜（通訊作者）

（1成都市龍泉驛區第一人民醫院 四川 成都 610100）

（2四川大學華西醫院龍泉醫院 四川 成都 610100）

假肥大型營養不良主要包括了兩種不同病癥疾病：Duchenne型肌營養不良、Becker型肌營養不良。DMD基因作為人體的機體內部最大基因之一，而DMD/BMD患者的變異類型，絕大多數都是外顯子組的水平重復及缺失[1]。對此對假肥大型肌營養不良分子診斷尤為重要，本次研究探討分析高通量檢測技術對假肥大型肌營養不良分子診斷結果。現報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

通過選取2017年1月至2018年4月期間的100例臨床診斷，疑似為假肥大型肌營養不良患者，所有患者均為男性，采集自愿參與本次研究的患者及其家屬（母親）2ml外周血EDTA抗凝，置于4℃保存待檢。使用核酸抽提試劑盒檢測，經瓊脂糖凝膠電泳以及紫外分光光度法完成檢測質量，治療質量均符合實驗需求，且相關研究參與患者及其家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

通過借助CNV plex（高通量）檢測技術，采用CNV plex試劑盒連接反應連接產物多重熒光PCR擴增，所擴增的產物熒光毛細管電泳分離，均參照試劑盒的相關說明書。PCR擴增產物通過借助ABI313OXL（美國ABI公司）完成毛細管電泳，進而對樣本DMD基因區域內的拷貝數完成確定分析，針對致病誘因拷貝數變異研究，并且借助靶向獲得及高通量檢測技術的測序，完成致病基因單核苷酸的細胞水平變異檢測，實現精準分子診斷。

1.3 統計學方法

本文數據利用SPSS 20.0統計學軟件分析和處理，計數資料利用（%）表示，檢驗通過χ2，數據差異具有統計學意義為P＜0.05。

2.結果

經研究發現高通量檢測技術，監測發現其中85例患者，都存在假肥大型營養不良分子基因致病變異，其中主要包括了60例（60.00%）不同大小外顯子缺失重復，8（0.08%）例單核苷酸水平小缺失及重復情況，7（0.07%）例無義變異，以及分別2（0.02%）例剪接位點變異、錯義變異情況。在研究中通過針對母親血樣的家系患者展開致病變異驗證，發現其中有5名患者的母親均為先證者等同變異的雜合攜帶者。

3.討論

假肥大型營養不良作為臨床中較為常見的累及骨骼肌的神經肌肉疾病，DMD患者整體疾病發展較為迅速，超出3歲左右無法出現獨立行走及依靠輪椅代步，通常死于心肌病及呼吸道并發癥，壽命通常在20歲以內[2]。BMD患者整體疾病發展相對較輕，且病情發展也較為遲緩。對此類疾病實現分子診斷，不僅能夠有利于早期診斷疾病，作為臨床中對家屬炎癥是否遺傳的有力驗證證據。DMD基因所致的病性變異，主要是針對橫紋肌組織中的抗肌萎縮蛋白，最終致使近端骨骼肌進行性萎縮無力，以及腓腸肌代償性肥大。FastTarget技術針對性區域設計多重PCR擴增體系，針對多重研究者感興趣基因組區域性富集，以及實現高通量測序，達到了相對較為成熟的測量方法[3]。

相較于Sanger測序法檢測更加簡便、操作、快速，等同于高通量測序建庫方法，更加簡便省略了建庫這一復雜化檢測過程。在本次研究中出現8（0.08%）例單核苷酸水平小缺失及重復情況，7（0.07%）例無義變異，均由于出現終止密碼異常編碼，因而所致的截短蛋白，最終引發DMD病發。在臨床中Monaco等研究者，基于DMD基因假說，提出認為臨床癥狀嚴重的DMD患者，絕大多數都是框外突變所致使，整體癥狀較輕的BMD患者，則主要是由于并未影響閱讀框的狂外突變遵循閱讀框原則。在本次研究中發現有10例框內突變患者，在后期均經臨床確診為BMD。經本次研究發現其中85例患者，都存在假肥大型營養不良分子基因致病變異，其中主要包括了60例（60.00%）不同大小外顯子缺失重復，8（0.08%）例單核苷酸水平小缺失及重復情況，7（0.07%）例無義變異，以及分別2（0.02%）例剪接位點變異、錯義變異情況。且其中有5名患者的母親均為先證者等同變異的雜合攜帶者。與臨床研究結果相符，證實了高通量檢測技術對假肥大型營養不良因子的檢測診斷可靠性。在臨床中針對假肥大型營養不良最為傳統的臨床治療方法，就是借助糖皮質激素配合康復理療加以治療，不僅能夠對患者的肌力及肌肉功能逐步衰退情況加以延緩，同時還能夠引發更多不良反應出現。對此可以借助近些年的新型DMD/BMD治療方法，且經德州大學的最新臨床研究，借助老鼠模型發現此種治療方法，為假肥大型營養不良的治療提供新思路。

綜上所述，通過對假肥大型肌營養不良因素進行臨床診斷，具有極為重要的臨床確診意義，借助高通量監測技術能夠實現對不同類型致病基因變異完成檢測，達到對患者及時確診的臨床診斷意義。