淺談影響血清學實驗因素

韓貞珍 （遼寧省葫蘆島市動物疫病預防控制中心 125000）

隨著現代診斷技術的發展，免疫動物或感染動物的血清型中特有的免疫抗體或感染抗體，可以通過血清學進行檢測，識別出抗體的種類和血清中的抗體量。

血清學鑒定最有效廣泛使用的試驗包括：凝集反應 （包括玻片凝集、試管凝集、乳膠凝集）補體結合試驗、瓊脂免疫擴散試驗和間接酶聯免疫吸附試驗。影響血清學試驗數據的因素主要有以下幾個方面：電解質、溫度、酸堿度、振蕩、時間、雜質和異物。

1 電解質

在血清學反應試樣中，玻片凝集是直接凝集，定量的血清和等量的抗原反應，不需要電解質。但試管凝集是間接凝集試驗需要有電解質參與，當抗原與抗體發生結合后，由親水膠體變為疏水膠體的過程中，須有電解質參與才能進一步使抗原抗體復合物表面失去電荷，水化層破壞，復合物相互靠攏聚集形成大塊的凝集或沉淀，若無電解質參加，則不出現可見反應。為了促使沉淀物或凝集物的形成，在禽流感抗體檢測試驗中常用0.85%氯化鈉 （pH7.4，121℃高壓滅菌15min，4℃保存備用）作為抗原和抗體的稀釋液或反應液。但電解質的濃度不宜過高，否則會出現鹽析現象。

2 溫度

抗原與抗體的結合除本身特有的特異性外，再結合反應過程受溫度影響，溫度對結合的效果至關重要。但在一定溫度范圍內，溫度越高，抗原、抗體分子運動速度越快，這可以增加其碰撞機會，加速抗原抗體結合和反應現象的出現，如凝集和沉淀反應通常在37℃恒溫箱 （即將試驗材料加蓋密封膜，起到保濕作用），以促進反應現象的出現，若用56℃水浴則反應更快。但并不是所有的抗原抗體反應都是溫度越高反應越快，效果越好。有的抗原抗體結合需長時間在低溫下才能使反應完成的比較充分、徹底，如有的補體結合試驗，口蹄疫液相阻斷-ELISA試驗，在0～4℃冰箱結合效果更好。

3 酸堿度

任何微生物的生存都有自己的生存環境，環境的pH直接影響微生物的生存和死亡。在血清學反應中，適宜的pH能使血清中的抗體與診斷液中的病毒 （細菌）抗原有機的結合。因此，血清學試驗要求在一定的pH下進行，常用的pH為6～8，過高或過低均可使已結合的抗原抗體復合物重新解離。若pH降至抗原或抗體的等電點時會發生非特異性酸凝集，造成假象。

4 振蕩

抗原和抗體在適宜的溫度、酸堿度條件下發生反應。為使抗原抗體結合的效果更好，增加抗原抗體的結合速度，采用人工輔助的方法機械振蕩，適當的機械振蕩能增加分子或顆粒間的相互碰撞，加速抗原抗體的結合反應，但強烈的振蕩可使抗原抗體復合物解離。

5 雜質和異物

試驗中的待檢血清中如有與反應無關的雜質、異物 （如蛋白質、類脂質、多糖等物質）存在時會抑制反應的進行或引起非特異性反應，故在每次試驗都應設立陽性和陰性對照。以便于發現檢測血清學試驗血清的質量問題。

6 時間

試驗時間有反應時間和判定時間，發應時間受電解質、溫度、酸堿度、雜質和異物的影響。試驗判定時間影響判定結果。實驗過程中觀察時間的不同可能會看到不同結果，時間因素主要由反應速度來體現，反應速度取決于抗原抗體親和力、反應類型、反應介質、反應溫度等因素。試驗的觀察時間影響結果判定。在試驗中應按照試驗說明書要求和步驟操作，按規定時間進行判斷。