我國豬繁殖與呼吸障礙綜合征類NADC30毒株流行現狀

石青青 馬吉飛 孫英峰

（天津農學院動物科學與動物醫學學院，天津 300384）

豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）引起的危害生豬養殖業的重要傳染病之一，該病主要表現為母豬流產、斷奶保育階段仔豬呼吸道癥狀[1,2]。自2006年我國暴發流行高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV）以來，國內陸續上市了多種HP-PRRSV減毒活疫苗，由于無序或不規范使用，導致豬場存在多種類型PRRSV流行，且處于不斷遺傳變異演化過程中，一旦成為優勢毒株可造成大范圍流行，造成嚴重的經濟損失。如2006年國內流行的HP-PRRSV就是由早期經典PRRSV遺傳演化而來[3]，該病毒的臨床傳播速度、致病力及死亡率遠高于遺傳演化關系相近的早期經典毒株[4,5]。

近年來，我國豬場流行的類NADC30毒株與美國報道NADC30毒株遺傳關系相近，推測從美國引進種豬攜帶輸入PRRSV NADC30毒株。該毒株已與國內流行的其他亞群毒株（經典PRRSV、HP-PRRSV或疫苗毒株）發生重組，經遺傳變異產生了一類新病毒，國內學者將這類病毒統稱為PRRSV類NADC30毒株。該類病毒在臨床流行過程中表現出了不同的致病力，部分毒株引起仔豬高致死率、部分毒株對母豬的繁殖性能造成影響[6,7,8]。在免疫了商品化PRRSV疫苗的豬場同樣發生了類NADC30 PRRSV毒株感染，這足以說明現有的商品化疫苗對其并無預防能力[6,9]。本文將重點描述類NADC30 PRRSV的流行現狀、基因組特征、致病性以及當前商品化疫苗對類NADC30 PRRSV的免疫效力。

1 PRRSV類NADC30毒株在我國的流行現狀

NADC30毒株是2008年由美國國家動物疾病研究中心（NADC）研究人員首次分離并命名，該毒株與MN184A、MN184B、MN184C毒株相比，擁有相同的氨基酸缺失模式，而我國沒有關于NADC30毒株或相似缺失模式毒株的研究報道。從2012年底開始，部分學者及檢測機構從國內檢測分離到了與美國毒株NADC30分子進化關系十分相近的毒株，如JL580、Hnyc15、HENAN-XINX、 HENAN-HEB、 CHsx1401 等[6-9]。自2014年以來，PRRSV類NADC30毒株臨床檢出率呈現暴發式增長，筆者所在的省份同樣出現類似情況，已有大量研究報道該類毒株在國內大部分省市廣泛流行，已經成為PRRSV主要流行毒株[10]。發病豬場出現母豬群體“流產風暴”，流產率高達40%左右，斷奶仔豬呼吸道癥狀嚴重，容易繼發鏈球菌、副豬嗜血桿菌、放線桿菌及巴氏桿菌等細菌感染，部分豬場死淘率高達20%以上，這給我國生豬產業帶來了新的挑戰[6,11]。

2 PRRSV類NADC30毒株分子遺傳變異

2.1 基因序列變異分析

PRRSV主要分為美洲型（VR2332位代表毒株）和歐洲型（LV位代表毒株）兩大類，NADC30屬于美洲型毒株，其基因組全長為15 020個堿基對，在該毒株的Nsp2基因上存在131個不連續的氨基酸缺失（“111+1+19”的缺失模式），缺失位置分別為 aa 323-433、aa 481和aa 533-551，其遺傳演化與MN 184A、MN 184B、MN 184C密切相關[12]。2013年我國河南省周峰等[9]報道HENAN-XINX、HENAN-XINX-1、HENAN-XINX-2、HENAN-HEB等毒株，分析Nsp2基因序列發現，這些分離毒株與美國報道的NADC30同源性為79.3%～95.2%，且擁有相似的氨基酸缺失模式，而與HP-PRRSV同源性為63.7%～74.5%，與早期經典PRRSV同源性為67%～69.1%。對HENAN-XINX分離毒株進行全基因序列分析，該毒株與NADC30同源性高達95.43%。2015年分離于我國東北地區吉林省和黑龍江省的JL580和HLJ58毒株遺傳演化與NADC30密切相關，且 JL580毒株與國內 HP-PRRSV在 NSP2、NSP3、NSP7、ORF2a、ORF4區域可能存在重組[6]。

2.2 氨基酸序列變異分析

2015年國內分離的類NADC30毒株（如HENAN-XINX、HENAN-HEB等），其Nsp2氨基酸序列與經典PRRSV和HP-PRRSV同源性較低，而與NADC30同源性高達91.4%，且存在同樣的不連續的131個氨基酸缺失，模式為“111+1+19”。ORF5氨基酸同源性分析顯示，這些毒株與NADC30和MN184A、MN184B、MN184C同源性很高（89.6%～99.0%），而與經典PRRSV以及HP-PRRSV同源性較低。N-糖基化位點分析顯示，這些毒株的GP5蛋白糖基化位點和美洲型PRRSV GP5蛋白糖基化位點數目相近，數目為3～5個[13]。對JL580毒株氨基酸序列分析發現，Nsp2也有3處不連續的缺失，共131個氨基酸，和NADC30以及MN 184A、MN 184B、MN 184C一樣[6]。

3 PRRSV類NADC30毒株重組事件

PRRSV屬于RNA病毒，其高突變性可能成為其逃避宿主免疫監視的一種策略[14]。與其他亞群PRRSV毒株不同，NADC30發生重組概率特別高。根據重組毒株不同，可將類NADC30 PRRSV毒株分成四組。第一組以HNjz15毒株 （KT945017.1） 為代表，這類毒株與NADC30具有最高的相似性并且不與其他病毒重組，屬于輸入性病毒；第二組以 Chsx1401（KP861625.1）、HENA-XINX（KF611905.1） 和 HNyc15（KT945018.1）為代表，這類毒株與經典 PRRSV（如VR-2332和CH-1a）發生重組；第三組以JL580（KR706343.1）、HENAN-HEB（KJ143621.1） 為代表，這類毒株與HP-PRRSV（如JXA1和09HEN1）發生重組；第四組以 TJnh1501（KX510269） 為代表，這類毒株與HP-PRRSV疫苗毒株（如TJM-F92）發生重組。類NADC30 PRRSV與其他亞群PRRSV重組區域主要位于非結構蛋白區域，包括Nsp1a、Nsp2-9、Nsp11和結構蛋白區域。

4 PRRSV類NADC30毒株致病性

NADC30毒株與其他 3株 PRRSV（NADC31、MN184和SDSU73）毒力相比，在攻毒5周齡仔豬初期發熱并在感染后第2天和第8天出現發熱高峰，且體溫在40℃以上。NADC30毒株感染的豬也會發生較早的病毒血癥，并且可在感染后第1天檢測到。感染NADC30毒株的豬發生間質性肺炎，但相對而言比SDSU73毒株和MN184毒株更溫和。研究結束時沒有發現豬死亡。以上結果表明NADC30 PRRSV毒力相對較弱[12]。與NADC30毒株相似，仔豬在感染HNjz15后第1天發熱并持續9天。臨床主要表現呼吸障礙，如呼吸困難、呼吸急促和咳嗽，但整個試驗所有感染HNjz15毒株的豬均存活（試驗周期14天）。顯微鏡下可見感染HNjZ15的豬是以肺泡隔膜增厚和單核細胞浸潤為特征的間質性肺炎，扁桃體和淋巴結可見淋巴細胞減少、急性出血和嗜中性粒細胞浸潤[8]。

然而，不同重組類型的NADC30毒株卻表現出了較強的致病力。用細胞傳代的類NADC30 PRRSV變異株JL580（Marc145細胞培養第二代）和肺勻漿上清液分別攻毒6周齡仔豬，受感染的仔豬從接種后3天出現高熱，并且伴有咳嗽、厭食、耳朵變紫等明顯的臨床表現。在感染的第7天，仔豬開始死亡，在試驗結束時所有的仔豬均死亡（試驗周期14天）[6]。綜合臨床發病癥狀，不同重組模式的類NADC30 PRRSV表現出極為復雜臨床致病力。

2015年本研究小組分離獲得1株類NADC30毒株（TJnh1501），經基因組解析發現，該毒株是由TJbd1401和NADC30毒株重組的病毒。經進一步序列分析，TJbd1401屬于HP-PRRSV，且除NSP2上缺失30個氨基酸外，在另一個位置上缺失了120個氨基酸，由于TJbd1401是類TJM-F92疫苗毒株或由TJM-F92疫苗毒株演化而來，因此推測TJnh1501是類疫苗毒株（TJM-F92）與NADC30毒株發生重組而來。在攻毒5周齡仔豬，受感染的仔豬出現一過性高熱的臨床表現，其毒力介于HP-PRRSV（JXwn06）和CHsx1401之間[7]。

5 當前商業疫苗對PRRSV類NADC30毒株的免疫效力

目前，國內商品化PRRSV毒株包括HP-PRRSV（JAXA1-P80、HuN4-F112、GDr180、TJM-F92） 和經典 PRRSV（CH-1R、VR-2332）[15,16]。伴隨著類NADC30毒株遺傳及重組變異，臨床表現出千差萬別的致病性，加劇了現有商品化疫苗臨床預防與控制的難度。如免疫了商品疫苗的豬場同樣暴發了HENAN-XINX毒株、HENAN-HEB毒株或JL580毒株感染事件[6]，這說明現有的PRRSV商品疫苗均不能有效抵抗類NADC30毒株的感染。為了進一步科學評估商品疫苗的臨床免疫效力，國內學者對現有商品化PRRSV疫苗的免疫效果進行科學評價，系統評估現有商品化PRRSV疫苗對現在流行PRRSV類NADC30毒株的免疫保護效果。如選用VR2332和JXA1-R疫苗免疫5周齡仔豬，在免疫28天后感染CHsx1401毒株，與空白組相比，免疫VR2332的仔豬臨床發熱時間縮短，但是免疫JXA1-R后出現臨床癥狀加重的現象。感染后所有免疫群體和空白群體有相似的病毒血癥，說明疫苗接種并不能有效去除豬體內的病毒。此外，顯微切片檢測，疫苗無法減輕或消除CHsx1401感染引起的肺臟顯微病變。綜上結果表明，目前現有的商品化PRRSV疫苗不能提供對類NADC30 PRRSV的完全保護[17]。

6 結論與展望

自2013年首次暴發以來，PRRSV類NADC30毒株就引起了國內不少學者的關注。盡管親本NADC30毒株對豬的致病性有限，但也存在與其他亞群PRRSV重組的可能，從而產生與HP-PRRSV相似的致病力（如JL150）。然而現有的商品化PRRSV疫苗無法提供有效的免疫保護，因此亟需采取包括開發類NADC30 PRRSV疫苗在內的綜合防控措施來預防該病的傳播。

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山西省實施畜禽屠宰標準化創建活動

據農民日報2018年1月11日報道，根據山西省畜禽屠宰行業法律法規、管理模式及發展現狀，山西省農業廳決定組織開展全省畜禽屠宰標準化創建活動。參與標準廠驗收的畜禽屠宰企業按照《生豬屠宰標準化建設規范》 《畜禽屠宰標準化建設規范》 《生豬屠宰標準化建設驗收表》 《畜禽屠宰標準化建設驗收表》進行自評。自評合格后，編寫畜禽屠宰標準化創建自評報告，填寫生豬屠宰標準化創建驗收申請表，逐級上報至山西省農業廳申請驗收。驗收合格的生豬屠宰廠在山西省畜牧獸醫網或相關網站公示無異議后，頒發“全國標準化生豬屠宰廠”證書，證書有效期五年，同時報農業部備案。