酶標儀的使用及注意事項

（遼寧省阜新市動物疫病預防控制中心，遼寧阜新 123000）

酶標儀在畜牧獸醫實驗室已成必備儀器，該儀器應用較廣泛，日常免疫抗體檢測應用較多，豬瘟、藍耳病、口蹄疫抗體的檢測都需要使用。對于獸藥殘留，肉質瘦肉精的檢測等實驗也需使用。該儀器操作簡便、快速、結果易判定，準確率較高等特點。

酶標儀的型號較多，使用范圍不同。選擇該儀器時根據檢測的樣品和使用試劑的不同來選擇。許多試劑公司配套供應酶標儀。該儀器針對固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設計。酶標儀的主要性能指標有測讀速度、讀數的準確性、重復性、精確度和可測范圍、線性等。優良的酶標儀的讀數一般可精確到0.001，準確性為±1%，重復性達0.5%。酶標儀的可測范圍與線性范圍視各酶標儀的性能不同，普通的酶標儀在0-2.000，新型號的酶標儀上限拓寬到2.900，超范圍值常以“*”或“over”或其他符號表示。選用酶標儀時應注意可測范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測范圍。

使用時環境條件對儀器的結果讀取有影響，直接影響結果的準確性。儀器設備的放置位置和環境要適當，應將儀器放置于無電磁場和干擾電壓的水平臺面，保持環境干燥，避免水汽和煙塵對儀器的損傷，避免陽光或強光直射而造成的老化。使用時盡量保持環境溫度在15℃～40 ℃，濕度在15%～85%之間，保持環境穩定。保持使用電壓的穩定性，避免突然斷電和使用后未關閉儀器前斷電造成的儀器非正常關閉。

在實驗中為保證結果準確性，延長儀器使用壽命，操作時應遵守儀器的使用注意事項及日常維護保養。儀器操作過程中應注意，在測試結果前應提前開機預熱15～30min，避免開機后馬上檢測造成的結果偏差。檢測的試劑應恢復常溫后再使用，對于所配置試劑用的水質pH值，水質純凈度等應符合要求，溫度水質都會造成實驗結果偏差很大或實驗的失敗。洗板時建議配套使用洗板機洗板，洗得干凈，避免交叉污染。酶標儀檢測應避免腐蝕性試劑的使用。操作時樣品撒到儀器上應對儀器擦拭并消毒。不同試劑盒的要求均不相同，應根據試劑盒說明修改儀器上參數，因試劑盒造成的測量結果偏差應根據實際情況及時修改參數，避免測量結果偏差，到達最佳測試結果，使實驗成立。加入底物后終止的時間要掌握好，過短過長都 可能造成偏差甚至實驗結果不成立。測定時有時選擇單波長測定，有時選擇雙波長測定，雙波長測定即每孔先后測定兩次，第一次在最適波長，第二次在不敏感波長，兩次測定間不移動ELISA板的位置，最終測得的值為兩者只差。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。各種酶標儀性能有所不同，使用時應詳細閱讀說明書。

儀器不用時應定期開機保養，保證檢測時正常運行狀態。為保證結果準確性儀器應定期校準。校驗方法可應用比爾定律對酶標儀進行自行校準。準確稱取分析純重鉻酸鉀0.35克，溶于100ml 0.2摩爾/升的稀硫酸中，以此作為原液，在用0.2mol/L的稀硫酸進行倍比稀釋。得到0.35%、0.175%、0.0875%、0.04375%、0.021875%、0.0109375%六個濃度標準液，將液體加入96孔微量板中，每個濃度加兩排共16孔，每孔200μl。將加好溶液的微量板放在酶標儀上，用450nm單波長測量。結果若六個濃度測量結果吸光度的平均值與濃度呈線性關系，可看出酶標儀測定結果準確無偏差。酶標儀是垂直光路，垂直光的特點是樣品吸光度受液體濃度和稀釋的影響小，受被檢樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等影響較大。為保證結果準確應選擇透光性好干凈的酶標板，操作時避免接觸到孔底部，避免底部污染造成的結果偏差。如儀器損壞要聯系儀器廠家技術人員，不要自行拆除修理，以免損壞內部部件。

酶標儀的使用快捷簡單，但要注意每一個操作細節才能保證結果的準確。