中藥調節樹突狀細胞免疫功能研究進展*

賈貝田，趙慶云，蔡雨孜，王 麗，邊育紅

（1.天津中醫藥大學，天津 300193；2.天津市第二人民醫院，天津 300192）

樹突狀細胞（DCs）是體內功能最強大的抗原遞呈細胞，緊密連接先天性免疫應答和適應性免疫應答[1]。DCs分兩種階段：未成熟階段和成熟階段[2]。未成熟DCs（imDCs）由骨髓進入外周組織，經抗原刺激后分化為成熟DCs[3-4]。以DCs為中藥作用靶點[5-7]，采用藥物促進DCs成熟分化以及提高其提呈抗原能力治療癌癥[8]，或者干預DCs成熟和誘導耐受型DCs治療自身免疫性疾病、移植排斥[9]日益受到人們關注。因此研究中藥干預DCs在疾病中的作用，將有助于揭示中藥治療疾病的機制以及新藥的開發。

1 中藥干預DCs對腫瘤的治療作用

臨床研究發現腫瘤患者DCs功能缺陷與腫瘤的發生發展密切相關[10]。1）在DCs分化方面：黑色素瘤源性因素通過促進STAT3和MAPK信號通路超活化，抑制祖細胞向DCs細胞分化[11]；細胞因子TGF-β1抑制骨髓來源的前體細胞向DCs細胞分化；分化抑制因子-1（Id1）過表達通過下調參與DCs分化的關鍵分子和抑制CD8 T細胞增殖導致全身性免疫抑制[12]。2）在DCs成熟和功能方面：研究發現腫瘤微環境中浸潤的DCs不能有效的處理和提呈Ag[13-14]，且其表面共刺激分子的表達以及免疫刺激性因子（如IL-12）的分泌也降低[15-16]。最近研究表明，在腫瘤微環境中，microRNA miR148-a在DCs中表達顯著上升，且其通過抑制DNA甲基轉移酶（DNMT1）表達減弱TLR介導的細胞成熟[17]。以上研究表明腫瘤微環境中樹突狀細胞的免疫抑制是腫瘤治療的潛在目標，改變腫瘤的微環境，促進DCs分化與成熟,提高DCs的抗原提呈能力是治療腫瘤的重要靶點。

研究發現枸杞多糖可通過TLR2/TLR4介導的NF-κB 通路誘導 DCs成熟，并分泌 IL-12p40[18]；黃芪多糖除促進雞骨髓來源的DCs表面分子CD40和CD80的表達增高外[19]，還可上調DCs膜表面與抗原遞呈相關的CD36、IL-27的表達，下調IFI16的表達，對增加DCs的免疫活性，促進DCs的成熟與分化有顯著的影響[20]。另外，在抗原遞呈階段，靈芝多糖可以通過DCs基于干擾素-γ和顆粒蛋白酶B途徑誘導CTL[21]。周雍明等[22]將肺瘤平膏處方根據藥物功效分類不同拆分為益氣方（黃芪、黨參）、解毒方（白花蛇舌草、草河車、敗醬草）、活血方（桃仁、三七），并制成含藥血清，分別處理DCs，發現肺瘤平膏、活血藥、益氣藥均可不同程度增強DCs刺激LPAK細胞殺傷腫瘤的作用。除此之外，復方扶正湯（人參、黃芪、女貞子、旱蓮草等）亦可誘導急性髓細胞白血病完全緩解期患者骨髓來源單核細胞分化為mDCs，且顯著激活T細胞殺傷人白血病細胞株K562 細胞[23]。

2 中藥干預DCs對炎癥的治療作用

在炎癥疾病中，DCs可通過遞呈抗原，分泌各種炎性因子，誘導T淋巴細胞活化，參與炎癥反應。如DCs通過受體 TLRs4、7、8和 9識別 HSV-1的PAMPs激活CD4+T細胞，促進其產生IL-2、IL-17和IFN-γ,同時誘導CD4+T細胞向Th1細胞分化，進而參與炎癥反應[24]；DCs在纖維細胞分泌的CCL2和CCL20作用下，向氣道遷移，引起慢性炎癥反應[25]。

近期研究發現了一種新型DCs，即炎性DCs。炎性DCs在形態、表型和遷移能力上與正常DCs大致相同，但是，炎性DCs在起源上與正常DCs有所差異[26]。正常DCs可由IL-4和GM-CSF誘導而成，而炎性DCs由骨髓來源的單核細胞只需經GM-CSF分化而來[27]。骨髓中的Ly6Chi單核細胞在趨化因子CCR2的作用下遷移至感染組織，分化為炎性DCs。這些炎性DCs可通過分泌TNF-α和NO清除致病原[28]并且遷移至淋巴結將抗原遞呈給初始CD4+T細胞，促進 Th1[29]、Th2[30]及 Th17[31]細胞分化。

2.1 慢性乙型肝炎 研究表明，慢性乙型肝炎（CHB）患者存在不同程度的免疫耐受[32]。CHB患者DCs不能被誘導成熟，其功能低下，共刺激分子表達降低，不能有效激活T細胞，T淋巴細胞亞群失衡，造成多種輔助和調節等細胞功能異常，導致機體不能有效清除入侵的HBV，致疾病慢性化[33-34]。進一步研究發現，與健康人相比，慢性HBV患者體內存在高比例的CD4+、CD25+調節性T細胞，該細胞通過抑制DCs成熟以及IL-2基因在CD4+、CD25-應答T細胞中的轉錄抑制T細胞的激活，導致不能有效產生HBV特異性免疫應答，從而使HBV持續感染患者[35]。故促進DC成熟，增強其激活T淋巴細胞能力是治療CHB的重要靶點。

川牛膝多糖可促進樹突狀細胞表面CD40、CD80、CD86、MHC-I和 MHC-II表達，并上調 MHC-I和MHC-II的mRNA水平[36]；白術多糖可促進DC表面HLA-DR、CD86、CD83和CD80表達和IL-12、TNF-α的分泌，上調TLR4的表達，降低DCs的吞噬能力[37]。說明川牛膝多糖和白術多糖在抗病毒免疫中可能存在重要作用。孫雪華等[38]給CHB患者連續服用補腎沖劑（巴戟天15 g，甜蓯蓉15 g，枸杞子15 g，生地 15 g，青皮 15 g，田三七 15 g，苦參15 g）6個月后，發現患者DCs表面分子CD86、CD80、CD14、CD11C以及 HLA-DR 的表達顯著增高，并促進細胞因子IFN-γ的分泌，抑制IL-10的產生，且治療后，治療組患者血液中的谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、γ－谷氨酸轉肽酶以及HBV DNA含量均顯著降低。

2.2 支氣管哮喘 支氣管哮喘的主要發病機制之一是Th1/Th2以及Th17細胞表達水平失衡[39-40]。DCs可通過遞呈抗原，分泌不同的細胞因子，激活T淋巴細胞，影響Th0細胞的分化方向，DCs在IL-12的作用下，誘導Th0細胞向Th1細胞分化；在高水平IL-4低水平IL-12的作用下，誘導Th0細胞向Th2細胞分化[41]。有研究表明，在支氣管哮喘急性發作期和緩解期，Th1、Th1/Th2、IFN-γ 的表達水平低于對照組；Th2、Th17、IL-4、IL-17 表達水平高于對照組[42]。

研究發現氧化苦參堿可通過降低哮喘小鼠肺和脾臟中DCs的數量緩解哮喘氣道炎癥，為氧化苦參堿治療哮喘提供重要依據[43]。黃芪多糖具有通過調節DCs表型來緩解大鼠哮喘癥狀的作用[44]。楊靜宜等[45]在五虎湯治療小兒哮喘實驗中，通過Thomas法分離、培養并誘導治療組及對照組的嬰幼兒外周血DCs，并與健康兒童的T淋巴細胞共同培養后，ELISA法檢測血清中IL-4和IL-5的濃度，結果顯示治療組IL-4和IL-5的濃度較對照組明顯降低，說明五虎湯可通過抑制哮喘患兒Th2細胞細胞因子IL-4和IL-5的分泌，調節Th1/Th2的失衡；張麗等[46]在射干麻黃湯干預小鼠哮喘模型中發現射干麻黃湯可通過降低DCs數量，抑制其識別遞呈抗原功能，進而抑制肺泡中嗜酸粒細胞的浸潤及Th2細胞因子的分泌，以此減輕哮喘的癥狀。

3 中藥干預DCs治療自身免疫性疾病的作用

3.1 類風濕性關節炎 研究表明，DCs通過呈遞滑膜自身抗原和活化T細胞分泌INF-γ、IL-17等炎癥因子發起或促進關節炎癥的持續進展[47-48]，imDCs與RA患者來源的耐受性DCs均低表達MHCⅡ、CD40、CD83及共刺激分子CD80、CD86，同時低水平分泌促炎因子 IL-1β、IL-6、IL-23 以及 TNF-α[49]。已在小鼠膠原誘導性關節炎模型中證實，利用基因修飾誘導產生的耐受性DCs可以明顯抑制IL-12的分泌，從而抑制T細胞向Th1方向分化，使其分泌免疫活化細胞因子IFN-γ減少，但不影響免疫抑制性細胞因子IL-10的分泌，有效地抑制關節炎的發生[50-51]。通過誘導耐受性樹突狀細胞，重建T細胞耐受，可以特異性、持續抑制免疫反應，改善關節炎癥，避免目前傳統藥物的不良反應[52]，使RA達到長期緩解。

王竹等[53]分別用不同濃度梯度的青藤堿處理DCs，Elisa法檢測上清液中細胞因子含量，發現青藤堿可下調 DCs對細胞因子 TNF-α、IFN-γ、IL-6 以及IL-12的分泌，上調細胞因子IL-10的表達，且青藤堿在作用濃度為20μg/mL時，效果做優。另外，余克強[54]發現經青藤堿干預后的DCs，其趨化因子受體CCR5、CCR7的蛋白和mRNA表達顯著降低，其分泌的CXCL9、CXCL10含量也降低。故猜測青藤堿是通過抑制趨化因子對DCs的趨化作用，減少趨化因子的分泌來治療RA。田昱平等[55]發現經桂枝附子湯加味治療后的寒濕阻絡型RA患者，其類風濕關節炎疾病活動度指數(DAS28)明顯降低，患者的紅細胞沉降速率（ESR）、C反應蛋白（CRP）、類風濕因子（RF）水平較治療前均下降，腰椎、股骨頸骨密度水平較治療前明顯升高。表明桂枝附子湯可有效緩解RA癥狀，改善骨質疏松，值得臨床推廣。

3.2 銀屑病 銀屑病是一種以T淋巴細胞為主的免疫系統異?；罨穆詮桶l性自身免疫性疾病[56]。研究表明，DCs的異常活化是銀屑病發病的上游環節，在銀屑病皮損處可發現大量成熟DCs，這些DCs分泌大量炎性因子，如 TNF-α、IFN-γ、IL-12、IL-23等，其中IL-12和IL-23是T輔助細胞的始動者，可引發一系列免疫反應[57-60]。在銀屑病中，基質細胞也可調節DCs產生IL-23，進而促進Th17細胞分化[61]。故抑制DCs成熟，減少促炎因子的釋放，上調抑炎因子的分泌是治療銀屑病的重要方法。

劉京生等[62]用涼血活血方（生槐花30 g，白茅根 30 g，生地 30 g，紫草根 15 g，牡丹皮 15 g，茜草根15 g，丹參 15 g，雞血藤 30 g，板藍根 30 g，白蘚皮15 g）干預銀屑病患者DCs后，發現DCs表面CD86的表達及刺激混合淋巴細胞增殖的能力均有一定的抑制，T h1型細胞因子的產生顯著性降低，而Th2型細胞因子產生增加；王明星等[63]用咪喹莫特誘導小鼠銀屑病模型，用涼血解毒湯（土茯苓30 g，生槐花 15 g，生地 15 g，紫草 10 g，赤芍 10 g，白茅根 30 g，苦參 10 g，金銀花 15 g，草河車 9 g，白鮮皮10 g）進行干預，發現涼血解毒湯可明顯降低皮損PASI評分及表皮厚度、減少炎性反應細胞的浸潤，抑制皮損中TLR7通路相關蛋白的表達，降低皮損處細胞因子 IL-23、IL-1β 的分泌，下調 TLR7、TLR8、IL-23及IL-12p40 mRNA的表達。由此得出，涼血解毒湯可抑制DCs活化，改善皮損處T淋巴細胞和DCs的浸潤，有效緩解皮損癥狀。

4 總結與展望

中藥可通過調節DCs成熟以及細胞因子的分泌發揮其促進或抑制免疫應答的作用。一方面，一些中藥可通過增強DCs表面共刺激分子、MHC分子的表達以及促炎因子的分泌增強免疫應答，表明中藥可以作為DCs疫苗佐劑促進特異性抗原引起的免疫應答；另一方面，有些中藥可通過抑制DCs成熟和促炎因子的產生，促進抗炎因子IL-10的分泌，增強調節性T細胞的增殖進而改善自身免疫性疾病或者過敏性炎癥反應，表明中藥可以作為耐受性佐劑參與特異性抗原引起的免疫耐受。除此之外，中藥亦可通過 TLR4、NF-κB、JNK 和 MEK-ERK信號通路調節DCs成熟和細胞因子的分泌。

以上研究表明，中藥在治療疾病方面有很多優勢，具有多環節、多靶點、綜合調節的特點，而隨著中藥在預防和治療疾病方面的廣泛使用，我們可基于DCs研究中藥對疾病的治療作用，為中藥的研發和臨床應用提供新的視角，為新的治療手段提供新的思路，為中藥國際化提供新的著力點。