中性粒細胞CD64指數在嬰幼兒社區獲得性肺炎診斷中的應用價值

瞿斐 楊愛平 張群威 竇琳琳 劉軍

嬰幼兒社區獲得性肺炎是指在醫院外感染發病或在醫院外獲得而于住院48h之內發病的肺實質和（或）肺間質感染性炎癥，也包括有明確潛伏期的病原體感染而在入院后潛伏期內發病，并排除醫院獲得性肺炎，是嬰幼兒最常見的疾病，可由細菌、支原體及病毒等感染而致病[1]。目前診斷肺部感染常用方法有血常規、C 反應蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）、紅細胞沉降率（ESR）、血培養、痰培養和X線檢查等[2]，但臨床上鑒別診斷困難而易誤診或漏診。中性粒細胞CD64（nCD64）指數在肺部感染發生和發展過程中的大量表達已有報道[3]。nCD64指數正常情況下低水平表達，當機體受到細菌感染時nCD64指數表達就會升高，大量表達的nCD64指數與其配體結合后，啟動并放大免疫反應，包括吞噬作用、抗體依賴細胞介導細胞毒反應和細胞因子的釋放。本研究通過對嬰幼兒社區獲得性肺炎患兒進行nCD64指數測定，探討其在嬰幼兒社區獲得性肺炎的診斷和抗感染療效觀察中的應用價值。

1 對象和方法

1.1 對象選取2015年12月至2016年12月在我院兒科住院的嬰幼兒社區獲得性肺炎患者，根據X線檢查和內科學診斷標準，且微生物室細菌培養陽性60例（細菌感染組），男31例，女29例，年齡6個月～4歲，平均年齡（20.8±13.3）個月；肺炎支原體IgM抗體陽性且細菌培養陰性60例（支原體感染組），男32例，女28例，年齡6個月～4歲，平均年齡（18.4±3.8）個月。收集同期我院健康體檢嬰幼兒60例（健康組），男35例，女25例，年齡 6個月～4 歲，平均年齡（19.4±3.2）個月，實驗室檢測指標正常且無其他臨床癥狀。3組嬰幼兒性別、年齡比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

1.2 方法 在使用抗生素治療前進行采血檢測各項指標，標本存放于-20℃冰箱，一次性上同一臺儀器操作，減少實驗誤差。

1.2.1 nCD64指數 采用EDTA抗凝的紫帽管抽靜脈血2ml，應用美國BD公司FACS CantoⅡ流式細胞儀檢測。直接免疫熒光染色：將全血添加到試劑中，試劑中的熒光染料抗體會特異性地與白細胞表面抗原結合，用溶血素處理染色樣本以裂解白細胞。采集期間，細胞經過激光束并使激光發生散色。染色細胞會發出熒光，這些被儀器探測到的散射光和熒光信號可以提供有關細胞大小，內部復雜性和相對熒光強度信號。再通過BD MultisetTM軟件確定絕對計數。使用統一的電壓條件（600mV）和電子補償。每個樣本計數10 000個細胞，結果以陽性細胞的百分率表示。

1.2.2 PCT 采用無抗凝劑紅帽管抽靜脈血3ml，應用電化學發光法測定，羅氏診斷有限公司COBAS6000及配套試劑，并按要求進行定標和質控試驗。

1.2.3 CRP 采用EDTA抗凝的紫帽管抽靜脈血2ml，應用免疫比濁法，上海希亞克DELTA全自動檢測儀進行測定，使用配套試劑,并按要求進行定標和質控試驗。其中經抗生素治療后X線檢查并結合臨床癥狀顯示好轉者29例，于治療后3d再次抽取靜脈血檢測各項指標。據相應公司試劑盒說明書及結合我院實驗室參考指標：nCD64 指數≥2.5、PCT≥0.128μg/L、CRP≥8mg/L 為陽性。

1.3 統計學處理 應用SPSS17.0統計軟件。計量資料以表示，多組間比較采用方差分析；治療前后的比較采用配對t檢驗；采用ROC曲線分析臨床診斷靈敏度與特異度。

2 結果

2.1 3組嬰幼兒治療前nCD64指數、PCT和CRP水平的比較 細菌感染組與支原體感染組nCD64指數、PCT、CRP水平比較差異均有統計學意義（均P＜0.05）；細菌感染組與健康組nCD64指數、PCT、CRP水平比較差異均有統計學意義（均P＜0.05）；支原體感染組與健康組nCD64指數、PCT、CRP水平比較差異均無統計學意義（均P＞0.05），詳見表1。

表1 3組嬰幼兒治療前nCD64指數、PCT和CRP水平的比較

2.2 細菌性肺炎患兒治療前后nCD64指數、PCT、CRP動態變化 細菌性肺炎患兒治療后3d的nCD64指數、PCT、CRP 水平分別為 7.86±1.58、（2.32±0.84）ng/ml、（38.6±7.3）mg/L，均明顯低于治療前，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

2.3 正常參考值時nCD64指數、PCT、CRP診斷參數及ROC曲線面積（AUC） 研究結果顯示，嬰幼兒細菌性感染組nCD64指數、PCT、CRP指標AUC分別為0.901、0.821、0.732，nCD64 指數較其它炎癥指標有更好的靈敏度（81.6%），但特異度卻不如實驗室常用炎癥指標 PCT、CRP，其中 CRP靈敏度最差（42.9%），但特異度最好（95.5%），詳見表2。

表2 正常參考值時nCD64指數、PCT、CRP診斷參數及AUC

3 討論

隨著醫療技術的發展，我國嬰幼兒病死率不斷下降，但農村及欠發達地區病死率依然較高[4]。嬰幼兒感染性肺炎是嬰幼兒期感染性疾病中最常見的疾病，以彌漫性肺部病變及不典型的臨床表現為其特點。如果不及時治療會引起呼吸窘迫、甚至窒息，嚴重者會因為缺氧引起大腦損傷，留下永久的后遺癥，若能及早進行診斷和治療，可以大大降低嬰幼兒感染性肺炎的病死率。近年來，應用流式細胞儀檢測nCD64指數在診斷細菌性感染中的作用頗為引人注目。nCD64指數介導中性粒細胞的吞噬作用，是中性粒細胞產生吞噬的早期信號[5]。Allen等[6]指出，非感染性炎癥反應和病毒感染均不會引起nCD64指數在中性粒細胞的表達增加，從而說明nCD64指數表達升高在新生兒細菌感染中具有很高的特異度。中性粒細胞是機體抵抗感染的主要防御細胞，在其作用機制中，它需通過細胞膜上特殊的受體與抗體或補體結合發揮功效。中性粒細胞表面可表達3種：Fcr-R（CD64）、Fcr-RⅡ（CD32）、Fcr-RⅢ（CD16）。nCD64指數參與中性粒細胞的吞噬作用。nCD64指數是IgG的FcⅠ段受體，屬免疫球蛋白超家族的成員。nCD64指數識別免疫球蛋白的Fc片段，其表達受細胞因子的調節，起到了連接體液免疫和細胞免疫的橋梁作用。nCD64指數在外周血中主要分布于單核細胞、巨噬細胞及樹突細胞表面，而在中性粒細胞表面低水平表達，當受到細菌細胞壁的脂多糖（LPS）和粒細胞集落刺激因子（GCSF）、IFN-γ等因子刺激時，可使nCD64指數在中性粒細胞表面大量表達。非感染性炎癥反應和病毒感染均不會引起nCD64指數在中性粒細胞的表達增加。從而說明nCD64指數表達升高在嬰幼兒細菌感染中具有很高的特異度。Streimish等[7]的研究表明nCD64指數和特定的血液標準可以作為嬰幼兒感染性疾病的診斷指標。nCD64指數正常情況下低水平表達，當機體受到細菌感染時nCD64指數表達在4～6h內就會升高[8]，大量表達的nCD64指數與其配體結合后，啟動并放大免疫反應，包括吞噬作用、抗體依賴細胞介導細胞毒反應和細胞因子的釋放。目前,嬰幼兒社區獲得性肺炎高發，細菌以金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌為多見。病毒以呼吸道合胞病毒、腺病毒感染多見。肺炎的早期診斷和及時治療是決定預后的關鍵，尤其是免疫力低下患者還可能導致不良結局。細菌培養最具特異性，但受到報告及時性不理想的限制，常被作為回顧性的確認指標[9]。目前嬰幼兒肺炎的診斷多依據X線檢查、WBC與分類、CRP、ESR和細菌培養。WBC除細菌性感染外，還在急性、創傷、手術、應激等均可增高[10]，作為非特異性炎癥指標，不適合于早期診斷。CRP是臨床常用的判斷細菌感染的指標，但其靈敏度、準確度較低，所以不能滿足臨床需要，故聯合應用才能有利于提高嬰幼兒細菌感染性肺炎早期診斷準確度。

本研究結果顯示，nCD64指數指數在嬰幼兒細菌性肺炎組呈現高表達，在支原體肺炎組和健康對照組不增高，差異具有統計學意義（P＜0.01），可以作為嬰幼兒肺部細菌感染診斷和鑒別診斷的重要指標。ROC曲線顯示，nCD64指數的最佳臨界值為2.5，靈敏度和特異度分別為81.62%和87.42%，AUC為0.901，有較高的準確性，由此看出nCD64指數有較高的臨床應用價值。另外，本研究動態觀察了細菌性肺炎組治療前后nCD64指數的表達水平，結果顯示治療前的nCD64指數水平明顯高于治療后，差異有統計學意義（P＜0.05），表明嬰幼兒細菌性肺炎時nCD64指數明顯增高，并隨著治療好轉而逐漸降低，可以作為抗生素治療有效性的指標。nCD64指數在嬰幼兒細菌感染性肺炎診斷方面優于其它兩項炎癥指標，而CRP特異度最高達95%以上，體現在嬰幼兒細菌感染性肺炎排除方面優于nCD64指數、PCT，聯合應用血清學炎癥指標不僅有利于提高嬰幼兒細菌感染性肺炎早期診斷準確度，而且還有利于降低嬰幼兒細菌感染性肺炎診斷假陽性的發生，早期準確診斷，提前用藥，降低嬰幼兒病死率，縮短住院時間，降低醫療負擔[11]。如血清學炎癥指標陰性，結合細菌培養結果，可排除嬰幼兒細菌感染性肺炎，避免過度治療，導致醫療資源浪費及細菌耐藥的產生[12]。

nCD64指數測定雖有著上述優點，但是本次實驗標本例數較少，和其他檢測方法一樣存在假陽性的問題，由于本研究存在局限性，我們認為nCD64指數不能完全替代其他實驗室檢測方法，且治療后數據收集不全，還待擴大樣本數完善數據，得到更可靠的結論，同時需要臨床醫生結合病情和相關檢測結果具體分析，對疾病進行診斷和治療。

綜上所述，流式細胞儀檢測nCD64表達對嬰幼兒細菌性肺炎的診斷和鑒別診斷、抗感染治療效果的觀察有較高的臨床價值。嬰幼兒社區獲得性肺炎若能得到早期正確診斷和及時對癥處理，不僅可以大大縮短新生兒住院時間和防止抗生素的濫用、而且還可以明顯降低嬰幼兒醫療費用及住院期間病死率。nCD64指數作為一種快捷、方便、靈敏度高、特異度好的檢測方法，值得臨床推廣應用。

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