板栗殼生藥研究及有效成分沒食子酸、綠原酸、蘆丁含量的測定

范雙雙，曾濤，朱毓永

（河北民族師范學院，河北 承德 067000）

我國是板栗產量最大的國家，每年板栗的消耗量也最大，但是量大的板栗殼處理工作，成為人們關注的一個重要課題。研究發現，板栗殼中含有大量的藥學價值的成分，藥性甘甜，對心血管疾病有著很好的防治功效，還能調理脾胃等疾病。其中通過對板栗殼進行乙醇提取之后，發現其中含有豐富的沒食子酸、綠原酸、蘆丁、綠膿桿菌等。沒食子酸對腸道中的菌群具有一定的刺激作用，能殺滅腸道細菌，治療胃腸道疾病。因此，提取板栗殼的成分具有重要意義。下面將對有效成分的測定及其結果進行研究，總結報告如下。

1 一般資料與方法

1.1 材料與設備

板栗去殼，將板栗殼研磨成粉末，置于陰涼處備用；選取90%的沒食子酸作為對照品，96．6%的綠原酸對照品及90．7%的蘆丁對照品。甲醇、乙睛、色譜純、超純水等。高效液相色譜儀，型號1510系列，高壓四元泵，在線脫氣機、自動進樣器、PDA二極管陣列檢測器、柱溫箱、顯微鏡系統即攝像頭；超聲波清洗器、電子天平秤及粉碎機、旋轉蒸發儀。

1.2 方法

（1）樣品配制。將板栗殼置于顯微鏡下，使用粉碎機將板栗殼碾壓成粉末，進行切片配制；選取丙三醇-50%乙醇（1:1）溶液中軟化48h，依次轉移到70%乙醇、80%乙醇及90%的乙醇，使用脫洗機進行脫洗，分別于3h后，使用無水乙醇溶液進行2次沖洗，10min/次。脫水后將材料依次放于正丁醇-無水乙醇，1h后置于正丁醇-無水乙醇溶液中再進行脫洗，30min后，置于正丁醇中反復再沖洗1次。待溶液徹底清澈后，將石蠟加入融合，調制成1:1比例的溶液，將混合溶液倒出；將55℃的石蠟置于器皿中，然后將溶液置于其中24～48h；浸潤完畢后，將材料埋于石蠟中，完全凝固后制成切片，10～16μm1片，使用蒸餾水將切片沖洗干凈，置于恒溫臺上的展片中，使用電熱干燥劑進行烘干，完全去水后，置于烘干機中，設定溫度為36℃，烘切片24h，并進行2次熔蠟，30min/次，依次放入二甲苯-無乙醇水溶液中，再此進行染色，操作同前面切片的制作流程，最終獲得固體切片，然后使用顯微鏡進行觀察，并拍照。粉末切片目篩，選擇粉碎過后的40目篩，取粉末少量作為樣品，置于干凈的載玻片上，滴加水合氯醛溶液，使用酒精燈加熱，滴上稀甘油溶液，密封后置于顯微鏡下觀察，觀察中橫切面細胞分布狀態。

（2）色譜測定方法。使用Hypersil ODS2型號的高效液相色譜儀器，設定色譜柱為250×46mm，5μm；使用乙睛-水-甲醇-水溶液，與水混合配制成水醋酸或磷酸作為流動相，利用等度進行脫洗，分離沒食子酸、綠原酸及蘆丁成分，設定最大可獲取波長為275nm，流速為1ml/min，柱溫30℃，進樣體積為10μL。分別取沒食子酸1．4mg/ml、綠原酸 1．73mg/ml及蘆丁 1．4mg/ml對照品，加乙醇溶液進行固定，測定獲得沒食子酸、氯酸溶液及蘆丁的 含 量 分 別 為 52．34、66．01 和 49．80μg/ml； 將 所有溶液都配制并裝于器皿中，置于4℃溫度中備用。

（3）供試品溶液的配制。對板栗殼進行目篩后，恒溫干燥。使用天平秤稱取0．2g板栗殼粉末，分別加入極性不同的甲醇、乙醇、乙酸乙酯各30ml，置于40℃，頻率為20kHz超聲設備下，間歇提取45min，冷卻過濾后，蒸發后提取溶劑，殘渣中添加甲醇溶解定容至25ml，用0．23μm有機過濾。

2 結果

2.1 顯微鏡下在縱橫切面成像的特征

按照板栗殼的橫切面、縱切面果皮細胞的特點，中果皮石細胞和石細胞環帶、內果為較多的非腺毛果皮。其中有很多的石細胞，細胞呈不均勻結構、大小，排列并不規律；壁稍厚，且外面有一層角質層；中果皮由數列細胞組成，且零散有小型外韌纖維管束，內果皮上有薄壁細胞。

2.2 切片基底組織的特征

根據縱橫切面的分布特點，切片基底組織也呈現一定的特點，其細胞結構內有方晶體和草酸鈣晶體，大量的石細胞呈圓形，且還有石細胞群帶，呈不規則分布，分枝狀，可見明顯的分枝，并且有明顯的空隙。

2.3 沒食子酸、綠原酸及蘆丁含量的測定

樣品處理條件下，選取不同比例的乙醇和甲醇，板栗殼提取溶液呈深色，含有量的沉淀素，有可能使得測定結果受到一定的干擾。在經過萃取后，使用石油醚浸潤后，通過乙酸乙酯超聲脫洗，最終提升了測定結果的精準度。經過上述樣品的配制后，精密度取板栗粉末0．2g；在30ml石油醚浸潤30min后，棄去石油醚液，過濾藥渣并蒸干；加30ml乙酸乙酯，經過間歇性超聲提取后再次過濾，去掉乙酸乙酯后，殘渣加甲醇溶液，并解定溶液至25ml。最終在色譜條件下，獲得了乙腈-0．4%磷酸或甲醇-0．4%磷酸，通過梯度脫洗之后，形成3種成分，并分離其它液體的干擾，最終在色譜測定下，獲得沒食子酸含量 0．33～0．3649mg/g、綠原酸為0．128～0．142mg/g、蘆丁為 0．183～0．234mg/g。色譜對 3種成分的敏感度均較高，且呈一定規律的波長。

3 結果

板栗作為重要的殼斗科植物，具有很強的生藥價值，在現代藥理研究中，均表明其具有很高的醫用價值，作用十分廣泛。因此，加強對板栗殼中有效成分的提取，不僅能減輕我國每年處理板栗殼產量的壓力，還能有效合理地開發和利用板栗殼的優先生藥資源，為臨床提取藥物品種奠定堅實的基礎。因此，我國應該注重全面提升板栗殼的醫藥和保健價值。板栗殼中含有大量的乙醇、乙酸乙酯、氯仿及丁正醇，還有豐富的黃酮、酚類及有機酸等類物質，以沒食子酸、綠原酸及蘆丁等成分為主，是重要的抗菌消炎的成分，還能預防衰老，抗氧化和自由基，預防腫瘤等藥理活性。所以，對其成分及含量的測定，能建立板栗殼的質量檢驗標準。

根據韋琴的研究結果，他采用高效液相色譜和鐵鹽催化比色法，對板栗殼中的原花青素成分進行測定，最終發現高效液相色譜技術的應用，其操作方便，效果精準，實踐證實了該方法的應用價值。在本次研究中，也使用了高效液相色譜對其含量進行測定，其結果顯示，板栗殼在顯微鑒定下，呈一定的特征，中橫切面外果皮細胞呈圓柱形或柵狀排列，其中含有較大的石細胞或石細胞群，中果皮內側有石細胞呈環狀帶，并密集分布著草酸鈣簇晶體和方晶體。最終通過作性狀、組織切片及粉末特征的處理后發現，采用高效液相色譜對沒食子酸、綠原酸及蘆丁含量進行測定后，發現3種成分的含量分別呈一定的相關性，且RSD峰面曲線也存在一定的特點。高效液相色譜測定方法，在操作中更加方便，且結果精準，為板栗殼生藥標準的建立奠定了堅實的基礎。

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