體外受精胚胎細胞數量和碎片率對囊胚形成的影響

李娜+韋靜

[摘要] 目的 探討體外受精胚胎細胞數量和碎片比例對囊胚形成的影響。 方法 選擇2016年1～10月柳州市工人醫院婦產科200例患者在體外受精后3 d得到的胚胎。根據囊胚數將其分為2～3c組（2～3個細胞），4c組（4個細胞），5c組（5個細胞），6c組（6個細胞），7c組（7個細胞），8c組（8個細胞），9c組（9個細胞），10c組（10個細胞），11c組（11個細胞），12c組（12個細胞），≥13c組（≥13個細胞）。分析胚胎移植時細胞數及碎片等級（碎片等級為1級，碎片率≤5%；2級：碎片率>5%～20%；3級：碎片率>20%～30%；4級：碎片率>30%）對囊胚質量的影響。 結果 碎片等級1～2級的囊胚與3～4級的囊胚中，均為8 c組有效囊胚形成率與優質囊胚形成率最高（χ2=200.760、119.162、243.532、136.395，均P < 0.01）。 結論 在體外受精胚胎移植中，碎片等級1～2級與3～4級的均為8c組囊胚質量最好，此結果對于指導選取高質量胚胎具有參考價值。

[關鍵詞] 體外受精；胚胎細胞數量；碎片比例；囊胚形成

[中圖分類號] R711.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）12（c）-0093-05

[Abstract] Objective To investigate the effects of the number of in vitro fertilized embryos and the ratio of fragments on blastocyst formation. Methods From January to October 2016， 200 patients who underwent in vitro fertilization in Liuzhou Worker′s Hospital were given embryos 3 days after completion of fertilization， grouping of embryos according to the number of blastocysts， they were divided into 2-3c group （2-3 cells）， 4c group （4 cells）， 5c group （5 cells）， 6c group （6 cells）， 7c group （7 cells）， 8c group （8 cells）， 9c group （9 cells）， 10c group （10 cells）， 11c group （11 cells）， 12c group （12 cells）， more than 13c group （more than 13 cells）. Grading operations on fragments. The effect of cell number and fragmentation level （the fragmentation rate of grade 1 is less than 5%； the fragmentation rate of grade 2 is >5%-20%； the fragmentation rate of stage 3 is >20%-30%； and the fragmentation rate of grade 4 is higher than 30%.） on the quality of blastocysts during embryo transfer was analyzed. Results The effective blastocyst formation rate and the high quality blastocyst formation rate in 8c group were the highest， in the 1-2 grade fragment level of the blastula and the 3-4 fragment level of the blastula（χ2=200.760， 119.162， 243.532， 136.395， all P < 0.01）. Conclusion In in vitro fertilization embryo transfer， the level of grade 1-2 and grade 3-4 is all 8c group， and the quality of blastocyst is the best. This result has a reference value for guiding the selection of high-quality embryos.

[Key words] In vitro fertilization； Embryo cell number； Fragment ratio； Blastocyst formation

體外受精胚胎移植是精子與卵細胞在體外進行受精，受精卵體外培養一段時間，將早期的胚胎移植到女性子宮內繼續成長發育，待胎兒發育成熟后正常分娩的輔助生殖技術[1-3]。臨床上多采取多個早期胚胎移植，但是提高移植成功率的同時導致多胎兒概率增加[4-5]。隨著生殖醫學技術的發展，體外受精胚胎移植技術也獲得了長足的進步，如何保證移植胚胎的正常發育，有效避免多胎的發生是目前研究的重點[6-8]。如何有效檢測早期胚胎的質量以及提高移植的成功率，是體外受精胚胎移植技術的主要問題所在。近期的相關臨床研究發現，囊胚技術的應用可以解決上述問題，但是由于囊胚技術體外培養時間較長，如何有效檢測評估囊胚質量，是胚胎移植成功的主要影響因素[9]。柳州市工人醫院（以下簡稱“我院”）婦產科通過測定胚胎的細胞數以及碎片數量對評估囊胚的發育潛能在臨床應用中取得了較好臨床效果，筆者對我院婦產科200例體外受精胚胎移植患者的臨床資料進行分析，現報道如下：endprint

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2016年1～10月我院婦產科200例體外受精胚胎移植患者的臨床資料為研究對象，年齡21～34歲，平均年齡（27.51±5.52）歲，全部患者均簽訂我院醫學倫理委員會通過的科學實驗對象知情同意書。納入標準：患者年齡20～35歲，順利完成體外受精過程、受精卵在前3 d內發育正常，觀察到有效囊胚形成的患者胚胎。排除標準：通過卵胞漿內單精子顯微注射技術（ICSI）進行受精的胚胎；補救ICSI周期性的胚胎；第5日處于桑葚狀態即被移植或者冷凍的胚胎；受精成功胚胎未能良好發育的患者，移植胚胎超過卵裂期胚胎的患者；隨訪失敗或中途退出的患者。

1.2 研究方法

患者在月經來潮的第2天在皮下注射激動劑達必佳（Ferring GmbH，批號：H20140123）0.1 mg/d，在注射后第3天根據患者的年齡、基礎卵泡數量和基礎促卵泡激素水平給予促性腺激素，然后根據卵泡大小和激素水平調整用藥的劑量。患者利用陰道B超對卵泡發育情況進行監測，當有1～2個卵泡直徑超過18 mm時，給患者肌肉注射絨毛膜促性腺激素（HCG，麗珠醫藥集團股份有限公司）10 000 U，在36 h之后經超聲引導下行卵泡穿刺術，在直視顯微鏡下選取卵丘復合物，至于培養液中進行常規培養2～4 h后進行體外受精，獲取受精卵后洗滌受精卵并至于G1培養液中，觀察受精卵分裂以及早期胚胎的發育情況，待第3天時胚胎不做移植或冷凍，所有胚胎均用于囊胚培養。

1.3 觀察指標

統計全部患者第3日胚胎移植時細胞數以及碎片數（碎片等級），對囊胚質量分析。囊胚質量標準參考文獻[10]。根據第3日時胚胎細胞數對所培養的囊胚進行分組。胚胎細胞數2～3個細胞（2～3c組），4個細胞（4c組），5個細胞（5c組），6個細胞（6c組），7個細胞（7c組），8個細胞（8c組），9個細胞（9c組），10個細胞（10c組），11個細胞（11c組），12個細胞（12c組），≥13個細胞（≥13c組）。碎片等級[10]，1級：碎片率≤5%；2級：碎片率>5%～20%；3級：碎片率>20%～30%；4級：碎片率>30%。

1.4 質量控制

所有的胚胎評估均由3名有經驗的胚胎工作者進行同時評估，如果3人的意見不能統一，則利用無記名投票，少數服從多數的方式決定。

1.5 統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 總體情況

在本次研究中共納入了3709個培養3 d的受精卵，其中碎片等級1～2級的為1788個，碎片等級3～4級的為1921個。

2.2 碎片等級1～2級的囊胚形成情況比較

碎片等級1～2級的囊胚質量研究中，8c細胞組有效囊胚形成率（48.92%）、優質囊胚形成率較高（32.26%），其次分別為7c組、9c組早期胚胎，其囊胚質量僅次于8c組，也具有較好的有效囊胚形成率、優質囊胚形成率，各組之間的比較結果差異有高度統計學意義（χ2=200.760、119.162，均P < 0.01）。見表1～3。

2.3 碎片等級3～4級的囊胚形成情況

碎片等級3～4級的囊胚質量研究中，8c細胞組有效囊胚形成率（52.43%）、優質囊胚形成率較高（34.59%），其次分別為9c組、10c組早期胚胎，其囊胚質量僅次于8c組，也具有較好的有效囊胚形成率、優質囊胚形成率，各組之間的比較結果差異有高度統計學意義（χ2=243.532、136.395，均P < 0.01）。見表4～6。

3 討論

輔助生殖技術的應用中，如何有效地保證胎兒的健康以及正常發育，是目前研究重點，移植胚胎的質量是保證輔助生殖成功的關鍵[11-13]。在大量的臨床報道中可以發現，輔助生殖技術失敗的受孕者，其主要原因是胚胎質量較差。臨床上多采用檢測早期胚胎的細胞數以及碎片比例來選取健康、成功率高的胚胎進行移植。

碎片是受精卵體外發育時的一種常見現象，可能是受精卵對外界環境刺激的毒性反應，細胞凋亡的數量越多，導致碎片生成的比例越高[14]。因此，根據碎片的多少進行分級，常用的為碎片比例四級分級，碎片比例高的胚胎活性低，植入后存活率低，而且導致的畸胎率也較高[15]。

在本次研究中筆者通過研究不同組別細胞數的早期胚胎囊胚發育情況后發現，在碎片等級為1～2級的胚胎中，8c細胞組的早期胚胎，其囊胚質量好，有效囊胚形成率、優質囊胚形成率均較高，植入后的發育成功率應該較高，其次在無8c數的胚胎時可以選取囊胚質量次級的7c組胚胎。在對碎片等級3～4級的囊胚質量研究中，本研究發現，8c細胞組的早期胚胎，仍然是有效囊胚形成率、優質囊胚形成率較高的早期胚胎，但是無8c組細胞時，其次選取組別為9c組早期胚胎，其囊胚質量僅次于8c組。

由于輔助生殖技術其技術含量較高，體外受精以及體外培養時間長、培養過程復雜，在實際應用中，各種因素均可能影響胚胎的發育以及囊胚的質量[15-16]。為提高受孕成功率以及保證胎兒的安全，必須早期對植入胚胎進行科學有效的評估。通過分析早期胚胎的細胞數以及胚胎碎片等級，作為常用的無創性胚胎質量評估手段，在其應用中可以對早期胚胎進行質量評估[17]。本研究選取的研究對象數量有限，而且研究的時間就截止到受精卵培養后的3 d，在受精卵置入子宮后，是否成功妊娠以及妊娠的結局并沒有進行跟蹤調查，所以本研究分析結果尚需要進一步的驗證完善，但對比既往類似研究可以發現本研究結果具有一定的科學性，在臨床中具有一定的參考意義。endprint

綜上所述，在體外受精胚胎移植技術中，通過分析檢測胚胎細胞數量以及碎片分級可以有效分析囊胚形成的質量，細胞數量與有效胚囊形成率，優質胚囊形成率之間的數據具有相關性，其中碎片等級1～2級的以8c組囊胚質量最好，其次為7c組，碎片等級3～4級的以8c組囊胚質量最好，其次為9細胞組。

[參考文獻]

[1] 廖桂芝，丁潔，顧斌，等.體外受精胚胎細胞數量和碎片比例對囊胚形成的影響[J].生殖與避孕，2015，35（12）：879-883.

[2] 王珊珊，曾惠明，張寧媛，等.不同受精方式對單原核胚胎發育潛能的影響[J].中國性科學，2014，5（6）：45-48.

[3] Xiong T，Zhao Y，Hu D，et al. Administration of calcitonin promotes blastocyst implantation in mice by up-regulating integrin β3expression in endometrial epithelial cells [J]. Hum Reprod，2012，27（12）：3540-3551.

[4] 馬海蘭，羅克莉，龔斐，等.輔助生殖技術助孕出生嬰兒性別比例的初步調查[J].生殖醫學雜志，2013，22（3）：203-204.

[5] de Ziegler D，Streuli I，Meldrum DR，et al. The value of gro？鄄wth hormone supplements in ART for poor ovarian responders [J]. Fertil Steril，2011，96（5）：1069-1076.

[6] 于洪君.體外受精-胚胎移植術后的妊娠并發癥和出生結局[D].沈陽：中國醫科大學，2010.

[7] Yovich JL，Stanger JD. Growth hormone supplementation improves implantation and pregnancy productivity rates for poor-prognosis patients undertaking IVF [J]. Reprod Biomed Online，2010，21（1）：37-49.

[8] Jimenez CR，de Azevedo JL，Silveira RG，et al. Effects of Growth Hormone on In Situ Culture of Bovine Preantral Follicles are Dose Dependent [J]. Reprod Domest Anim，2016，51（4）：575-584.

[9] 萬永杰.體細胞核移植法生產轉人乳鐵蛋白基因奶山羊技術體系優化的研究[D].南京：南京農業大學，2012.

[10] 廖桂芝，丁潔，顧斌等.體外受精胚胎細胞數量和碎片比例對囊胚形成的影響[J].生殖與避孕，2015，35（12）：879-883.

[11] 陳亮，徐陽.精子DNA碎片化檢測在男性生殖領域的臨床應用[J].中國男科學雜志，2014，9（7）：60-62，66.

[12] 文宏貴，蘭靈，楊娜，等.不同輔助生殖技術方法獲得的單胎兒分娩結局的比較[J].生殖醫學雜志，2014，23（11）：894-896.

[13] Nakamura E，Otsuka F，Inagaki K，et al. Mutual regulation of growth hormone and bone morphogenetic protein system in steroidogenesis by rat granulosa cells [J]. Endocrinology，2012，153（1）：469-480.

[14] 羅龍興，何若鋼，盧晟盛，等.微滴中胚胎數量對豬孤雌胚早期體外發育的影響[J].安徽農業科學，2009，37（16）：7448-7449.

[15] 劉群，胡娟，陳雯，等.D3低形態學評分胚胎的繼續培養及其意義[J].中國婦幼保健，2012，27（31）：4945-4947.

[15] 吳重聰，蔡桂豐，楊桂艷，等.多胎妊娠自然減胎對輔助生殖技術臨床結局影響的研究[J].中國醫學創新，2016， 13（18）：9-12.

[16] 范柳，施艷秋.卵巢儲備功能下降中西醫治療研究進展[J].中國醫藥導報，2015，12（33）：65-68.

[17] 吳成勇，楊滿，林梅，等.小鼠卵胞漿內單精子顯微注射改良技術在輔助生殖技術應用中的價值[J].中國醫藥導報，2015，12（1）：8-11.

（收稿日期：2017-09-30 本文編輯：任 念）endprint