探究異基因造血干細胞移植術后巨細胞病毒感染及慢性移植物抗宿主病的關系

張建平+李楠楠+范立軍+高新霞+尹東旭

【摘要】 目的 分析白血病患者行異基因造血干細胞移植術后出現巨細胞病毒感染和慢性移植物抗宿主病間的臨床關系。方法 92例行異基因造血干細胞移植的患者作為研究對象， 于術后的100 d～1年通過微粒子酶免分析法、巨細胞病毒 pp65抗原檢測依次對巨細胞病毒感染情況進行1次/月的檢測。對于慢性移植物抗宿主病患者同時予以酶聯免疫吸附法（ELISA）對白細胞介素-2（IL-2）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平進行檢測。比較術前與術后100 d～1年巨細胞病毒活動性感染率的差異;對巨細胞病毒感染靜止期與活動期的局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者IL-2、TNF-α水平加以觀察比較。結果 依據巨細胞病毒陽性細胞等檢測結果知曉， 術后100 d～1年， 異基因造血干細胞移植的巨細胞病毒活動性感染率為32.61%（30/92）， 明顯高于術前的16.30%（15/92）， 差異具有統計學意義（χ2=6.6187， P=0.0101<0.05）。30例慢性移植物抗宿主病患者巨細胞病毒感染活動期， 局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者分別為10、20例;巨細胞病毒感染靜止期， 局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者分別為22、8例。巨細胞病毒感染活動期， 廣泛性慢性移植物抗宿主病患者外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于局限性慢性移植物抗宿主病患者， 差異具有統計學意義（P<0.05）;廣泛性慢性移植物抗宿主病患者， 巨細胞病毒感染活動期外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于巨細胞病毒感染靜止期， 差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 行異基因造血干細胞移植術后， 巨細胞病毒活動性感染能夠經提高外周血之中的IL-2、TNF-α水平進而將慢性移植物抗宿主病產生及嚴重程度增加。

【關鍵詞】 異基因造血干細胞移植術;巨細胞病毒感染;慢性移植物抗宿主病

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.03.020

異基因造血干細胞移植屬于當前白血病臨床患者實現治愈的最為有希望一種治療措施， 而慢性移植物抗宿主病與巨細胞病毒感染均是在異基因造血干細胞移植后期出現的重大并發癥。經基礎性研究報道[1]， 其間存在顯著的密切關系， 也屬于因果關系。對其關系展開深入研究有利于增高移植手術的成功率， 本院選取自2015年4月～2016年4月行干細胞移植的92例患者作為研究對象， 詳細的研究內容總結如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院自2015年4月～2016年4月行異基因造血干細胞移植的92例患者進行研究， 所有患者都屬于首次實施異基因造血干細胞移植治療， 經診斷和《血液病診斷療效與標準》相符， 均已經通過免疫學、細胞形態學、細胞遺傳學確診。患者中女35例， 男57例， 年齡12～52歲， 平均年齡（37.3±5.7）歲。

1. 2 方法 對92例移植患者進行巨細胞病毒 pp65抗原檢測的步驟為：①白細胞的分離：先采取5 ml的EDTA抗凝血， 運用右旋糖酐沉降法對白細胞進行分離。②細胞濃度的調整：以磷酸鹽緩沖液把細胞濃度調整成1.5×106/ml。③細胞涂片的制備。④破膜、固定。⑤免疫熒光染色：對pp65 的混合單克隆抗體加抗后， 進行PBS的洗滌與晾干， 再把FITC標記好的免疫球蛋白（Ig）G加入， 放在濕盒當中， 以37℃進行30 min的溫育， PBS洗滌之后進行鏡檢。⑥讀片并判定結果：以熒光顯微鏡對全部細胞與結果進行觀察， 其巨細胞病毒 pp65的陽性細胞表現為均勻的黃綠色或綠色， 核染色為多葉或圓形。判斷呈現陽性結果的標準為：在平均2×105個白細胞當中， 巨細胞病毒pp65的陽性細胞數至少有1個或更多[2];同時應用微粒子酶免分析法對巨細胞病毒-IgM進行定量檢測， 把其滴度<0.5視作陰性標準。全部患者進行輸注干細胞的100 d～1年， 對其外周血當中的巨細胞病毒-抗原（Ag）陽性細胞數、巨細胞病毒-IgM 滴度進行檢測， 保證1次/月[3， 4];

針對其中慢性移植物抗宿主病患者需同時應用ELISA法對IL-2、TNF-α水平進行檢測， 注意在該期間對是否產生巨細胞病毒感染進行密切觀察。

1. 3 觀察指標 比較術前與術后100 d～1年巨細胞病毒活動性感染率的差異;對巨細胞病毒感染靜止期與活動期的局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者IL-2、TNF-α水平加以觀察比較。

1. 4 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 手術前后巨細胞病毒活動性感染情況比較 依據巨細胞病毒陽性細胞等檢測結果知曉， 術后100 d～1年， 異基因造血干細胞移植的巨細胞病毒活動性感染率為32.61%（30/92）， 明顯高于術前的16.30%（15/92）， 差異具有統計學意義（χ2=6.6187， P=0.0101<0.05）。

2. 2 不同巨細胞病毒感染時期局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者IL-2、TNF-α水平比較 30例慢性移植物抗宿主病患者巨細胞病毒感染活動期， 局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者分別為10、20例;巨細胞病毒感染靜止期， 局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者分別為22、8例。巨細胞病毒感染活動期， 廣泛性慢性移植物抗宿主病患者外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于局限性慢性移植物抗宿主病患者， 差異具有統計學意義（P<0.05）;廣泛性慢性移植物抗宿主病患者， 巨細胞病毒感染活動期外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于巨細胞病毒感染靜止期， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。endprint

3 討論

巨細胞病毒感染較為普遍， 患者機體中的免疫功能表現正常時巨細胞病毒于感染細胞內部經整合狀態進行存在性潛伏， 具有較低的復制能力， 一般臨床表現出是靜止性的感染[5]。而機體中的免疫功能在產生抑制時， 巨細胞病毒經再次激活以較高水平進行持續性復制， 同時進入至活動期。異基因造血干細胞移植之后患者機體中免疫功能產生規律性的變化， 巨細胞病毒感染通常產生在進行移植術后的3個月～1年時間段[6-10]。

在本研究之中， 依據巨細胞病毒陽性細胞、巨細胞病毒-IgM滴度檢測結果知曉， 術后100 d～1年， 異基因造血干細胞移植的巨細胞病毒活動性感染率為32.61%（30/92）， 明顯高于術前的16.30%（15/92）， 差異具有統計學意義（χ2=6.6187， P=0.0101<0.05）;證實異基因造血干細胞移植中巨細胞病毒活動性感染的產生率提高和免疫抑制劑的使用相關。于干細胞移植術后的100 d～1年之內， 廣泛性慢性移植物抗宿主病患者， 巨細胞病毒感染活動期外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于巨細胞病毒感染靜止期， 差異具有統計學意義（P<0.05）， 與此同時， 在產生慢性移植物抗宿主病患者中也發現了， 巨細胞病毒感染活動期， 廣泛性慢性移植物抗宿主病患者外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于局限性慢性移植物抗宿主病患者， 差異具有統計學意義（P<0.05）， 也揭示巨細胞病毒活動性感染有可能經外周血當中的IL-2、TNF-α水平升高去增高慢性移植物抗宿主病的產生及嚴重程度等。

綜上所述， 于異基因造血干細胞移植術之后， 使用的免疫抑制劑成為致使巨細胞病毒活動性感染的重要因素， 若是產生慢性移植物抗宿主病， 巨細胞病毒活動性感染的產生會持續增高。相反， 經增高IL-2、TNF-α水平增高慢性移植物抗宿主病的產生率與嚴重程度。

參考文獻

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[收稿日期：2017-09-11]endprint