山玉蘭花中辛夷脂素高效液相色譜含量測定方法的建立與優化

廖汝丹+周青梅

摘要：目的建立系統、科學的山玉蘭花中辛夷脂素的提取和含量測定的方法，為科學評價和有效控制山玉蘭花的質量提供了可靠的方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent ZORBAX C18柱（5μm，250 × 4.6 mm），流動相為甲醇 -水（60∶40），流速為 1.0 mL·min-1，檢測波長為 278 nm，柱溫為30℃。 結果山玉蘭花中辛夷脂素的峰得到有效的分離，HPLC 檢測條件、方法的專屬性、線性、重復性、精密度、穩定性、回收率良好，該方法可以用于辛夷脂素的含量測定。結論該方法準確、簡便、快速，適用于山玉蘭花中辛夷脂素的含量分析，可為山玉蘭花藥材及其制劑的質量控制提供參考。

關鍵詞：山玉蘭花；辛夷脂素；高效液相色譜法

中圖分類號：R284文獻標志碼：B文章編號：1007-2349（2018）01-0077-02

山玉蘭花為木蘭科植物山玉蘭（Magnolia delavayi Franch）.的干燥花及花蕾，為彝族地區習用藥材，微苦、澀，溫。歸胃、肺經。理氣和胃，行氣消食，止咳化痰。用于脘腹脹滿，大便秘結，咳嗽痰多。目前《中國藥典》尚未收載山玉蘭花的含量測定方法，關于測定含量的文獻報道較少，本研究擬采用高效液相色譜法，測定山玉蘭花中辛夷脂素的含量，并對分析方法進行優化，為山玉蘭花藥材及其制劑的質量控制方法研究提供參考。

1材料

安捷倫1100 高效液相色譜儀（美國Agilent 公司 真空在線脫氣機、四元泵、自動進樣器、柱溫箱、UV 檢測器），賽多利斯BSA224S-CW 電子天平，賽多利斯BP211D 電子天平，KQ-500E 型超聲波清洗器，YS-04A 小型高效粉碎機，Millipore 溶劑過濾系統。

辛夷脂素（由中國食品藥品檢定研究院提供，批號111561-201403，供含量測定用），甲醇為色譜純，水為超純

水，其余試劑均為分析純。

山玉蘭花藥材購買于云南紅河州石屏縣，植物標本經中國科學院昆明植物研究所鑒定為木蘭科植物山玉蘭Magnolia delavayi Franch.的干燥花及花蕾。

2方法與結果

2.1高效液相色譜條件色譜柱為Agilent ZORBAX C18柱（5μm，250 × 4.6 mm），流動相為甲醇-水（60∶40），流速1.0 mL·min-1，柱溫為30℃，進樣量20 μL，檢測波長278 nm，理論塔板數按辛夷脂素峰計算不低于 4 000，在此條件下各組分得到良好分離，液相色譜圖見圖 1、圖2 。

2.2對照品溶液的制備精密稱取辛夷脂素對照品10.00 mg，置 25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得。

2.3供試品溶液的制備取山玉蘭花藥材粗粉約 0.25 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加甲醇 25 mL，稱重，浸泡過夜后超聲提取 30 min，放置至室溫，再稱重，并用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，再過 0.45 μm 微孔濾膜，取續濾液即得。

2.4標準曲線的制備精密量取辛夷脂素對照品溶液（0.4 mg·mL-1）稀釋成濃度為 0.02、0.04、0.08、0.16、0.32 mg·mL-1的系列對照品溶液。按上述色譜條件，分別進樣，測定峰面積，以色譜峰面積 A 為縱坐標，對照品濃度 C 為橫坐標，計算得辛夷脂素的線性回歸方程：A=10.787 C+25.274，r=0.999 7，結果表明辛夷脂素在 20 ～320 μg·mL-1進樣濃度范圍內線性關系良好。

2.5精密度實驗精密吸取辛夷脂素對照品溶液，分別進樣 20 μL，重復進樣 6 次，依據上述色譜條件進樣并計算。結果表明：辛夷脂素峰面積平均值為3975.53500，RSD 為 0.12%，表明精密度良好。

2.6重復性實驗精密稱取山玉蘭花粗粉 6 份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按樣品測定方法進行測定并計算。測得辛夷脂素的平均含量為 14.32 mg/g，RSD 為0.46%，結果表明重復性良好。

2.7穩定性實驗在上述色譜條件下，精密吸取同一供試品溶液6 份，在室溫下分別于 0、2、4、6、8、12、24 h 進樣 20 μL，測定并計算，結果測得，辛夷脂素含量的 RSD 為 0.89%，表明山玉蘭花供試品溶液在 24 h 內穩定。

2.8加樣回收率實驗取已測定含量的山玉蘭花樣品 0.1 g 共 6 份，分別精密加入辛夷脂素對照品溶液（1.403 mg/mL）1 mL，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，結果辛夷脂素的平均加樣回收率為 93.75%，RSD 為1.24%，表明本實驗供試品溶液制備方法具有較好的回收率結果見表1。

2.9樣品含量測定按照“2.3”項下方法制備山玉蘭花供試品溶液3份，分別進樣 20 μL，按照上述色譜條件進行測定，以外標法計算樣品中辛夷脂素的含量。結果見表 2。

3討論

山玉蘭花的化學成分復雜，而針對山玉蘭花的化學成分研究未見報道，我們從該科植物的成分進行研究，該科植物主要含有木脂素、倍半萜、二萜、酚苷類化合物，經過大量實驗研究確定山玉蘭花中含辛夷脂素成分。本實驗建立并優化了 HPLC 法測定山玉蘭花中辛夷脂素的含量，其樣品制備方法簡單，分離效果理想，分析快速準確，專屬性強，精密度高，重現性較好，因此本方法可為山玉蘭花藥材質量標準的制定或提高提供實驗依據。[1-4]

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.《中國藥典》2010年版 一部 北京：中國醫藥科技出版社，2010：169.

[2]于宗淵，張希林，劉青，等.HPLC法測定望春花花蕾中辛夷脂素的含量[J].中藥材；2005：10.

[3]曹緯國，陶燕鐸，顏學偉，等.辛夷中辛夷脂素與木蘭脂素高效液相色譜含量測定方法的建立與優化[J].時珍國醫國藥，2014，（7）：30.

[4]徐麗華，崔保國，于宗淵.RP-HPLC法測定辛夷中木蘭脂素與辛夷脂素的含量[J].藥物分析雜志，2003，（10）：20.

（收稿日期：2017-11-20）endprint