色譜技術在檢測牛奶中激素類藥物殘留的應用分析

◎ 陸 斌

（江蘇權正檢驗檢測有限公司，江蘇 南通 226000）

在奶牛養殖進程中，激素類藥品的不科學應用，致使奶牛急速殘余狀況日漸加劇。大量實踐調研顯示，此種殘余除了利用外部環境與食物鏈給人和動物的身體健康帶來威脅外，還會破壞社會自然環境。全面提高色譜技術水平是處理這一問題的有效措施。

1 牛奶中激素類藥品殘余的產生與影響

現階段，牛奶中的激素類藥品殘余的產生一般有下列2種狀況：①奶牛在飼養進程中服用激素。②牛奶在生成之后通過人為手段添加激素。奶牛在發育過程中，服用激素能提升飼料服用速率，加大牛奶產量，高效提升養殖人員的經濟創收。不管是在嚴禁應用激素的區域還是準許應用激素飼養的奶牛地區，經濟效益是應用激素的主要原因。若人類食用了含有激素殘留的牛奶，生殖器官會受到影響，甚至患乳腺癌與前列腺癌。若是發育階段的兒童，因為其身體中雄性激素分泌較少，服用外部大量性激素會大大提高成長速度，或者導致第二特征迅速彰顯[1]。

2 色譜技術在牛奶激素類藥品殘余檢查中的優點

很多國家與區域均紛紛嚴禁運用有關激素型物質，并予以了明確要求。在檢查牛奶中畜用激素型藥品殘余過程中，由于激素型藥品結構相仿，理化屬性和諸多內源性物質類似，其殘余濃度比較貼近或者超過生理水平，因此對結果的精準性有著較高要求，而且要具備高效的試品預處置與機敏性較高的剖析設施來確保有效剖析的擇選性、專一性以及精準性。因此，運用高效的檢查技術來精準地監控與檢測牛奶中激素型藥品的殘余是檢查工作中的一大重點[2]。

檢查技術的發展是處理這一問題的主要途徑。色譜技術在奶牛激素殘余檢查進程中占據重要地位。色譜技術主要包括液相色譜、氣相色譜和不同薄層色譜、色譜聯用以及超臨界流體色譜技術。奶產品的激素類藥品存留檢查中利用率較高的是質譜技術，氣相色譜、液相色譜聯用技術。其中，液相色譜與氣相色譜技術的主要特征是靈活機敏性高、精準性良好、隔離速率快、擇選性優，然而也擁有一些不足之處，如定性水平較差。質譜技術的掃描方式與量化剖析水平，可以有選擇性地檢查目標激素，針對其余無需檢查的便不予以檢查，此優點能高效去除雜物對檢查結果精準性的干擾，從而提升了檢查結果的精準性。將分離水平高的色譜技術融合在一起，彼此展現自身優點，這是質譜與色譜聯用的手段，在檢測牛奶激素類藥品殘留中運用越來越多。

3 色譜技術在牛奶激素類藥品殘余檢查中的應用

現階段，殘留限量的激素型藥物品種，依據其類型可劃分成孕激素、雄激素、β受體激動劑、皮質激素、雌激素。但在牛奶中，5種激素殘余濃度偏低，因此牛奶里激素類藥品殘余通常采用色譜剖析法與免疫分析法兩種檢查手段進行檢測。免疫分析法是單調測量手段，只能測量少許固有的激素類藥品。色譜分析法能實施多組分分析。因此就目前形勢而言，色譜法備受人們青睞和認可，漸漸頂替了單一的測量手段。尤其是近年來，無論是國內專業人士，還是國外專業人士均紛紛利用液質聯用、氣相色譜、氣質聯用、液相色譜技術，針對牛奶里這5種激素型藥品的檢查展開了進一步探究，檢查技術逐漸得以提升和改善[3]。

3.1 皮質激素

皮質激素可通過提升血糖減少血酮，來抑制奶牛的食欲，加快其抗炎與分娩。一般使用的藥品包括氫化可的松、地塞米松等。我國相關人員利用串聯電噴四級桿質譜在反應檢測形式下測出牛奶里有12種皮質激素的殘留。試品通過提煉、過濾處置的待測樣品，將Water Acquity Uplctmbeh C18作為色譜柱，用CH3OH與含有0.1% CH2O2的水當作流動相展開洗脫。此方法的檢出限為0.03～0.37 μg/kg，最低定量控制在0.08～1.26 μg/kg。添加水平是2.0和0.5 μg/kg時，12種糖皮質激素的加標收回率在39.4%～94.2%。我國專業人士利用質譜與液相色譜技術手段檢查奶粉與牛奶中的地塞米松殘留量。試品利用甲基氰提煉，得到試驗樣品，利用基質搭配外交曲線法完成定量。在3.0～350 ng/mL的濃度范圍內維持良好線性，方法的檢測限是：奶粉1.5 μg/kg，牛奶0.3 μg/kg，牛奶待測品的添加濃度在0.3～10.0 μg/kg，回收率為80%～100%，奶粉測品添加濃度范圍則是1.5～9.0 μg/kg，回收率在70%～90%，合理偏差范圍在8.79%～12.7%。

3.2 孕激素

孕激素臨床重點運用在治療慣性流產與預兆流產、功效性子宮流血、子宮內膜遷移癥等方面中。通常使用的藥品包括甲地孕酮、黃體酮等。有學者創建牛奶內17a羥基孕酮、醋酸氯地孕酮、炔孕酮等8種孕激素殘留的快液相色譜串聯質譜檢測。樣品通過提煉、過濾，在shim pack xr ods 2迅速柱上，其中擁有濃度為0.1%的CH2O2與6 mmoL的CH3COONH4的甲基氰或者水溶液展開梯度洗脫分離，利用正離子形式多反應檢測形式測定。每一待測物在0.6～49 μg/kg具有良好線性關系，回收率在74%～74%，標準偏差范圍在3.9%～8.7%，最小定量測出范圍則處于0.2～0.4 μg/kg。此方式簡易、迅速、影響少，廣泛應用于牛奶少量孕激素殘留的檢查工作。

3.3 雄激素

雄激素臨床重點應用在睪丸功效匱乏，功能性子宮流血、卵巢癌、子宮肌瘤、老牲畜骨質疏松、再生障礙性貧血等。一般使用的藥品主要有甲基睪酮、丙酸諾龍以及睪酮等。一些專業人士利用固相萃取液相色譜搭配質譜儀，創建了牛奶中孕酮、睪酮、勃地龍、美雄酮、諾龍以及群勃龍等8大同化激素殘留量的迅速測量手段。待測樣品利用叔丁甲醚提煉，利用C18萃取柱過濾，用氮氣吹干，存留物使用CH3OH和H2O充分溶解之后測量，配置比例為10:90。此手段的檢出范圍在0.3～0.4 μg/kg，定量范圍是0.6～0.9 μg/L，在3.0～190 μg/L線性關系良好。在1.2～4.5 μg/L，8大激素的平均回收率在29.2%～87.2%，標準偏差在3.3%～10.6%。

3.4 雌激素

雌激素主要在在卵巢性能匱乏與加速發情時期，以及功效性子宮流血、乳房疼痛、年邁牲畜骨質疏松、退乳等診治中應用。一般使用的藥品有雌三醇、己烷雌酚、乙烯雌酚以及β雌二醇等。有關人員利用炔雌醇與β雌二醇的分子蹤跡聚合物當作材料做出萃取小柱，針對牛奶里的雌激素完成濃縮，利用有效液相色譜技術，創建鑒于分子蹤跡萃取技術檢查牛奶里的雌激素的全新方式，檢出范圍小于0.10 mg/L，收回率超過84%。還有專業人士創建了牛奶里5類雌性激素共同測量的液相色譜技術。通過富集與去蛋白之后測量樣品，利用反相有效液相色譜形式，將甲基氰和H2O按照1∶1的比例作為流動相，5類雌性激素分割情況較高，均衡回收率在68%～96%。這一方式檢出限在1.5～1.9 μg/L。還有學者創建了中控纖維液相微萃取，搭配高效液相色譜檢測牛奶內雌二醇的數量。利用相關中空纖維萃取裝備，將95 μL的C8H18O當作萃取溶液，在550 r/min拌和速率下精煉1 h，雌二醇的濃縮倍數高達200倍，最小檢出標準為0.569 ng/mL。其中一些專業人士利用固相萃取與液液萃取提煉、篩選牛奶內融進的雌三醇，經過反應后，通過質譜和氣相色譜搭配使用的形式針對生成物檢查剖析，檢出限是0.6 μg/L，檢測品的質量濃度和生成物的峰面積在2～9950 μg/L呈現出良好的線性關系，各種雌三醇的加標回收率則在79.5%～85.6%。

3.5 β受體激動劑

β受體激動劑是一種擇選性β2腎上腺素受體激動劑，一般使用的藥品包括西馬特羅和其制劑、酯、鹽，沙丁胺醇和其制劑、鹽、酯。此種藥品肌注或者口服都會被迅速吸收，外排速率快，使用藥量在6～14倍時會引發動物可食性組織儲存諸多藥品殘余，口服進取之后便會誘發身體中樞神經與心血管的不良副作用。國內有關人員提出了一同測量牛奶內氯霉素、乙烯雌酚、克倫特羅等殘余量的同位素吸收高效液相色譜搭配質譜剖析手段。牛奶檢測試品并不需要蛋白沉積，徑直通過HLB小柱優化水質與正己烷洗脫，通過C4H8O2淋洗之后予以分析。利用acquity uplc beh C18色譜柱展開分析，將C4H8O2當作流動相展開梯度淋洗，用MRM形式測量，同位素吸收內標法完成定量。乙烯雌酚、路霉素以及克倫特羅在牛奶試品中的檢出范圍依次為0.6～0.9 ng/L、0.4～0.7 ng/L、0.06～0.08 ng/L，其中加標水平中回收率為95%～106%，相對偏差都低于9%。試品通過提煉、篩選環節之后，牛奶中3個添加水平依次是0.01、0.02、0.004 μg/mL，其中回收率在80%～160%，相對偏差是15%，最小檢出標準是6 ng/mL，符合殘余剖析的需求。

4 將來發展方向探究

牛奶制品內存在的激素藥品殘余是現階段全世界關注的焦點，伴隨著物質生活水平的不斷提升，人們愈來愈注重養生和食品安全問題，注重培養良好的生活習慣。牛奶是人們喜歡的一種食物，牛奶中參與的激素類藥品能嚴重影響人們的身體健康，致使其健康狀況急劇下降，這一狀況同樣是不可小覷的，尋找科學且精準的殘余物檢查手段是處理這種狀況的關鍵。色譜技術由于其剖析速率快，擇選性突顯、靈活機敏度較高等優點被普遍應用在牛奶品的殘余物檢查中?，F階段，對激素的檢查已經自以往的單調檢查升級到同時檢測多種激素，大幅度提升了檢查速率。檢查技術在不斷提升的過程中，針對檢查前的預處置探究也獲得了不小成就，事先處置的結果的好壞直接影響著最終檢查結果的精準性[4]。

針對已有的牛奶激素類藥品殘余的檢查手段還有較大的提升空間，應以精準、便捷為基本，針對怎樣提升高接口技術，如何強化其余事先預處置的關聯等展開進一步探究。當下色譜技術的日漸改善和優化，其在牛奶激素類藥品殘余檢查中的應用勢必會愈來愈廣泛，根據色譜技術的測定結果，編制嚴謹的食品安全規范與制度，全面確保消費人員的身體健康。

在檢查奶制品中激素類藥品殘余工作中運用色譜技術，是時代發展的必然趨勢。相關人員一定要在實踐中充分結合實際情況，剖析技術特征和優勢，將其合理運用在實際檢查過程中。并且要善于挖掘問題，尋找處理問題的有效對策，以此確保此技術朝著良好、健康的方向前進，從而保障人們身體健康。