苦參堿對阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力的影響

郭永梅 曹柳 肖莉萍 楊宇秀 高建華

【摘 要】目的：探討苦參堿對阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力的影響。方法：將Morris水迷宮試驗達標的18只雄性SD大鼠，隨機分為正常對照組、模型組和苦參堿組（15mg·kg-1），每組6只。模型組和苦參堿組大鼠雙側海馬注射凝聚態Aβ1-40，正常對照組分別給予等體積藥物或生理鹽水灌胃，持續 28d。采用Morris水迷宮測試行為學指標，觀察大鼠學習記憶能力。結果：與正常對照組相比，模型組大鼠學習記憶能力均明顯下降；與模型組相比，苦參堿組大鼠Morris水迷宮作業的錯誤反應次數減少，記憶能力均明顯增強（P<0.05）。結論：苦參堿灌胃可以減輕阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力損傷。

【關鍵詞】苦參堿；阿爾茨海默病；大鼠；記憶力

中圖分類號： R285.5 文獻標識碼： A 文章編號： 2095-2457（2018）32-0075-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.32.034

阿爾茨海默病（Alzheimers disease，AD）是老年人常見的神經變性疾病，是起病隱匿、進行性的神經系統退行性疾病[1]。目前研究表明：β-淀粉樣蛋白（β-amyloid protein，Aβ）的沉積及異常代謝是引發AD的關鍵誘因。在許多研究中均發現：Aβ與神經細胞的凋亡密切關系，Aβ可誘導神經細胞凋亡[2]。苦參堿是（matrine，MAT）由植物苦參的干燥根、莖、植株及果實等部位，經乙醇等有機溶劑提取得到的活性成分，一般為苦參總堿。該成分具有廣泛的抗腫瘤、抗心率失常及抗炎等作用，臨床上多用于肝炎的治療，且毒副作用小，療效較好[3]。但苦參堿的抗炎作用能否對AD起到記憶保護作用，目前國內外尚未見報道。本研究采用大鼠海馬注射凝聚態凝聚態Aβ1-40構建AD動物模型，通過給藥觀察苦參堿對AD大鼠學習記憶的影響。

1 材料與方法

1.1 動物分組及實驗處理

健康雄性SD大鼠（清潔級），體質量在250～300 g，購自南昌大學醫學院實驗動物中心，動物合格證號：SCXK-2015-0004。經Morris水迷宮初篩，淘汰反應中過于靈敏、先天癡呆和游泳姿勢不良者之后，將18只大鼠隨機分為3組，正常對照組、模型組和苦參堿組大鼠，每組6只。大鼠自由飲食，晝夜交替飼養，飼養室溫度保持為15℃～20℃。

1.2 主要試劑和實驗儀器

β-淀粉樣蛋白1-40（Aβ1-40）（購于美國Sigma公司）；苦參堿（購于上海克隆生物高技術有限公司）；ZH-DSG型Morris水迷宮（ 購于安徽淮北正華生物儀器設備有限公司）。

1.3 實驗方法

（1）Aβ1-40孵育 用無菌生理鹽水，將0.5mgAβ1-40稀釋成濃度為10μg·μl-1的溶液，將恒溫箱溫度調至37 ℃，孵育1周，使其變為凝聚態Aβ1-40，采用封口膜封口，4℃冰箱保存備用。

（2）大鼠模型的構建[4]用6 %水合氯醛腹腔注射麻醉SD大鼠，將其固定于大鼠腦立體定位儀上。采用Cushman和Pellegrino編著的《大鼠腦立體定位圖譜》所設計方法，以前囟為原點，向后4.0mm，中線旁2.0～2.5mm，采用微量進樣器在顱骨面下進針3.0～3.5mm，每只SD大鼠注射5μl，對照組按照AD模型組方法，注射生理鹽水5μl。苦參堿組大鼠正常喂養基礎從造模手術當天灌胃苦參堿組15mg·kg-1治療，對照組及模型組灌胃等劑量生理鹽水，各組共給藥28d。

（3）記憶能力測試項目[5]SD大鼠造模完成后，進行Morris水迷宮作業實驗：人為將用墨水染成黑色的水池分為四個象限，選擇其中一個象限放入一平臺，將大鼠沿壁依次從不同象限放入池中，記錄大鼠的運動軌跡，并用軟件處理、分析。①定向航行試驗：歷時5d，前4d為訓練，分別從四個不同象限的池壁中點入水，每次大鼠游泳60s，訓練時任意選擇一入水點，測其在60s內找到平臺所需的時間（逃避潛伏期），若大鼠未能尋找到平臺，則記錄其逃避潛伏期為60s。②空間探索試驗：在第6天時撤除水平臺，然后任選一個入水點將大鼠面向池壁放入水中，測其在120s內在原象限的游泳時間及游泳距離占總距離的百分比。

（4）統計學方法采用SPSS16.0統計分析軟件，組間比較用t檢驗，多組間比較采用方差分析。

2 結果

行為學及記憶能力的改變苦參堿對AD大鼠定位航行能力及空間探索能力的影響研究顯示，與模型組小鼠潛伏期顯著增加（P<0.01），游泳距離顯著增加（P<0.01），原平臺象限跨越次數比顯著減少（P<0.01），原平臺象限游泳時間顯著減少（P<0.01）；與模型組比較，苦參堿組及對照組大鼠潛伏期顯著減少（P<0.01），游泳距離明顯縮短（P<0.05），原平臺象限跨越次數比顯著增加（P<0.01），原平臺象限游泳時間比顯著增加（P<0.01）。見表。

3 討論

認知記憶功能方面的減退是AD病人的重要臨床表現。Morris水迷宮檢測能較全面地考察動物的認知過程，可排除氣味對實驗結果的影響，客觀的反映實驗動物的認知水平，以其操作簡便，數據記錄準確，誤差小的特點，被廣泛用于認知記憶能力的測試[5]。大量老年斑、神經纖維纏結和選擇性神經元及突觸的丟失是AD病的重要神經病理學特征。本研究表明：苦參堿灌胃可以減輕阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力損傷。

【參考文獻】

[1]雷公藤內酯醇對AD模型大鼠海馬神經細胞凋亡的影響[D].南昌：南昌大學，2010.

[2]雷公藤內酯醇對阿爾茨海默病模型大鼠海馬突觸后致密物蛋白N-甲基-D-天門冬氨酸受體亞基2B和突觸后致密物質95的影響[D].南昌：南昌大學，2010.

[3]黃丹，賴玲.苦參堿劑型的研究進展[J].廣西醫科大學學報，2014，31（6）：1040-1042.

[4]李宜培，彭蕤蕤，柴高尚，等.促紅細胞生成素對阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力及其超微結構的影響[J].中國老年學雜志，2015，35（3）：1620-1623.

[5]于濤，賴世隆.補腎益智方對實驗性阿爾茨海默病模型大鼠學習記憶水平的影響[J].中國老年學雜志，2015，35（2）：1030-1033.