谷胱甘肽—S—轉(zhuǎn)移酶—π在賁門癌中的表達(dá)及臨床意義

劉文文 李蘭蘭 李冰 曹璋

【摘 要】目的：探討谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶-π（glutathione S-transferase-π，GST-π）蛋白在賁門癌中的表達(dá)及臨床意義。方法：采用免疫組織化學(xué)染色法檢測196例胃賁門癌組織及癌旁組織中GST-π表達(dá)情況，結(jié)合胃癌患者臨床資料分析GST-π表達(dá)與胃賁門癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果：GST-π在胃賁門癌組織中的陽性表達(dá)率分別為38.27%（75/196）， GST-π蛋白在賁門癌組織中的表達(dá)在年齡、性別、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、不同腫瘤大小及浸潤深度組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）； GST-π蛋白在賁門癌中的表達(dá)在不同腫瘤分化組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：GST-π蛋白在賁門癌中的表達(dá)在分化較高的腸型胃癌中表達(dá)增加，可能參與該類型胃癌的化療耐藥性，GST-π蛋白在賁門癌中的高表達(dá)對臨床腫瘤化學(xué)藥物治療有一定的參考意義。

【關(guān)鍵詞】谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶-π；賁門癌；免疫組織化學(xué)技術(shù)；臨床病理特征

中圖分類號(hào)： R739.63 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2018）32-0079-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.32.036

【Abstract】Objective： To investigate the expression and clinical significance of glutathione S-transferase-π proteins（GST-π） in cardiac carcinoma. Methods： Immunohistochemical staining was used to detect the expression of GST-π in 196 cases of gastric cardia carcinoma and adjacent tissues. And combined with the clinical data of patients with gastric cancer， the relationship between GST-π expression and the clinicopathological parameters of gastric cardia cancer was analyzed. Results： The positive expression rate of gst-aggression in gastric cardia cancer tissues was 38.27% （75/196）. The expression of GST-π in cardiac carcinoma was independent of the patient's age， gender ， lymph node metastasis， tumor size and infiltration depth （P>0.05）. The expression of GST-π protein in cardiac carcinoma was statistically significant between different tumor differentiation groups （P<0.05）. Conclusion： The expression of GST-π protein in cardiac cancer is increased in the highly differentiated intestinal gastric cancer， which may be involved in the chemotherapy resistance of this type of gastric cancer. The high expression of gst-helper protein in cardiac cancer is of certain reference significance for clinical tumor chemical drug treatment.

【Key words】GST-π； Cardiac carcinoma； Clinicopathologic features

賁門癌（cardiac carcinoma）是指食管胃交界線下約2cm范圍內(nèi)的腺癌，又被稱為食管-胃交界腺癌（Esophagogastric junction adenocarcinoma，EJA），中國賁門癌的死亡率和發(fā)病率在各類惡性腫瘤中位居前列。早期胃癌缺乏典型的臨床癥狀，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)的時(shí)候已是中晚期，這是胃癌死亡率很高一個(gè)重要的因素[1]。谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶-π （glutathione S-transferase-π，GST-π） 是GST家族的一員，GST家族廣泛存在于許多原核及真核生物的胞質(zhì)、線粒體、微粒體中[2]。哺乳動(dòng)物體內(nèi)的GST主要包括GST-α、GST-μ、GST-π、GST-ε及GST-θ五類，其中GST-π在多種組織中被發(fā)現(xiàn)，研究發(fā)現(xiàn)一些GST家族的某些亞型的分布具有一定的特異性，比如GST-π主要分布于呼吸道、消化道以及泌尿道[3-5]。已有研究發(fā)現(xiàn)GST-π作為自身保護(hù)酶，能減少氧化應(yīng)激，清除氧自由基，穩(wěn)定遺傳物質(zhì)，其在生物體內(nèi)的作用是胃癌發(fā)生的保護(hù)因子。本研究主要通過免疫組織化學(xué)染色方法檢測GST-π蛋白在賁門癌組織中的表達(dá)，探討GST-π蛋白的表達(dá)情況與胃賁門癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 臨床病理資料

收集濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2012年01月-2018年10月住院患者中賁門癌患者的病例196例，所有標(biāo)本均未接受術(shù)前的放化療等治療手段，所有病例資料均完整且具有完整的病理資料。其中男性179例，女性17例，年齡>60歲127例，年齡≤60歲69例。腫瘤高分化104例，低分化92例，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有138例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有58例。腫瘤直徑≥5.5cm的有98例，直徑<5.5cm的有98例，腫瘤浸潤外膜177例，為侵及外膜19例。

1.2 主要試劑與儀器

鼠抗人單克隆GST-π抗體購自北京中杉金橋生物科技有限公司，第二抗體購自生物晶美工程有限公司，DAB顯色試劑盒為北京中杉公司產(chǎn)品，免疫組織化學(xué)Max VisionTM試劑盒購自福州邁新生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)過程皆按照相應(yīng)試劑盒中使用說明書進(jìn)行操作。

1.3 免疫組織化學(xué)染色

采用免疫組織化學(xué)Max VisionTM法，常規(guī)切片脫蠟水化，高溫高壓抗原修復(fù)后，其他具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，DAB顯色及蘇木精復(fù)染，脫水后中性樹膠封片。

1.4 結(jié)果判定

GST-π蛋白陽性判定：細(xì)胞內(nèi)胞漿呈現(xiàn)棕黃色、棕褐色細(xì)微顆粒。GST-π蛋白陽性程度判斷：顯微鏡下隨機(jī)視野中選擇5個(gè)高倍視野，每個(gè)高倍視野隨機(jī)選擇100個(gè)細(xì)胞作為統(tǒng)計(jì)對象，計(jì)算出陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，取其平均值。細(xì)胞內(nèi)胞漿無棕黃色顆粒或陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)<25%為陰性病例；若25%≤ 陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)<50%，則界定該標(biāo)本為（+）表達(dá)；若50%≤陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)<75%，則界定該標(biāo)本為陽性（++）表達(dá)；若陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)≥75%，則界定該標(biāo)本為強(qiáng)陽性（+++）表達(dá)，標(biāo)記（++）、 （+++）為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同組間病理指標(biāo)資料采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

（1）GST-π蛋白在胃癌組織中的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示196例胃癌組織中75例GST-π蛋白表達(dá)陽性，陽性表達(dá)率39.47%。GST-π蛋白在賁門癌中的表達(dá)：GST-π蛋白在賁門癌組織中的表達(dá)與患者的年齡、性別和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤深度及腫瘤大小無關(guān)（P>0.05）；GST-π蛋白在賁門癌中的表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)類型相關(guān)（P<0.05）。（見表1）

3 討論

胃癌的發(fā)生是一個(gè)多種基因參與、經(jīng)歷多個(gè)階段的一系列復(fù)雜的程序，眾多原癌基因的激活和/或抑癌基因的失活參與其中。賁門這一特殊部位的腺癌在臨床中的發(fā)病率很高，多數(shù)患者在就診時(shí)多伴有浸潤、轉(zhuǎn)移等臨床特征。賁門癌的治療相對較為復(fù)雜，手術(shù)治療的同時(shí)還需要具有全身治療作用的化學(xué)治療方法[6]。安海蓮等[7]通過實(shí)驗(yàn)表明在胃癌中其耐藥性與年齡及性別無關(guān)，但與癌細(xì)胞的分化程度有關(guān)，即在高分化腺癌中耐藥性明顯高于低分化腺癌，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在癌細(xì)胞未侵及漿膜和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌中其耐藥率高于侵及漿膜及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有研究表明GST-π的表達(dá)與胃癌耐藥性相關(guān)，而我們通過實(shí)驗(yàn)證明了GST-π的表達(dá)與賁門癌的分化程度具有相關(guān)性，高分化的賁門癌中GST-π呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，低分化者低表達(dá)。

GST-π是體內(nèi)與解毒有關(guān)的酶類，參與烷化劑、脂過氧化物、DNA過氧化物以及細(xì)胞毒物質(zhì)產(chǎn)生自由基的解毒過程，許多抗腫瘤藥物如烷化劑、蒽環(huán)類或重金屬藥物等可誘導(dǎo)癌細(xì)胞 GST-π的表達(dá)增加，使這些進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的有毒物質(zhì)迅速與谷胱甘肽結(jié)合，形成無毒物質(zhì)從而降解這些物質(zhì)的毒性。編碼GST-π的基因 GSTP1定位于染色體11q13，含有7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，外顯子5、6 存在基因多態(tài)性，可引起其表達(dá)的相應(yīng)酶的活性不同，導(dǎo)致解毒功能發(fā)生改變，從而增加特定腫瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[1]。張楊[2]等研究發(fā)現(xiàn)GST-π 在胃癌組織中的表達(dá)要明顯高于正常胃黏膜組織，這說明GST-π的高表達(dá)可能與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。懷建國[8]等認(rèn)為MRP、GST-π的表達(dá)在浸潤程度不同及淋巴結(jié)是否存在轉(zhuǎn)移的胃癌組織間不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這提示它們的表達(dá)與腫瘤浸潤程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況不具有相關(guān)性。我們通過本次實(shí)驗(yàn)得出GST-π蛋白在賁門癌中的表達(dá)與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移之間不具有相關(guān)性。Ye等[9-10]通過實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)賁門癌 GST-π蛋白的陽性表達(dá)率要高于其他部位的胃癌，我們通過對196例包埋患者的實(shí)驗(yàn)中也同樣得出GST-π蛋白在賁門癌中高表達(dá)。GST-π蛋白對胃賁門癌的耐藥機(jī)制與其對賁門癌預(yù)后的影響需要進(jìn)一步的研究證明。

通過本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GST-π蛋白在賁門癌中的表達(dá)與其臨床病理特征之間存在一定的相關(guān)性。GST-π蛋白在賁門癌中的表達(dá)與患者的年齡、性別以及淋巴結(jié)的是否轉(zhuǎn)移無關(guān)，而在不同腫瘤Lauren分型中具有差異性。胃賁門癌組織的耐藥產(chǎn)生是多因素參與的共同結(jié)果，GST-π的作用是否跟其他耐藥相關(guān)蛋白有協(xié)同作用以及在腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的過程中GST-π可能存在某種水平的共同調(diào)節(jié)機(jī)制目前都不明確。綜上所述，GST-π蛋白在賁門癌中的表達(dá)或缺失可能參與其發(fā)生發(fā)展的過程，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】

[1]MA Yan-chun， LI Li-ping， SUN Da-yong， et al. Relation between GST-π， Helicobacter Pylori and Gastric Carcinoma[J]. Mil Med J S Chin，2014，28（6）：537-539，604.

[2]Zhang Yang， Sun Xiuwei. Progress of GST-π in gastric cancer[J].Modern Oncology，2017，25，（07）：1164-1166.

[3]Geng M， Wang L， Chen X， et al. The association between chemosensitivity and Pgp， GST -pi and Topo II expression in gastric cancer[J].Diagnostic pathology，2013，8：198.

[4]Pandith AA， Lateef A，Shahnawaz S， et al. GSTP1 gene Ile105Val polymorphism causes an elevated risk for bladder carcinogenesis insmokers[J].APJCP，2013，14（11）：6375-6378.

[5]Haroun RA， Zakhary NI， Mohamed MR， et al. Assessment of the prognostic value of methylation status and expression levels of FHIT，GSTP1 and p16 in non-small cell lung cancer in Egyptianpatients[J].APJCP，2014，15（10）：4281-4287.

[6]CHEN Guangcan， HONG Liangli， HUANG Jiexiong， et al. Expression of GST-πand P-gp in gastric cardia cancer and their clinical significance in the Chaoshan high risk arer[J]. 2016，28（1）：36-40.

[7]An Hailian， Jin Renshun. Expression and clinical significance of TopoⅡ and GST-π in gastric and colorectal carcinoma[J].Modern Oncology. 2014，22（06）：1369-1372.

[8]懷建國，蔣 艷，楊小苗， 等.胃腸腺癌中耐藥基因的表達(dá)及臨床意義[J]. 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué).2014，19（4）：393-397.

[9]葉延偉，師英強(qiáng)，王春萌，等.賁門癌與胃竇部癌的臨床病理指標(biāo)及免疫組化指標(biāo)差異性分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志.2009，89（14）：962-966.

[10]Ye YW， Fu H， Zhou Y， et al. Study on the different expression of molecular markers between cardiac cancer and distal gastric cancer and their correlations with clinicopathological features[J].Dig Surg.2009，26（5）：384-391.