腎功能正常的冠心病患者血清胱抑素C、超敏C 反應(yīng)蛋白水平及內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量變化及其臨床意義

李明，張亞玲，賴金川，鄭偉，譚剛 ，楊秀云，程標(biāo)

冠心病屬于臨床常見疾病，是由冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致管腔狹窄或阻塞引起的心肌缺血、缺氧或壞死性心臟病，其已成為嚴(yán)重威脅人類生命健康的重要疾病之一，而動(dòng)脈粥樣硬化、內(nèi)皮功能損傷是促進(jìn)冠心病發(fā)生、發(fā)展的重要因素［1-4］。胱抑素 C（cystatin C，Cys-C）是反映早期腎功能損傷的主要生物標(biāo)志物之一，有研究表明其可通過抑制酶活性而參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展［1］。超敏 C 反應(yīng)蛋白（hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP）是炎性因子，可通過炎性反應(yīng)機(jī)制而參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理生理過程［2］。內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）是一種能分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，既可參與修復(fù)損傷血管內(nèi)皮及血管新生，又可作為反映血管內(nèi)皮功能損傷程度的臨床指標(biāo)［3-4］。為排除腎功能異常對(duì)血清Cys-C水平的影響，本研究選取腎功能正常的冠心病患者，并探討其血清Cys-C、hs-CRP水平及EPCs數(shù)量變化及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）腎功能正常者；（2）年齡41～75歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）估算腎小球 濾 過 率（eGFR）＞120 ml·min-1·1.72（m2）-1或 ＜90 ml·min-1·1.72（m2）-1，血肌酐≥ 132.6 μmol/L 者；（2）合并嚴(yán)重肝功能不全、感染性疾病、自身免疫性疾病、嚴(yán)重外周血管疾病、結(jié)締組織疾病、腫瘤者；（3）近2周內(nèi)服用過葉酸、維生素B12、腎上腺皮質(zhì)激素者；（4）合并心肌病、瓣膜性心臟病、頻發(fā)心律失常者。

1.2 一般資料 選取2016年5—12月在四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院心內(nèi)科就診的疑似冠心病患者128例，均行冠狀動(dòng)脈造影檢查，其中冠心病患者95例作為冠心病組，非冠心病患者33例作為對(duì)照組；根據(jù)冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)將冠心病患者分為單支病變組27例，雙支病變組36例，多支病變組32例；根據(jù)Gensini積分將冠心病患者分為高分組（Gensini積分＞82分）29例，中分組（Gensini積分32～82分）40例，低分組（Gensini積分＜32分）26例。本研究經(jīng)四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有患者對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.3 冠狀動(dòng)脈造影檢查 采用Judkins法行冠狀動(dòng)脈造影，并由固定專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行分析，以管腔狹窄率≥50%定義為冠狀動(dòng)脈病變，根據(jù)病變累及支數(shù)分為單支病變、雙支病變（累及左主干納入雙支病變）及多支病變。采用Gensini積分評(píng)估冠狀動(dòng)脈狹窄程度，Gensini積分標(biāo)準(zhǔn)［5-6］：狹窄率＜25%記為1分，25%～49%記為2分，50%～74% 記為 4分，75%～89%記為 8分，90%～98%記為16分，99%～100%記為32分；不同冠狀動(dòng)脈分支系數(shù)：左主干×5，左前降支近段×2.5、中段×1.5、遠(yuǎn)段×1，第一對(duì)角支×1，第二對(duì)角支×0.5，左回旋支近段×2.5、遠(yuǎn)段和后降支均×1、后側(cè)支×0.5，右冠狀動(dòng)脈近、中、遠(yuǎn)段和后降支均×1。冠狀動(dòng)脈狹窄程度計(jì)分乘以各冠狀動(dòng)脈分支系數(shù)為冠狀動(dòng)脈積分，所有冠狀動(dòng)脈積分之和為Gensini積分。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 一般資料 收集所有患者一般資料，包括性別、年齡、高血壓發(fā)生情況及吸煙史。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo) 采用貝克曼公司生產(chǎn)的S600型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血尿素、血肌酐、血尿酸，采用免疫比濁法檢測(cè)血清Cys-C及hs-CRP水平，試劑盒均購(gòu)自北京利德曼生物科技有限公司。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)，具體如下［7］：（1）所有患者于冠狀動(dòng)脈造影檢查時(shí)取動(dòng)脈血2 ml；（2）吸取CD34單克隆抗體5 μl加入加樣管底部；（3）吸取乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中全血25 μl加入加樣管底部與CD34單抗混勻；（4）加樣管中25 ℃下孵育20 min；（5）吸取溶血?jiǎng)〢液300 μl/B液133 μl加入加樣管中混勻，常溫下放置5 min后上CYTOMICS FC500流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司生產(chǎn)）檢測(cè)；（6）流式細(xì)胞儀自動(dòng)分析計(jì)算出CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（x± s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料分析采用χ2檢驗(yàn)；血清Cys-C、hs-CRP水平及CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)與腎功能正常的冠心病患者Gensini積分的關(guān)系分析采用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組和冠心病組患者一般資料和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較 對(duì)照組和冠心病組患者性別、年齡、高血壓發(fā)生率、吸煙史、TC、TG、HDL-C、血尿素及血尿酸比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；冠心病組患者LDL-C、血肌酐及血清Cys-C、hs-CRP水平高于對(duì)照組，CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

2.2 不同冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)冠心病患者血清Cys-C、hs-CRP水平及CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較 不同冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)冠心病患者血清Cys-C、hs-CRP水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；雙支病變組、多支病變組患者血清Cys-C、hs-CRP水平高于單支病變組，多支病變組患者血清Cys-C、hs-CRP水平高于雙支病變組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)冠心病患者CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見表2）。

2.3 不同Gensini積分冠心病患者血清Cys-C、hs-CRP水平及CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較 不同Gensini積分冠心病患者血清Cys-C、hs-CRP水平及CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；中分組、高分組患者血清Cys-C、hs-CRP水平高于低分組，高分組患者血清Cys-C、hs-CRP水平高于中分組，高分組患者細(xì)胞分?jǐn)?shù)低于低分組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表3）。

表1 對(duì)照組和冠心病組患者一般資料和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較Table 1 Comparison of general information and laboratory examination results between control group and CHD group

表2 不同冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)冠心病患者血清Cys-C、hs-CRP水平及CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較（x± s）Table 2 Comparison of serum levels of Cys-C and hs-CRP，andcell percentage in CHD patients with different number of stenosed coronary vessels

表2 不同冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)冠心病患者血清Cys-C、hs-CRP水平及CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較（x± s）Table 2 Comparison of serum levels of Cys-C and hs-CRP，andcell percentage in CHD patients with different number of stenosed coronary vessels

注：與單支病變組比較，aP＜0.05；與雙支病變組比較，bP＜0.05。

組別 例數(shù) Cys-C（mg/L）hs-CRP（mg/L）CD34+細(xì)胞分?jǐn)?shù)（%）單支病變組 27 2.72±1.46 4.22±0.41 0.355±0.219雙支病變組 36 3.79±2.09a 6.01±0.80a 0.308±0.280多支病變組 32 4.92±1.37ab 8.06±1.91ab 0.228±0.176 F值 12.285 71.602 2.305 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＞0.05

表3 不同Gensini積分冠心病患者血清Cys-C、hs-CRP水平及細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較（）Table 3 Comparison of serum levels of Cys-C and hs-CRP，and ofcell percentage in CHD patients with different Gensini score

表3 不同Gensini積分冠心病患者血清Cys-C、hs-CRP水平及細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較（）Table 3 Comparison of serum levels of Cys-C and hs-CRP，and ofcell percentage in CHD patients with different Gensini score

注：與低分組比較，aP＜0.05；與中分組比較，bP＜0.05

+細(xì)胞分?jǐn)?shù)（%）低分組 26 2.83±1.68 3.88±1.01 0.415±0.211中分組 40 3.86±2.65a 5.96±0.90a 0.275±0.235高分組 29 4.79±2.01ab 8.39±1.01ab 0.193±0.119a F值 22.223 292.958 19.954 P 值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01組別 例數(shù) Cys-C（mg/L）hs-CRP（mg/L）CD34

2.4 相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清Cys-C、hs-CRP水平與腎功能正常的冠心病患者Gensini積分呈正相關(guān)（r值分別為0.328、0.810，P＜0.01）；細(xì)胞分?jǐn)?shù)與腎功能正常的冠心病患者Gensini積分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.444，P＜0.01）。

3 討論

目前，心血管疾病是導(dǎo)致我國(guó)城鄉(xiāng)居民死亡的首位疾病，冠心病作為常見心血管疾病類型，近年來其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一［8］。目前研究表明，冠心病主要由動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成所致，而炎性反應(yīng)、內(nèi)皮功能損傷、應(yīng)激反應(yīng)等多種因素參與動(dòng)脈粥樣硬化形成過程［4］。

Cys-C是近年來發(fā)現(xiàn)的冠心病新危險(xiǎn)因素，研究表明其可通過調(diào)節(jié)動(dòng)脈管壁蛋白溶解與抗蛋白溶解而參與血管壁基質(zhì)重構(gòu)，其降解產(chǎn)物可通過影響中性粒細(xì)胞遷移、參與炎性反應(yīng)過程而誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化形成［9］。Cys-C是腎功能損傷的早期檢測(cè)指標(biāo)，近年研究報(bào)道其與冠心病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度密切相關(guān)［10-11］。本研究結(jié)果顯示，冠心病組患者血清Cys-C水平高于對(duì)照組；雙支病變組、多支病變組患者血清Cys-C水平高于單支病變組，多支病變組患者血清Cys-C水平高于雙支病變組；血清Cys-C水平與腎功能正常的冠心病患者Gensini積分呈正相關(guān)，提示腎功能正常的冠心病患者血清Cys-C水平升高，且血清Cys-C水平與患者冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度有關(guān)。

hs-CRP是一種經(jīng)典炎性因子，國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)其不僅參與動(dòng)脈粥樣硬化形成過程，還與冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度有關(guān)［12-14］。本研究結(jié)果顯示，冠心病組患者血清hs-CRP水平高于對(duì)照組；雙支病變組、多支病變組患者血清hs-CRP水平高于單支病變組，多支病變組患者血清hs-CRP水平高于雙支病變組；血清hs-CRP水平與腎功能正常的冠心病患者Gensini積分呈正相關(guān)，提示腎功能正常的冠心病患者血清hs-CRP水平升高，且血清hs-CRP水平與患者冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度有關(guān)。

EPCs是一種能分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，其在維持內(nèi)皮功能、修復(fù)損傷血管及血管新生過程中具有重要作用。內(nèi)皮功能障礙被認(rèn)為是動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)環(huán)節(jié)，而EPCs數(shù)量減少及功能降低均影響血管內(nèi)皮修復(fù)及血管新生，導(dǎo)致血管內(nèi)膜完整性受損，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展［15-16］。既往研究表明，隨著冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度加重，EPCs數(shù)量減少、EPCs功能下降［16-17］。為EPCs表面標(biāo)志物，本研究結(jié)果顯示，冠心病組患者細(xì)胞分?jǐn)?shù)低于對(duì)照組，高分組患者細(xì)胞分?jǐn)?shù)低于低分組，且細(xì)胞分?jǐn)?shù)與腎功能正常的冠心病患者Gensini積分呈負(fù)相關(guān)，提示腎功能正常的冠心病患者EPCs數(shù)量減少，且EPCs數(shù)量與患者冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度有關(guān)；但不同冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)患者細(xì)胞分?jǐn)?shù)間無差異，具體原因尚需要進(jìn)一步探究。

綜上所述，腎功能正常的冠心病患者血清Cys-C、hs-CRP水平升高，EPCs數(shù)量減少，而檢測(cè)血清Cys-C、hs-CRP水平及EPCs數(shù)量對(duì)冠心病及冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。但本研究樣本量較小，結(jié)論還有待大樣本量研究進(jìn)一步證實(shí)。

作者貢獻(xiàn)：李明進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理、撰寫論文并對(duì)文章負(fù)責(zé)；張亞玲、鄭偉、譚剛、楊秀云進(jìn)行試驗(yàn)實(shí)施、評(píng)估、資料收集；賴金川、程標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。