宮頸脫落細胞中P16、Ki67聯合細胞學檢測在意義不明確的非典型鱗狀上皮細胞診斷中的意義

張瑤，袁思梅，朱丹陽，盧彩玲，李立峰

宮頸癌的控制和預防關鍵是及時有效的發現和診斷宮頸上皮內瘤變，研究表明宮頸細胞學檢查對臨床篩查宮頸癌具有十分有效的作用。其中，意義不明確的非典型鱗狀上皮細胞（ASCUS）是宮頸細胞學最常見的細胞異常，其可以有效提示宮頸低級別鱗狀上皮內病變（LSIL）或宮頸高級鱗狀上皮內病變（HSIL），因此臨床檢驗和篩查ASCUS成為診治與管理宮頸癌前期病變的重要原則[1-2]。近年來，超薄液基細胞學檢查（TCT）可有效降低宮頸癌篩查的假陽性率和漏診率，已成為宮頸癌早期篩查診斷的重要方法之一[3]。同時，抑癌基因P16和增殖抗原 Ki67呈過表達時可提示癌癥的發生與發展，對于診斷鑒別惡性腫瘤具有較高的靈敏度和特異性。本研究選取病理結果為宮頸癌ASCUS的100例患者，采用TCT法檢測細胞狀態并采用免疫組化法檢測組織中 P16和Ki67的含量，旨在探討宮頸脫落細胞中P16、Ki67和細胞學檢測在ASCUS診斷中的意義。現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取浙江省臺州市第一人民醫院2015年6月至2017年5月收治的病理結果為ASCUS的100例患者為觀察組；并選擇由其他疾病切除子宮但TCT檢查正常50例患者為對照組。觀察組年齡 20～ 65歲，平均（39.24±3.76）歲；對照組年齡21～65歲，平均（40.31±3.59）歲。兩組年齡差異無統計學意義（＞0.05）。本研究經醫院倫理委員會的許可，患者資源簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 TCT 宮頸檢查之前，要求患者48h內無陰道操作、檢查，無性生活。充分暴露宮頸，用專用工具擦取宮頸周圍的分泌物和脫落的上皮細胞，將其放在保存液中保存。用液基薄層細胞制片機（Thin-Prep 2000系統）制成切片進行巴氏染色。由專業細胞病理醫生按照TBS診斷標準進行細胞學診斷和分析[4]。

1.2.2 免疫組織化學檢驗 P16和 Ki67在病變去進行定位檢測，選取宮頸鱗柱彼此之間交接位置進行取樣。活檢組織用10%甲醛固定，石蠟包埋連續切片5m/張，共6張。用5%血清進行室溫封閉40min后，分別加入1∶1000的P16和Ki67單克隆抗體4℃過夜孵育。隔天加入1∶1000的二抗37℃孵育30 min，PBS清洗后加入SP后進行恒溫反應30min，加入DAB顯色液進行顯色，中性樹膠封片后用10倍和40倍物鏡顯微鏡進行觀察。P16和 Ki67的陽性表達主要表現為細胞內出現棕黃色顆粒。陽性細胞所占百分比主要參考著色強度分級。（1）陰性（－）：無明顯陽性細胞；（2）弱陽性（+）：陽性細數＜25%；（3）中度陽性（2+）：陽細胞數 25%～ 50%；（4）（3+）強陽性：陽性細胞數＞50%。以中度陽性和強陽性為P16或Ki67過度表達。

1.3 統計方法 采用SPSS 21.0統計軟件進行統計學處理，計量資料采用均數±標準差表示。計數資料采用2檢驗。＜0.05為差異有統計學意義。

2.1 兩組P16、Ki67檢查結果 觀察組宮頸內P16水平陽性細胞著色明顯，陽性表達率為81.00%，明顯高于對照組的2.00%（2=125.382＜0.05）。觀察組宮頸內Ki67陽性細胞著色明顯，陽性表達率為84.00%，明顯高于對照組的4.00%（2=118.501＜ 0.05）。見表 1、2。

2.2 細胞學檢查結果 對照組患者行TCT檢查后發現宮頸細胞形態正常，無明顯病理改變；觀察組患者行TCT檢查后發現宮頸細胞形態明顯發生改變，鱗狀細胞分化，細胞輪廓消失，模糊不清；細胞核著色較深核漿比增高，細胞核深染，染色質成塊，不規則。見封四彩圖8。

2.3 P16、Ki67與TCT檢查結果 觀察組P16的單獨檢出率、Ki67和TCT檢查的單獨檢出率均低于聯合檢出率（2=3.979、6.366、11.031，均＜0.05）。聯合檢出率、特異度和靈敏度均高于P16、Ki67和TCT檢查的單獨檢出率（2=6.373、3.979、11.033，均＜0.05）。見表3。

2 結果

3 討論

TCT檢查主要指采用TCT系統對宮頸細胞形態方面的檢測來判斷宮頸病變的程度[5]。與傳統的宮頸刮片巴氏涂片檢查相比，明顯提高了標本的滿意度及宮頸異常細胞檢出率；但40%以上的涂片會因血液、黏液和炎癥組織的影響而變得混濁不清，以及固定不及時所引起的人為假象，具有一定的假陽性率并且特異性不高，無法真實的反映宮頸的病變程度[6-7]。

P16基因，又稱多腫瘤抑制基因（MTS）基因，是一種可直接參與調控細胞周期的抗癌基因。P16作為細胞周期蛋白激酶K（CDK）的抑制因子，主要負性調節細胞增殖與細胞分裂[8-9]。近年來大量學者認為P16可直接反應細胞癌變的效果與進程，是一種宮頸癌惡性程度的病變指標[11-12]。Ki67是一種與細胞增殖相關的核抗原，僅分布于核內，其功能與有絲分裂密切相關，是檢測腫瘤細胞增殖活性的可靠指標[12-13]。Ki67在細胞中的陽性表達越高時，說明腫瘤細胞增殖分裂越快，癌組織分化程度越高，治療及預后的效果越差[12-13]。研究表明，P16和Ki67蛋白在同一細胞異常過表達時，可明顯提高腫瘤疾病診斷的靈敏度和特異度[14]，對于診斷、鑒別和篩查癌變具有重要的作用和意義。

宮頸癌患者癌變組織內P16和Ki67均呈現異常高表達狀態，這提示腫瘤細胞的發生發展及異常增殖狀態。本文結果還顯示P16、Ki67和TCT檢查的聯合檢出率、聯合檢測的特異度和靈敏度均優于單獨情況，這說明P16、Ki67和TCT檢查聯合檢測在宮頸癌的病變過程中具有較高的臨床診斷價值。

表1 兩組P16免疫組織化學檢查結果 例

表2 患者Ki67免疫組織化學檢查結果 例

表3 兩組P16、Ki67與細胞學聯合檢測結果 %

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