糖尿病合并結核感染的結核分枝桿菌檢測分析

游元飛

[摘要] 目的 分析糖尿病合并結核感染利用不同結核分枝桿菌檢測方法進行檢測的效果。方法 選擇該院2018年1—6月中的100例糖尿病合并結核感染患者，收集患者痰標本分別應用4種不同方法進行結核分枝桿菌檢測，分析檢測結果。結果 100份痰涂片經涂片法檢測的陽性率為27%，經快速培養法檢測的陽性率為38%，經噬菌體法檢測的陽性率為37%，經PCR法檢測的陽性率為39%，涂片法陽性率明顯低于其他3種方法（P<0.05）。 結論 噬菌體生物擴增法和熒光定量PCR法相較涂片法和培養法能夠更準確、迅速完成結核分枝桿菌檢測，可推廣用于糖尿病合并結核感染的診斷中。

[關鍵詞] 糖尿??；結核感染；結核分枝桿菌；檢測

[中圖分類號] R446 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-4062（2018）12（a）-0059-02

結核病屬于一類多發的慢性疾病，對患者健康有嚴重影響，糖尿病被認為是結核病的易感者，15%左右的肺結核患者伴發糖尿病，大部分都是先出現糖尿病，再出現肺結核[1]。研究發現，糖尿病患者出現結核病的可能性要高出正常人群多倍[2]。合并糖尿病的結核病患者發病急，病變主要為干酪滲出病變，應用抗結核病治療會導致比較明顯的不良反應，不良反應會引發糖尿病相關并發癥，提升病變的復發率，增加耐藥結核病患者比重[3]。所以針對糖尿病合并結核感染患者，做好早期的診斷具有重要意義，該研究具體以該院2018年1—6月中收治的100例糖尿病合并結核感染患者的100份痰標本為對象，分析4種不同方法進行結核分枝桿菌檢測的效果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以該院中的100例糖尿病合并結核感染患者的痰標本作為檢測對象，應用法國生物梅里埃公司生產的BacT/ALERT 3D系統和試劑；選擇英國BIOTEC Lab公司生產的噬菌體生物擴增法快速檢測結核分枝桿菌試劑盒（FAST Plaque TBTM）；選擇達安基因公司生產的熒光定量PCR診斷結核菌試劑盒。

1.2 方法

處理痰標本：收集好痰標本后，選擇部分進行金胺O熒光染色涂片，其他的給予NALC-NAOH法前處理，完成處理后將2 mL PBS加入，重懸沉淀，分別實施噬菌體生物擴增、熒光定量PCR、快速培養。具體方法如下。

①快速培養法：選擇經過前處理后的0.5 mL標本在培養瓶進行接種，加入經過溶解的抗生素0.5 mL，置于BacT/A-LERT 3D結核菌培養儀中進行培養，如果42 d之內沒有顯示陽性結果即確定為陰性。②熒光染色涂片法：依據《結核病診斷細菌學檢驗規程》開展具體的操作。③熒光定量PCR法：在離心管中置入經過前處理的標本0.5 mL，在15 000 r/min的速度下進行持續5 min的離心處理，除去上清液后借助TE緩沖液進行2次洗滌沉淀。將 DNA提取液50 μL加入沉淀并混勻，進行持續10 min的沸水浴，在10 000 r/min的速度下進行持續5 min的離心處理，在含熒光探針的PCR擴增體系中加入2 μL上清液，在6 000 r的速度下進行1 min的離心處理。PCR擴增條件：93℃下進行3 min的預變性，接著以93℃ 1 s、57℃ 30 s循環40次，并在37℃下延伸1 s。另外設立陰性對照以及陽性對照。完成擴增后利用檢測儀獲取循環閾值（CT）。結果判斷：CT值沒有顯示數值為陰性，CT值≤38為陽性，CT值>38為實驗灰度區，必須進行再一次實驗，結果仍按照上述標準判斷。④噬菌體生物擴增法：選擇經過前處理之后的標本1 mL，加入PTB培養基15 mL，在4 000 r/min的速度下進行持續15 min的離心處理，除去上清液后將PTB培養基1 mL加入，重懸沉淀，轉移到反應管內，在37℃的溫度下孵育過夜。設立陰性以及陽性對照。在對照標本中混勻噬菌體0.1 mL，在37℃的溫度下孵育1 h，將殺病毒劑0.1 mL加入混勻，放置在室溫下5 min，將PTB培養基5 mL加入混勻，將5 mL 55℃恒溫的FPTB瓊脂、敏感細胞1 mL加入，置于平皿中，室溫條件下放置讓其定型，在37℃的溫度下進行持續24 h的培養。結果判斷：陽性對照噬菌斑≥20個，陰性對照噬菌斑<10個，標本噬菌斑≥20個為陽性，標本噬菌斑<20個為陰性。

1.3 統計方法

通過SPSS 22.0統計學軟件對該研究獲取的全部結果實施分析，[n（%）]表示計數資料，χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

涂片法檢測顯示陽性的有27例，陽性率27%；；PCR法檢測顯示陽性的有39例，陽性率39%噬菌體法檢測顯示陽性的有37例，陽性率37%；快速培養法檢測顯示陽性的有38例，陽性率38%。涂片法的陽性率明顯低于其他3種方法（P<0.05），其他3種方法陽性率比較差異無統計學意義（P>0.05）。

3 討論

結核病、糖尿病都屬于我國發生率非常高的慢性疾病，且當前逐漸增多的患者同時伴有糖尿病、結核病，這類疾病病情比較復雜，在治療上的難度大，同時停止治療后會有比較高的復發率，相較于單純結核病患者或者單純糖尿病患者，預后明顯更差[4]。臨床必須注重做好糖尿病伴發結核病感染的早期診斷，做好糖尿病患者的結核分支桿菌感染預防及控制，使患者能夠獲得及時有效的治療，預后能夠得到改善。

從該研究結果可以得知，100份痰涂片經涂片法檢測的陽性率為27%，經快速培養法檢測的陽性率為38%，經噬菌體法檢測的陽性率為37%，經PCR法檢測的陽性率為39%。對比結果可以發現，金胺O熒光染色涂片法的陽性率較其他3種方法更低，其他3種方法均有30%以上的陽性率。類似研究發現，以快速培養法的檢測結果當作標準，分析其他方法的敏感度，結果顯示PCR法、噬菌體法的敏感性均超過90%[5]。相較于抗酸染色，熒光染色能夠獲得更高的檢出率，不過熒光染色對檢驗人員的鏡檢水平要求較高。另外發現，涂片法用于檢驗中存在比較高的漏檢率。

培養法被認為使檢測結核分支桿菌的金標準，不過進行羅氏培養檢出所需時間在6 h左右，雖然應用儀器使得檢驗所需時間得以縮短，不過得到陽性報告所需時間在1～3周之間，獲取陰性報告所需時間為6周，這一情況使其明顯不適用于臨床診斷的實效性[6]。噬菌體生物擴增法對于結核分枝桿菌的檢測具體應用的是噬菌體生物特異性、快速增殖的特點，存在非常高的特異性、敏感度，不過這一方法檢驗對標本有非常高的要求。有研究數據顯示，糖尿病伴有結核感染患者應用噬菌體法進行痰標本結核分枝桿菌檢驗，陽性率為43.3%[7]，該研究結果與之比較有一定差異，分析是由于標本質量上存在差異導致。但研究顯示噬菌體法、快速培養法用于糖尿病伴有結核感染患者結核分枝桿菌檢驗的檢出率差異不明顯，與該研究結果具有一致性。

熒光定量PCR法屬于新型的聚合酶鏈式反應技術，特異度高，敏感度高，不過少數時候會因為擴增導致污染，進而出現假陽性結果，另外這一檢驗方法對檢驗實驗室有著非常高的要求，無法推廣應用于基層醫院。有研究顯示，熒光定量PCR法用于糖尿病合并結核感染患者結核分枝桿菌檢測中陽性率在47%[8]，與該研究陽性率結果比較存在一定差異，分析是由于不同研究選取的痰標本存在差異造成。

針對糖尿病伴有結核感染的結核分枝桿菌檢驗中，涂片法、噬菌體法、熒光定量PCR法的應用能夠保證檢驗的特異度以及獲取結果的迅速性，相比之下，噬菌體法、熒光定量PCR法的應用價值更明顯。培養法是結核分枝桿菌檢驗的金標準，結核感染診斷必須綜合培養法檢驗的結果，不過因為培養法結果的獲取無法及時滿足臨床診斷的實效性，所以如果在診斷中應用涂片法、噬菌體法、熒光定量PCR法有陽性表現，則應該高度懷疑為糖尿病伴發結核感染，結合培養法結果進行確診。

[參考文獻]

[1] 王敏娣，孫麗娜，梁慧，等.糖尿病合并結核感染診斷中結核分枝桿菌檢測方法的比較[J].糖尿病新世界，2017，20（2）：66-67.

[2] 李艷玲.2型糖尿病并發肺結核感染配合營養治療后痰液結核分枝桿菌及免疫功能情況觀察[J].齊齊哈爾醫學院學報，2016，37（10）：1316-1318.

[3] 譚英征，陳雙華，肖鵬程，等.株洲地區北京基因型結核分枝桿菌感染與利福平耐藥的相關研究[J].臨床肺科雜志，2017，22（8）：1496-1499.

[4] 萬東勇，胡永芳，陳天剛.影響結核分枝桿菌耐藥的臨床相關因素分析[J].檢驗醫學與臨床，2017，14（22）：3309-3310.

[5] 李曉非，黃山，梁桂亮，等.6種檢測方法在HIV合并結核分枝桿菌感染診斷中的應用價值分析[J].檢驗醫學與臨床，2017，14（3）：378-380.

[6] 曹新瑞，李雅楠，高會霞，等.滄州市結核分枝桿菌間隔區寡核苷酸分型研究[J].天津醫藥，2016，44（11）：1391-1393.

[7] 韓丹，段慧楠，饒有益，等.纖維支氣管鏡灌洗液Xpert MTB/RIF檢測對肺結核診斷和利福平耐藥菌株篩選的臨床價值[J].醫學綜述，2016，22（16）：3243-3246.

[8] 操敏，孫桂新，張國紅，等.2型糖尿病合并初治肺結核患者耐藥情況及影響因素分析[J].臨床肺科雜志，2016，21（10）：1757-1762.

（收稿日期：2018-09-12）