精芪雙參膠囊對心肌缺血再灌注損傷的影響

許艷茹，白 冰，于艷輝，徐 建，唐曉桐，石 菊，周俊佟

（吉林修正藥業新藥開發有限公司，長春 130012）

精芪雙參膠囊由黃芪、丹參、人參、黃精4味中藥組方，具有補氣養陰，活血化瘀，養心安神之功，用于心腦血管疾病之心悸氣短，頭暈頭痛，倦怠乏力，耳鳴眼花，肢體麻木，失眠健忘等癥。其中人參皂苷Rb1、丹酚酸B、黃精多糖等化學成分都有明確的保護心血管作用[1-3]，本文利用相關的動物模型，對精芪雙參膠囊進行了抗心肌缺血、耐缺氧及抗血栓等藥效學實驗研究，為精芪雙參膠囊的開發利用提供依據。

1 材料

1.1 動物 ICR小鼠，雌雄各半，6～8周齡，體質量18～22 g；Wistar大鼠，雌雄各半，體質量240～260 g。均購自吉林大學基礎醫學院實驗動物中心。

1.2 藥物 精芪雙參膠囊，棕色粉末，由吉林長白山藥業集團提供，批號：20150829；金納多片，德國威瑪舒培博士藥廠，批號：1550611。

1.3 儀器 SMP500-18272-LSIO酶標儀，LD5-2A型低速離心機，ALC-V8動物呼吸機，ALC-MPA動物心電圖分析系統，YLS-14B小動物血栓生成儀。

2 方法

2.1 心肌缺血大鼠再灌注實驗[4-6]

2.1.1 分組及方法 120只Wistar大鼠隨機分為假手術組、模型對照組、陽性藥組（銀杏葉提取片43.2 mg/kg）、精芪雙參低、中、高（250、500、1 000 mg/kg）組。每組20只。灌胃（10 mL/kg）給藥，1次/d，連續7 d。末次藥后30 min，用戊巴比妥鈉麻醉大鼠后仰位固定于手術臺上，仰位固定。于左側第3 肋間打開胸腔，分離組織，剪開心包，將心臟擠出胸腔。在左心耳下方2 mm處穿線，結扎冠狀動脈左前降支，結扎處用小橡皮管填充。結扎60 min后剪斷結扎線取出填充的小橡皮管實施再灌注，假手術組除不做結扎外，其余操作與模型組相同。

2.4 統計學方法 數據用SPSS 19.0統計學軟件處理，進行t檢驗，用均數±標準差表示，P＜0.05為有統計學意義。

3 結果

3.1 對心肌缺血大鼠再灌注的影響

3.1.1 對心肌缺血大鼠心電圖變化的影響 見表1。

2.1.2 指標測定 再灌注180 min后從腹主動脈取血，3 000 r/min，離心15 min，取血清，用試劑盒檢測天門冬氨酸氨基轉換酶（AST）、磷酸肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），另一半取血加EDTA·Na2抗凝分離血漿，按試劑盒方法測定前列環素（PGI2）和血栓素（TXA2）水平；取血后取大鼠心臟稱濕重，將心室心肌橫切4～5片進行N-BT染色，計算心肌梗死面積（MIS）。取出心臟，用4%多聚甲醛液固定，制成石蠟切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察。

2.2 小鼠常壓耐缺氧實驗 將70只小鼠分為空白對照組、金納多片組，精芪雙參膠囊低、中、高（360、1 080、1 800 mg/kg）劑量組，灌胃1次/d，連續7 d，空白對照組給予等容積CMC，末次給藥1 h后把小鼠分別置于經容量標定的250 mL廣口瓶中，瓶內置一片濾紙和10 g鈉石灰以吸收水份和二氧化碳，瓶蓋涂以凡士林密封，記錄小鼠的死亡時間，即存活時間。

2.3 電刺激誘導大鼠體內血栓形成的實驗[7]大鼠50只，隨機分為空白對照組（給予同體積生理鹽水），陽性藥阿司匹林組（25 mg/kg），精芪雙參低、中、高（250、500、1 000 mg/kg）劑量組。灌胃給藥（10 mL/kg），1次/d，連續7 d，末次給藥后1 h，用戊巴比妥鈉麻醉，分離右側頸總動脈，用YLS-14B小動物血栓生成儀測定血栓形成時間（OT值）及血栓長度，以OT值和血栓長度作為判斷藥效的指標。

表1 對大鼠心臟指數和心電圖ST段位移的影響（，n = 10）

表1 對大鼠心臟指數和心電圖ST段位移的影響（，n = 10）

注：與模型對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 劑量/（mg/kg） SI/% 結扎后ST/mV 再灌注ST/mV空白對照組 - 0.311±0.020 0.08±0.01 0.09±0.03模型對照組 - 0.325±0.021 0.75±0.26 0.18±0.16金納多片組 43.2 0.309±0.030# 0.54±0.16# 0.19±0.16低劑量組 250 0.319±0.024 0.33±0.21## 0.21±0.19中劑量組 500 0.308±0.028# 0.47±0.28# 0.22±0.27高劑量組 1 000 0.310±0.023# 0.56±0.18# 0.31±0.32

3.1.2 對血漿PGI2、TXA2的影響 見表2。

3.1.3 對大鼠心肌梗死面積的影響 見表3。

3.2 對小鼠常壓耐缺氧的影響 見表4。

3.3 對大鼠體內血栓的影響 見表5。

表2 對大鼠血漿PGI2、TXA2的影響（x± s，n = 10）

表3 對大鼠心肌梗死面積的影響（x± s ，n = 10）

表4 對小鼠存活時間的影響（x± s ，n = 10）

表5 對大鼠體內血栓的影響（x± s ，n = 10）

4 討論

本研究證明模型組大鼠血漿TXA2水平明顯升高，TXA2通過抑制腺苷酸環化酶，使血小板和血管平滑肌細胞內cAMP減少，從而促進血小板聚集和局部血管收縮，加重內皮損傷。因此TXA2與前列環素的平衡失調是心肌缺血或心肌壞死的主要原因[8-15]。本研究提示精芪雙參膠囊通過降低MIRI大鼠的血漿TXA2水平，增加血漿PGI2 水平及PGI2/TXA2 比值，糾正PGI2 與TXA2 之間的平衡失調，改善內皮細胞功能進而改善血管舒縮功能，解除冠脈痙攣，減少血小板聚集，減少心肌酶的漏出，在一定程度上提高了心肌組織的耐缺血缺氧能力，對缺血心肌起到了保護作用。同時炎癥反應可以引起心肌細胞壞死導致心肌細胞凋亡，細胞凋亡參與心肌缺血的過程，并在缺血再灌注誘導的病理過程中發揮重要作用。精芪雙參膠囊可能通過抑制心肌細胞凋亡機制縮減I/R后心肌梗死體積，減輕心肌損傷，改善心功能[16-17]。

本實驗結果顯示，精芪雙參膠囊能延長大鼠血栓形成時間并抑制血栓長度，藥物可能是通過影響內源性和外源性凝血通路以及凝血系統凝血因子實現抗血栓作用。

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