高分離度液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用法檢測不同種類茶葉對人參皂苷的影響

戴雨霖，喬夢丹，越 皓，宋 巖

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

人參的主要有效成分是人參皂苷[1]。《中華本草》中記載“人參不宜與茶同服”[2]。同樣在《中藥學(xué)》中記載服用人參時(shí)“不宜同時(shí)吃蘿卜或喝茶”，以免影響補(bǔ)力[3]。茶葉主要含有單寧和茶多酚[4]，單寧有一定的收斂作用，易與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成鞣酸蛋白，影響吸收而降低藥效。茶多酚的含量在茶葉里面很高，約含20%～35%。茶多酚是混合物，比如綠茶里主要叫兒茶素，紅茶里的兒茶素經(jīng)過發(fā)酵過程變成了茶黃素。然而，茶葉是一個(gè)龐大的范疇，其中包括綠茶、白茶、紅茶等，每種茶葉的化學(xué)成分不同，每種茶葉與人參合用的效果也一定不盡相同。吳紅娟等[5-6]利用高效液相色譜法和紫外分光光度法對參茶同用對人參總皂苷含量影響進(jìn)行了研究，結(jié)果研究技術(shù)不能完全說明合用前后的效果。

快速分離液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（RRLC-Q-TofMS）技術(shù)是天然產(chǎn)物有效成分定性定量分析的工具[7-8]。本研究首次采用RRLC-Q-TofMS技術(shù)研究茶葉對人參皂苷的影響，從化學(xué)成分變化的角度闡述二者合用禁忌的科學(xué)內(nèi)涵，為人參新資源食品的合理應(yīng)用提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料 綠茶：盧正浩牌西湖龍井，杭州正浩茶葉有限公司，批號：2016-02-15；白茶（特級）：芳羽安吉白茶，安吉遞鋪三官大明山茶廠，批號：2016-04-06；普洱茶（特級）：大益普洱茶，勐海茶廠，批號：2014-04-23；茉莉花茶：翡翠谷茉莉花茶，黃山市歙縣翡翠谷茶葉有限公司，批號： 2016-03-01；紅茶（特級）：武夷山金駿眉紅茶，批號：2016-03-20；紅茶：樂品樂茶，祁門紅茶，安徽中聯(lián)茶葉進(jìn)出口有限公司，批號：2016-04-01；烏龍茶：璟福源烏龍茶，批號：2016-05-10。實(shí)驗(yàn)用人參樣品來源于第四次全國中藥資源調(diào)查，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院于澎教授鑒定為五加科植物人參Panax ginsengC.A.Mey. 的干燥根和根莖；人參皂苷 Rg1、Rf、Rb1、Rc、Re和Rb2等對照品，純度均＞98%，購于南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 Agilent 1200 型快速分離液相色譜系統(tǒng)和Agilent 6520 Q-TOF 質(zhì)譜儀（美國 Agilent 公司）。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備 人參組：人參3 g；人參綠茶組：人參3 g，綠茶3 g；人參白茶組：人參3 g，白茶3 g；人參普洱茶組：人參3 g，普洱茶3 g；人參茉莉花茶組：人參3 g，茉莉花茶3 g；人參紅茶（祁門）組：人參3 g，祁門紅茶3 g；人參紅茶（金駿眉）組：人參3 g，金駿眉紅茶3 g；人參烏龍茶組：人參3 g，烏龍茶3 g。將以上各組分別放入250 mL錐形瓶中，各加開水200 mL，密閉浸泡15 min，取上清液100 mL備用。

分別精密稱取備用液各25 mL，通過離心，吸取上清液，0.22 μm孔徑的有機(jī)濾膜濾過后，待測。

1.3.2 色譜質(zhì)譜條件 色譜柱： Agilent Eclipse Plus C18 柱（2.1 mm×150 mm×3.5 μm）；梯度洗脫：流動(dòng)相： 0.1%甲酸水溶液（A），乙腈（B）；流動(dòng)相梯度：0～9 min、0%～19%（B）；9～25 min、19%～25%（B）；25～28 min、25%～50%（B）；28～31 min、50% ～90%（B），31～32 min、90%～99%（B）；柱溫30 ℃；流速0.3 mL/min ；進(jìn)樣量5 μL。電噴霧負(fù)離子掃描模式（ESI-），干燥氣（N2）流速：8 L/min、溫度350 ℃，霧化氣壓力

2.41 ×105/mPa，毛細(xì)管電壓3 500 V，碎裂電壓220 V，錐孔電壓35 V，質(zhì)量掃描范圍 （m/z ）150～2 000。

2 結(jié)果

2.1 人參皂苷的LC/MS研究 色譜條件優(yōu)化結(jié)果表明，0.1 %的甲酸水溶液和乙腈二元線性梯度洗脫，人參皂苷Rg1、Rf、Rb1、Rc、Re和Rb2得到了較理想的分離效果。

采用RRLC-Q-TofMS聯(lián)用技術(shù)，根據(jù)人參皂苷類化學(xué)成分的色譜保留時(shí)間，準(zhǔn)分子離子峰和二級質(zhì)譜碎片信息，并參考文獻(xiàn)[9]進(jìn)行解析，分析比較了6種人參皂苷在不同樣品中的含量。見圖1。

2.2 不同種類茶葉對人參皂苷含量的影響比較 將7組樣品（人參組、人參綠茶組、人參普洱茶組、人參茉莉花茶組、人參紅茶（祁門）組、人參紅茶（金駿眉）組、人參烏龍茶組）中的6種人參皂苷進(jìn)行分析比較。結(jié)果：人參組與參茶同用比較，6種人參皂苷均有不同程度降低。其中Rg1與Rb1最為明顯：人參組中Rg1含量達(dá)到13.8 mg/g左右，而人參烏龍茶組含量只有8.2 mg/g左右。與人參組相比最接近的是人參綠茶組，達(dá)到了13.2 mg/g左右；以人參皂苷Rb1為考察指標(biāo)，人參白茶組與人參紅茶（金駿眉）組含量最低，人參茉莉花組含量最高，達(dá)到了3.6 mg/g左右，與人參組最接近。其他人參皂苷Rc、Rb2、Rf和Re，人參組與其他參茶組相比，下降趨勢不明顯，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此，茶的種類不同，與人參的相互作用也不盡相同。

3 結(jié)論

通過人參和不同種類的茶葉進(jìn)行合用，利用RRLC-Q-Tof MS聯(lián)用技術(shù)對人參皂苷的成分及含量進(jìn)行了鑒定比較。研究中所應(yīng)用市面上銷售常見的茶葉，結(jié)果顯示，烏龍茶與人參合用，對人參的藥效發(fā)揮影響最大，而綠茶與人參合用，會(huì)微小的影響人參皂苷的含量，但差異不大。由于茶葉分為發(fā)酵和未發(fā)酵的品種，其中的單寧和茶多酚含量有較大差異，可能是導(dǎo)致人參皂苷含量差異的原因。與人參皂苷相互競爭或者抑制浸出的茶葉中的特殊物質(zhì)是下一步研究的重點(diǎn)。

[1]CHOI K T. Botanical characteristics, pharmacological effects and medicinal components of Korean Panax ginseng C A Meyer[J]. Acta Pharmacologica Sinica, 2008, 29(9):1109-1118.

[2]國家中醫(yī)藥管理局《 中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社, 1998.

[3]高學(xué)敏.中藥學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社, 2002:510.

[4]DAVID I G, BIZGAN A M, POPA D E, et al. Rapid determination of total polyphenolic content in tea samples based on caあeic acid voltammetric behaviour on a disposable graphite electrode[J]. Food Chemistry, 2015(173):1059-1065.

[5]吳紅娟,何桂霞,姚穎,等.參茶同用對人參總皂苷含量影響的研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2009, 29(1):33-34.

[6]吳紅娟,何桂霞,姚穎,等.高效液相色譜法測定參茶中人參皂苷Rg1和Re濃度[J].中國康復(fù), 2009, 24(5):301-302.

[7]方春雪,位鴻,何蕊,等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 32(2):405-406, 440.

[8]陳佩東,周習(xí).白芍總皂苷部位的液質(zhì)聯(lián)用分析[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 31(2):241-244.

[9]戴雨霖,越皓,孫長江,等.高分離度快速液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法分析酒制和醋制人參的皂苷類成分[J].分析化學(xué), 2015, 43(8):1181-1186.