奶牛布氏桿菌病流行病學(xué)分析與診斷

石碩

（北京市順義區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心 100300）

布氏桿菌病又稱為布病，是由于布氏桿菌侵入機體而引起的一種人畜共患傳染病。 此病在世界各地都有不同程度的流行，主要感染牛、羊、豬、犬等，也可以感染人。 發(fā)病后典型的癥狀就是引起生殖器官和胎膜炎癥，造成流產(chǎn)、不孕等。 人感染后，癥狀和感冒相似，常被誤診，從而轉(zhuǎn)成慢性，治愈率很低，造成勞動能力喪失。 因為人畜布病，每年的治療費用很高，給養(yǎng)殖業(yè)帶來很大的經(jīng)濟損失，也威脅著人類的健康，要引起足夠的重視。

1 病原

布氏桿菌屬主要有6 個種，分別為羊種布氏桿菌、牛種布氏桿菌、豬種布氏桿菌、犬種布氏桿菌、綿羊種布氏桿菌和沙林鼠種布氏桿菌。 羊、牛、豬、犬種布氏桿菌對人畜都有感染力，綿羊種布氏桿菌只對羊有感染力。沙林鼠種對人畜都不感染。每種布氏桿菌又有不同的類型，如牛種布氏桿菌有1、2、3、4、5、6、7、9型。 布氏桿菌的毒力和致病力較強，尤其是羊種、牛種和豬種更為明顯。

布氏桿菌為球桿形或短棒狀的革蘭氏陰性菌， 沒有鞭毛，不能運動，也沒有芽孢，一般情況下也不形成莢膜，但也有人認(rèn)為其在惡劣的條件下可以形成莢膜樣物質(zhì)或莢膜樣結(jié)構(gòu)， 提高其對外界的抵抗力。 此菌革蘭氏染色和柯茲羅夫斯基染色都為紅色，可以用以進(jìn)行染色鑒別。

布氏桿菌為需氧菌，但是其生長繁殖還需要C02，最適宜的生長溫度為36℃～37℃，最適宜生長的pH 為6.4。 此菌對外界環(huán)境的抵抗力相當(dāng)強，直射陽光下可以存活4h，不耐濕熱，煮沸條件下立刻死亡，60℃加熱30min 或70℃加熱5min 就可以將其殺死。其對普通的消毒藥也非常敏感，2%石炭酸、來蘇水、火堿溶液在1h 內(nèi)就可以將其殺死；5%新鮮石灰乳、2%福爾馬林經(jīng)2h 或1h 可將其殺死；0.5%洗必泰或0.01%度米芬、新潔爾滅，在5min內(nèi)就可以殺死該菌。

2 流行病學(xué)

對布氏桿菌易感的動物很多，200 多種動物可感染布病。最易感的為牛、羊、豬，其次還有牦牛、野牛、馬、狗、貓等動物和人。通常牛種布氏桿菌感染引起牛布病， 牛布病在全球幾乎都有感染發(fā)病，尤其是在南歐和西亞等國家，牛、綿羊、山羊混合養(yǎng)殖，造成牛感染羊種布氏桿菌而發(fā)病。 沒有懷孕的母牛感染后通常沒有臨床癥狀，懷孕的母牛感染后會引起胎盤炎，導(dǎo)致母牛在妊娠期內(nèi)流產(chǎn)，有的雖然不會引起流產(chǎn)，但是在其胎盤、胎液和陰道排泄物中會有大量病原。成年公牛感染后會引起睪丸炎癥。布病是導(dǎo)致母牛、公牛不孕的主要原因。 有的牛感染后，還會引起關(guān)節(jié)炎、淋巴結(jié)炎等。

布病的主要傳染源為病畜和帶菌動物，病原微生物通過陰道分泌物、乳汁、精液、糞尿等排除體外，污染周圍的環(huán)境、飼料、飲水等，健康牛通過配種、消化道、皮膚黏膜接觸等感染發(fā)病，尤其是流產(chǎn)母牛的胎水、胎兒、胎衣中含有大量的布氏桿菌，是最危險的傳染源。 布病多呈地方流行，發(fā)病沒有季節(jié)性，飼養(yǎng)管理粗放、應(yīng)激是誘發(fā)此病的主要因素。

3 診斷

3.1 病原學(xué)診斷

3.1.1 染色鏡檢 無菌采取病料， 做成涂片自然干燥后用火焰固定，然后用2%的沙黃水溶液覆蓋標(biāo)本放在酒精燈火焰上加溫直至產(chǎn)生小氣泡，再水洗后用堿性美藍(lán)溶液染色呈紅色，放置到顯微鏡下觀察可見球桿形的桿菌。 必要的時候還可以對布氏桿菌做進(jìn)一步分離，可以從病料中直接分離培養(yǎng)，或者通過感染動物間接分離。

3.1.2 PCR 擴增 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展， 也逐漸的應(yīng)用于布氏桿菌的檢測。 PCR 檢測技術(shù)具有快速、準(zhǔn)確、高效的特點，其在檢測、鑒定布氏桿菌方面越來越受到重視，把菌體基因組以及基因組外的某些特定序列作為檢測的基因序列， 可以確定布氏桿菌的屬、種，有良好的發(fā)展前景。

3.2 免疫學(xué)診斷

3.2.1 凝集試驗 試管凝集試驗、 平板凝集試驗這是傳統(tǒng)的檢測方法，現(xiàn)在已經(jīng)很少使用。 現(xiàn)在常用卡片試驗、虎紅平板凝集試驗和緩沖平板凝集試驗。 這些檢測方法主要是基于抗體對抗原表面脂多糖0-鏈的檢測。凝集試驗操作簡單，方便、快速，在養(yǎng)殖場中普遍推廣應(yīng)用。

3.2.2 補體結(jié)合試驗(CFT) CFT 是目前應(yīng)用最廣泛的一種檢測方法，敏感特異性較高，是國際貿(mào)易指定的檢測牛、羊、綿羊副睪種布氏桿菌病的方法。 在一些慢性病牛中，當(dāng)血清凝集價已經(jīng)降為陰性或者可疑的情況時，補體結(jié)合反應(yīng)仍然為陽性，由此也說明了CFT 檢測布病的特殊意義。

3.2.3 乳環(huán)試驗(MRT) MRT 是檢測奶牛布氏桿菌病的主要方法，這種方法操作簡便、快速、對奶牛不會產(chǎn)生刺激，也不會影響生產(chǎn)，受到養(yǎng)殖戶的好評。 MRT 不僅可以檢疫個體乳樣，也可以檢疫混合乳樣，尤其適合于大規(guī)模的例常檢疫，能迅速的篩選某個牛群或區(qū)域。 但是這種方法有時會出現(xiàn)假陽性，影響檢測效果。

3.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) ELISA 法與CFT 檢測效果都很顯著，但ELISA 法更方便，既可以用于血清學(xué)診斷，也可以用于乳汁檢查。 不僅可以作為確證實驗， 也可以作為篩選實驗，是一種發(fā)展前景很好的診斷方法。 ELISA 法的關(guān)鍵就是選用抗原。 牛種布氏桿菌病ELISA 法已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使用S-LPS 抗原。

4 結(jié)語

布氏桿菌病沒有明顯的臨床癥狀，診斷要結(jié)合細(xì)菌學(xué)、血清學(xué)診斷才可以確診。 養(yǎng)殖生產(chǎn)中，要結(jié)合用途和具體情況采用適合的診斷方法。 細(xì)菌學(xué)診斷主要有涂片染色鏡檢、 病原分離鑒定；血清學(xué)診斷主要有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)、酶聯(lián)免疫吸附試驗等。 普查布病常用平板凝集試驗、試管凝集試驗和補體結(jié)合試驗等。