microRNA-23b在膿毒癥患者外周血中的表達及與臨床病理特征的相關性分析

劉 峰

(河北省張家口市中醫院，河北 張家口 075000)

膿毒癥是導致危重病患者死亡的主要原因，多由感染引起的急性全身性炎癥反應綜合征(SIRS)。最新研究發現，microRNA中的microRNA-23b通過調節細胞內多種信號通路進而影響細胞的增殖、分化、凋亡以及與組織間的黏附[1]。國外報道，microRNA-23b可防止自身免疫性疾病的發生，可能與其能夠調節白細胞介素-1β(IL-1β)、白細胞介素-17(IL-17)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等多種炎性因子及核轉錄因子-κB(NF-κB)通路介導血管內皮細胞的活化等機制有關[2]。研究表明，microRNA-23b在腫瘤組織中低表達，具有一定的抑制腫瘤細胞增殖的作用[3]。本研究通過觀察膿毒癥患者及正常人群外周血中microRNA-23b的表達情況，初步探討microRNA-23b在膿毒癥疾病進展及預后的作用機制，現報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2013年5月—2016年12月我院重癥監護室(ICU)收治的88例膿毒癥患者為膿毒癥組，均符合美國胸科醫師學會/危重病醫學會制定的關于膿毒癥的相關診斷標準[4]，排除年齡<18歲者，不符合膿毒癥的診斷標準者，因器官移植及激素類藥物服用導致處于長期免疫抑制狀態者，長期服用抗凝藥物者。88例患者中男52例，女36例；年齡22～79(52.1±10.6)歲；根據疾病嚴重程度分為一般膿毒癥25例，嚴重膿毒癥32例，膿毒癥休克31例；急性生理學及慢性健康狀況(APACHEⅡ)評分系統輕度21例，中度40例，重度27例；無凝血功能障礙35例，凝血功能障礙糾正22例，凝血功能障礙未糾正31例。同時選取40例門診健康體檢者為對照組，其中男23例，女17例；年齡23～78(53.4±9.5)歲。2組一般資料比較差異無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性。本研究經我院倫理委員會研究批準，所有入組對象均對研究過程知情同意。

1.2 檢測方法

1.2.1 標本采集 用EDTA處理過的抗凝管采集所有對象靜脈血3 mL，4 ℃ 3 000 r/min離心15 min，將血漿收集后，4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，將細胞碎片去除，-80 ℃冰箱中保存待用。

1.2.2 microRNA-23b檢測 首先用Trizol依照試劑盒說明書提取外周血200 μL中的總RNA，并用0.1%焦碳酸二乙酯水溶解總RNA，在分光光度計上進行RNA純度及濃度測定。采用qRT-PCR法檢測microRNA-23b表達量：反轉錄miRNA，均在冰上進行，反轉錄反應條件：37 ℃ 60 min，95 ℃ 5 min，用無RNase的純凈水稀釋cDNA，并進行qRT-PCR反應，反應程序：95 ℃預變性10 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火20 s，70 ℃延伸10 s，50個擴增循環，在qRT-PCR儀中進行microRNA-23b含量檢測。

1.3 觀察指標 統計所有膿毒癥患者的病情，并統計入住ICU 28 d內的死亡患者例數；檢測并比較2組外周血中microRNA-23b的表達情況；對microRNA-23b表達與膿毒癥患者的臨床病理特征進行相關性分析。

2 結 果

2.1 88例膿毒癥患者病情分析 88例膿毒癥患者中出現肺部感染42例，腹膜炎14例，泌尿系統感染13例，細菌性心內膜炎10例，膽管感染9例。病死率為20.45%(18/88)。

2.2 2組microRNA-23b表達情況比較 與對照組比較，膿毒癥組外周血中microRNA-23b的表達量明顯降低(P<0.05)；隨膿毒癥嚴重程度的增加患者microRNA-23b表達呈逐漸降低趨勢，嚴重膿毒癥和膿毒癥休克的患者microRNA-23b表達明顯低于一般膿毒癥患者(P<0.05)，膿毒癥休克的患者microRNA-23b表達又低于嚴重膿毒癥患者(P<0.05)，見圖1及圖2。

圖1 2組microRNA-23b表達情況比較

圖2 不同程度膿毒癥患者microRNA-23b表達情況比較

2.3microRNA-23b表達情況與臨床病理特征的相關性分析microRNA-23對膿毒癥診斷的AUC為0.826，靈敏度82.45%，特異度86.41%，膿毒癥患者依據microRNA-23表達水平分為2組，低表達組35例和高表達組53例。經相關性分析結果顯示，膿毒癥患者microRNA-23表達與疾病嚴重程度、APACHEⅡ評分系統、凝血功能障礙情況及是否糾正及預后有明顯的相關性(P均<0.05)，與患者的性別及年齡無關(P均>0.05)。見表1。

3 討 論

膿毒癥是臨床ICU危重病患者死亡的常見原因，患者多因進行大型手術、嚴重創傷、燒傷及休克等因素引發不同程度的感染。目前關于膿毒癥的病理生理學機制醫學界尚未明確，且臨床治療手段有限，患者預后差。相關研究結果表明，膿毒癥患者多存在免疫功能失調現象，感染后炎性遞質大量釋放，血管內皮細胞受損，血管通透性增加，機體凝血功能異常，進而膿毒癥由SIRS進展為伴發多器官功能障礙綜合征(MODS)及持續性低血壓的膿毒癥休克[5]。膿毒癥在臨床治療初期可被誤診為SIRS，致使延誤疾病治療，因此對于膿毒癥的確診臨床需要更為精確和特異性的生物標志物。

microRNA是轉錄后具有調節作用的一類基因，與靶基因結合后可調節相關基因的表達，在分泌代謝、機體炎癥、腫瘤等多種疾病的病理生理過程中起重要作用。microRNA在血液、汗液及母乳等體液中均可被檢出，且穩定性較RNA更高，更適合作為生物標記物對疾病進行早期診斷及預后評估。目前在膿毒癥的研究中，對microRNA-125b、microRNA-150、microRNA-223、microRNA-146等的研究較為深入，均參與膿毒癥的病理過程及疾病進程中的相關細胞因子的調控[6-7]。microRNA-23b是最新發現的microRNA，其與腫瘤的發生、轉移等關系密切，并可調控細胞增殖、侵襲和轉移。研究顯示，外周血microRNA-23b作為胃癌篩查分子標志物，可反映患者病情進展，診斷效果較高，應用價值廣泛[8-9]。茅凌翔等[10]，microRNA-23b可抑制EV71型病毒在神經細胞中復制。李娜等[11]研究顯示，重癥肌無力患者外周血microRNA-23b呈現高表達。另外研究發現，大量炎癥因子形成復雜網絡結構，在膿毒癥的疾病進展中起重要作用，膿毒癥發病早期可檢測到IL-6、TNF-α等炎癥細胞因子水平升高，且升高程度可間接反映疾病的嚴重程度[12]。microRNA-23b通過靶定TGF-β活性激酶1靶蛋白2(TAB2)，從而對自身免疫性疾病起保護作用，抑制炎癥反應程度。

表1 膿毒癥患者microRNA-23表達情況與臨床病理特征的相關性分析 例(%)

本研究結果顯示，與對照組比較，膿毒癥組外周血中microRNA-23b的表達量明顯降低；隨膿毒癥嚴重程度的增加患者microRNA-23b表達呈逐漸降低趨勢，嚴重膿毒癥和膿毒癥休克患者microRNA-23b表達明顯低于一般膿毒癥患者，膿毒癥休克的患者microRNA-23b表達又低于嚴重膿毒癥患者。相關性研究結果表明，膿毒癥患者microRNA-23b表達與疾病嚴重程度、APACHEⅡ評分、凝血功能障礙情況及是否糾正及預后有明顯的相關性。表明膿毒癥患者外周血中microRNA-23b的表達與疾病的嚴重程度密切相關，疾病越嚴重，APACHEⅡ評分越低，其microRNA-23b在外周血中的表達水平越低；另外microRNA-23b的表達與預后也有相關性，膿毒癥死亡患者與存活患者相比，外周血中microRNA-23b水平明顯降低。膿毒癥患者通常致凝血系統處于激活狀態，30%～50%膿毒癥患者有不同程度的凝血功能障礙現象[13]，因感染后大量炎癥遞質釋放，IL-6、IL-8等炎癥遞質具有明顯的促凝效應，另外抗凝血酶、蛋白C等合成不足也可導致膿毒癥患者發生凝血功能障礙[14]，相關分析表明外周血中microRNA-23b與凝血障礙發生也具有一定相關性，有凝血障礙患者及未能被糾正患者外周血中microRNA-23b表達量更低。

綜上，microRNA-23b在膿毒癥患者外周血中明顯降低，其表達量與患者的疾病嚴重程度、APACHEⅡ評分、凝血功能障礙情況及是否糾正及預后有明顯的相關性。

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