消腫凝膠劑制備工藝質量標準的驗證

(山西醫科大學第二醫院，山西 太原 030001)

滑膜炎是一種多發性疾病，其臨床表現為關節腫脹疼痛，活動困難，嚴重影響人們的日常生活及身心健康性[1]。因此，通過現代科研手段，研究出一種療效確切、毒副作用小、使用方便的新劑型十分必要。消腫凝膠劑由海桐皮、紅花、當歸、桃仁、甘草、苦參等組成，具有活血通絡、清熱祛濕的功效，對于膝關節腫脹疼痛、發熱等具有很好的療效。該藥使用方便易于吸收，同時避免口服用藥的不良反應。本實驗通過對消腫凝膠制劑的制備方法進行驗證，確定其性質穩定；通過薄層色譜法對膠劑主要中藥進行定性鑒別，確定消腫凝膠劑的主要成分。

1 材料與儀器

1.1 材料

消腫凝膠劑提取物，卡波姆940，苦參堿、紅花、甘草等對照藥材均符合2015版《中國藥典》相關規定。

1.2 儀器

硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)，電子天平(余姚市金諾天平儀器有限公司)，ZF-2型三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠)，KQ2200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，pHs-3C型pH計(上海儀電科學儀器股份有限公司)，800離心機(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)。

2 處方及制備

2.1 處方

2.2 藥物有效成分提取

取處方中的甘草、苦參、紅花，分別用煎煮法煎3次，濾液過濾提取有效成分，并將藥液過篩濃縮成膏，膏的密度按傳統方法測得為1.23 g/mL，生藥量為3.26 g/mL，制得消腫凝膠劑。

2.3 凝膠劑的制備工藝

卡波姆浸泡48 h后，加入處方所需劑量的保濕劑、藥膏；攪勻；再加入三乙醇胺，對羥基苯甲酸乙酯，加蒸餾水至處方量，攪勻即得褐色粘稠狀液體。

3 凝膠劑制備工藝的驗證

3.1 驗證標準

參考《中國藥典》2015版規定，凝膠劑應均勻、細膩，在常溫時保持膠狀，不干涸或液化。將凝膠劑的成型性、涂展性、穩定性、光澤性、失水率、黏度作為指標，考查凝膠劑的成型情況。

3.2 穩定性[2]

3.2.1 離心實驗 提取后的藥液，加入浸泡48 h的卡波姆，待浸泡溶脹后，加入處方所需劑量的保濕劑、藥膏；攪勻；再加入三乙醇胺，對羥基苯甲酸乙酯，加蒸餾水至處方量，攪勻既得褐色粘稠狀液體，通過3 000 r/min，離心30 min，觀察凝膠劑的分層、結塊及其他外觀變化。

3.2.2 低溫實驗 根據制備工藝制備的凝膠劑放置于冰箱(-20℃)24 h，觀察同離心實驗。

3.2.3 熱恒溫試驗 所制備的凝膠劑置于55℃水浴鍋內6 h，觀察同離心實驗。

3.3 粘度測定

采用NDJ-1型旋轉式粘度計，選擇相應的轉子、轉速，17℃測定凝膠劑粘度。

3.4 失水率測定

將適量的凝膠劑放入培養基中，稱其質量，在烘箱中干燥，溫度為55℃，每1 h取出放冷，再次稱重,直至凝膠劑的質量不再改變為終點。

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3.5 防腐劑實驗

將消腫凝膠劑按照千分之一的比例加入防腐劑對羥基苯甲酸乙酯，放置1個月，觀察現象。

4 質量標準的檢測

4.1 性狀

取本品，涂于培養皿，要求培養皿白色透明，可觀察本品褐色粘稠狀液體，無明顯氣味，具有良好涂展性。

4.2 pH值

將2 g的凝膠劑加入40 mL的蒸餾水中，超聲10 min，待凝膠劑溶解后，用pH酸度計測定pH值[2]。測出pH值，連續測定三批試樣，三批試樣均符合藥典規定標準，在皮膚表面pH值4.5～6.5之間。見表1。

表1 三批樣品的pH 值

4.3 定性鑒別

4.3.1 甘草的定性鑒別 100 mL的甲醇中溶10g的凝膠劑，超聲30 min后過濾，濾液蒸干，再溶于30 mL的水中，用乙酸乙酯提取兩次，蒸干，殘渣加甲醇1 mL，為供試品溶液，同法制得陰性對照溶液,取甘草對照藥材2 g放入100 mL水中，煎煮30 min后濾過，濃縮至30 mL；吸取三種溶液各5μL,點于1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(17∶1∶1∶1.5)為展開劑，展開，取出晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至105℃，斑點顯色清晰，置紫外燈下檢視。

4.3.2 苦參的定性鑒別 100 mL的甲醇中溶10 g的凝膠劑，超聲30 min過濾，濾液蒸干，再溶于50 mL的水中，加濃氨試液調節pH值，范圍為9～10，用30 mL的三氯甲烷萃取兩次，蒸干，加甲醇1 mL，為供試品溶液,同法制得陰性對照溶液；取苦參堿，加甲醇制成1 mg/mL對照品溶液;吸取三種溶液各5μL，點于2%氫氧化鈉溶液的硅膠 G薄層板上，甲苯-乙酸乙酯-丙酮-濃氨試液(2∶4∶3∶0.2)為展開劑，展開，取出晾干，再噴以改良的碘化鉍鉀試液，進行觀察。

4.3.3 紅花的定性鑒別 100 mL的甲醇中溶10 g的凝膠劑，超聲30 min后過濾，濾液蒸干，加水30 mL，用乙酸乙酯萃取兩次，用1%氫氧化鈉溶液20 mL振搖提取2次，用稀鹽酸調節PH值至5，再用乙酸乙酯30 mL振搖提取兩次，用無水硫酸鈉脫水，蒸干，加乙酸乙酯1 mL溶解，為供試品溶液,同法制得陰性對照溶液,取紅花對照藥材1 g,加水適量，煎煮1 h，放冷濾過，濃縮至約20 mL；吸取溶液各5μL,分別點于同一硅膠G薄層板上，環己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(7∶4∶1)為展開劑，展開，取出晾干，置濃氨的瓶口熏30 min后，置紫外燈下檢視。

5 結果

5.1 消腫凝膠劑的穩定性試驗

依照制備工藝制備的凝膠劑經過離心、低溫、熱恒溫實驗，凝膠劑無分層，分布均勻，無雜質，外觀變化不明顯。

5.2 消腫凝膠劑的黏度測定

測定消腫凝膠制劑的黏度值為100 Pa.s，符合規定。

5.3 消腫凝膠劑的失水率試驗

按照制備工藝制備的凝膠劑放入烘箱干燥，溫度為55℃，分別測定不加保濕劑與分別加入三種不同保濕劑對凝膠劑制備的影響。見表2。

表2 保濕劑對凝膠劑制備的影響

5.4 防腐劑實驗

加入防腐劑的效果良好，無發霉現象。

5.5 pH值的測定

通過pH酸度計測定的pH值，范圍為4.5～6.5之間；符合皮膚表面pH值。

5.6 定性鑒別

5.6.1 甘草的定性鑒別 紫外燈下可見，與對照藥材相應的位置上，有明顯的紫色斑點作為區分，陰性對照藥材溶液無熒光斑點，陰性對照無干擾。見圖1。

5.6.2 苦參的定性鑒別 日光下觀察到與對照藥材對應的位置上，有明顯的黃色主斑點作為區分，陰性對照藥材溶液無熒光斑點，陰性對照無干擾。見圖2。

5.6.3 紅花的定性鑒別 紫外燈下可見，在與對照藥材色譜和供試品相應的位置上，顯相同顏色的斑點，有明顯的斑點作為區分，陰性對照無干擾。見圖3。

圖1甘草薄層色譜圖圖2苦參薄層色譜圖圖3紅花薄層色譜圖

1.陰性對照 2.供試品 3.甘草標準品 1.苦參堿 2.供試品 3.陰性對照 1.紅花標準品 2.供試品 3.陰性對照

Fig.1TLCofGlycyrrhizaUralensisFig.2TLCDiagramofBitterInfiltrationFig.3SafflowerTLC

6 討論

消腫凝膠制劑方中以苦參、紅花等組成藥材為主，具有清熱燥濕，活血通經，去瘀止痛等多重功效，有效緩解病痛及其癥狀。本實驗采用恒溫干燥失重法，觀察不同時期的失水率情況，篩選出較強的保濕劑，雖然有多種選擇，失水率接近，但是考慮到價格以及方便的情況下選擇以甘油為保濕劑；三乙醇胺在中藥外用消腫凝膠制劑中主要是增稠劑和保濕劑，三乙胺在本次制備工藝中選擇1.5 g，初步判斷加入防腐劑的效果好。在薄層色譜法的結果中，紅花、苦參、甘草有明顯的區分斑點，可用于中藥外用消腫凝膠制劑的定性鑒別，該定性方法靈敏度高、準確度好，重現性好、專屬性強。

本次實驗初步驗證了消腫凝膠制劑制備工藝的質量標準，此制備工藝可保證消腫凝膠制劑的穩定性和含有處方的主要成分。