高危型人乳頭瘤病毒在宮頸組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)檢查中感染情況的臨床研究

(太原市婦幼保健院，山西 太原 030012)

宮頸癌是我國(guó)女性最常見的惡性腫瘤之一，有研究報(bào)道持續(xù)地感染人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是引起宮頸癌的重要因素，宮頸癌的發(fā)生似乎與HPV流行有關(guān)，2013年美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)公布的《宮頸癌篩查臨床實(shí)驗(yàn)指南》也將HPV聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢查作為30～65歲女性宮頸癌的篩查手段[1]。本研究將經(jīng)利普液基細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)檢測(cè)確診的患者伴HR-HPV感染情況進(jìn)行分析，為患者病情預(yù)測(cè)提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月～2016年6月太原市婦幼保健院收治的宮頸不同程度病變的患者431例，年齡18～78歲；其中CIN(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ級(jí)217例、Ⅱ級(jí)146例、Ⅲ級(jí)58例，鱗狀細(xì)胞癌(squamous carcinoma of the cervix, SCC)10例。患者及其家屬均知情同意本研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：陰道鏡下宮頸活檢確診并且能夠配合利普液基細(xì)胞學(xué)檢查(LPT)檢測(cè)及二代雜交捕獲試驗(yàn)(Hybrid Capture Ⅱ, HCⅡ)檢測(cè)者；排除既往有陰道手術(shù)史、習(xí)慣性流產(chǎn)史及精神疾病者。

1.2 方法

1.2.1 利普液基細(xì)胞學(xué)檢查(liquid-based cytology，LPT) a)標(biāo)本采集:先用無(wú)菌干棉球輕擦宮頸表面黏液，將采樣刷插入宮頸管內(nèi)約1 cm，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)數(shù)圈，取下刷頭放入Liqui-PREP液基保存液備檢。b)制片步驟:將Liqui-PREP清潔液4 mL加入已混勻的標(biāo)本內(nèi)再緩慢地加于離心管中離心10 min，棄上清、瀝干，加入適量細(xì)胞基液(大概為細(xì)胞團(tuán)體積3～4倍)，混勻，取50μL細(xì)胞懸液，在清潔的載玻片上均勻涂片，自然干燥、95%乙醇固定-巴氏染色-封片。c)細(xì)胞學(xué)診斷:細(xì)胞學(xué)分類方法采用Bethesda 2001報(bào)告系統(tǒng)，宮頸病變的范圍包括：良性細(xì)胞改變及宮頸上皮內(nèi)病變，后者根據(jù)程度可分為：非典型鱗狀上皮細(xì)胞，包括：無(wú)上皮內(nèi)病變或惡性病變(NILM)，意義不明確的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASC-US)及不能排除高度上皮的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASC-H)，低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)，高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)。

1.2.2 HPV-DNA-HCⅡ檢測(cè) 應(yīng)用第二代雜交捕獲試驗(yàn)(HCⅡ)技術(shù)進(jìn)行HR-HPV定性及半定量檢測(cè)，具體方法參照WHO制定的人乳頭狀瘤病毒感染及病毒載量檢測(cè)方法說明書。a)取樣：由婦產(chǎn)科醫(yī)生將宮頸管專用刷置入宮頸口，刷緣緊貼宮頸，旋轉(zhuǎn)3圈，然后將細(xì)胞刷置于標(biāo)本存儲(chǔ)液中送檢。根據(jù)美國(guó)Digene公司研制的HPV-DNA-HCⅡ 檢測(cè)方法，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行13種高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)檢測(cè)。b)結(jié)果判定：熒光讀數(shù)與陰性測(cè)定值比值(RLU/CO)≥1.0為陽(yáng)性，比值(RLU/CO)<1.0 為陰性。

1.2.3 宮頸組織活檢 陰道鏡下進(jìn)行醋酸試驗(yàn)和碘試驗(yàn)，對(duì)宮頸可疑病變多點(diǎn)取活檢。本研究根據(jù)病理檢查，篩選宮頸上皮內(nèi)瘤變、鱗狀細(xì)胞癌患者的結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同級(jí)別宮頸病變患者的HR-HPV檢測(cè)陽(yáng)性率

CINⅠ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、宮頸鱗癌患者HR-HPV的陽(yáng)性率隨著宮頸病變級(jí)別的增加而升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 組織學(xué)檢查不同程度宮頸病變患者的HR-HPV感染陽(yáng)性率比較[n(%)]

2.2 利普液基細(xì)胞學(xué)檢查中不同程度細(xì)胞學(xué)異常患者的HR-HPV檢測(cè)陽(yáng)性率

NILM、ASC-US、LSIL、ASC-H、HSIL各組的HR-HPV 陽(yáng)性率隨細(xì)胞學(xué)異常的級(jí)別增加而逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 利普液基細(xì)胞學(xué)檢查不同級(jí)別患者的HR-HPV感染陽(yáng)性率比較[n(%)]

3 討論

隨著宮頸癌的深入研究，更多的流行病學(xué)資料和分子生物學(xué)證據(jù)表明高危型HPV持續(xù)性感染是導(dǎo)致宮頸癌前病變和宮頸癌發(fā)生的重要條件[2]，本文采用HC-Ⅱ技術(shù)法對(duì)HR-HPV進(jìn)行檢測(cè)，具有較高靈敏度與特異度，研究結(jié)果也驗(yàn)證了通過HR-HPV檢測(cè)來評(píng)價(jià)宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)性是可靠的，初篩HR-HPV陽(yáng)性后的分流可篩查出需要提前干預(yù)的風(fēng)險(xiǎn)人群，所以HR-HPV檢測(cè)在宮頸癌前病變與癌變篩查中具有重要意義。由此，在臨床工作中是否進(jìn)行HPV檢測(cè)、何時(shí)檢查以及對(duì)于HPV感染者的進(jìn)一步處理都值得臨床工作者進(jìn)一步探討。2013年美國(guó)陰道鏡檢查和宮頸病理學(xué)會(huì)(ASCCP)公布的2012年宮頸癌篩查和癌前病變?nèi)蚬沧R(shí)指南》[3]指出對(duì)21～29歲女性推薦常規(guī)篩查，不推薦進(jìn)行HPV檢測(cè)；對(duì)于30歲以上婦女，HPV檢測(cè)增加了篩查的安全性與可靠性。今后將進(jìn)一步對(duì)患者進(jìn)行分層研究，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)人群跟蹤隨訪，必要時(shí)二次HPV檢測(cè)，避免HPV一過性感染者的過度治療以及確診需要進(jìn)一步治療的病患，提高宮頸癌篩查的規(guī)范性。

隨著宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的無(wú)創(chuàng)性和檢測(cè)敏感性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)被臨床普遍使用，日漸成為宮頸癌篩查的重要手段之一。液基細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)已被美國(guó)病理學(xué)會(huì)推薦使用，本研究與大多數(shù)的臨床研究報(bào)告結(jié)果相符，本研究中選取細(xì)胞學(xué)診斷的NILM、ASC-US、LSIL、ASC-H、HSIL各組HR-HPV感染陽(yáng)性率隨著細(xì)胞學(xué)異常程度增加，HR-HPV的感染陽(yáng)性率也隨之增加[4]。電子陰道鏡作為宮頸癌的輔助檢查手段，同樣有著顯著的敏感性，并能夠明確定位和有效降低漏診率，對(duì)病理組織學(xué)診斷有極大的輔助作用。本研究中顯示經(jīng)陰道鏡宮頸多點(diǎn)活檢組織中CINⅠ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、SCC等不同級(jí)別宮頸病變患者的HR-HPV檢測(cè)陽(yáng)性率，顯示HR-HPV感染陽(yáng)性率隨宮頸病變級(jí)別的升高而逐漸上升的趨勢(shì)，其中HR-HPV感染伴隨著宮頸病變的增加而增加，反映宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程。

綜上所述，早期通過液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)聯(lián)合高危型HPV檢測(cè)可以明顯的提高宮頸癌的檢出率，通過宮頸活檢組織學(xué)方法明確診斷、判斷病變程度、預(yù)測(cè)疾病發(fā)展，在一定程度降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率。