貯藏期及貯藏溫度對低溫制粒顆粒料霉變的影響

金娉婷 張明花 曹美花 張秀海 趙善倉 盛清凱

摘要：為促進(jìn)發(fā)酵飼料的應(yīng)用，研究貯藏期（1、8、16、24 d）和貯藏溫度（低溫0～4℃、中溫16～20℃和高溫30～34℃）對豬用發(fā)酵飼料低溫制粒顆粒料自由基、pH值、淀粉酶、霉菌及黃曲霉毒素等指標(biāo)的影響。制粒溫度48℃，顆粒料水分含量為12.27%，用呼吸膜塑料袋厭氧貯藏。試驗結(jié)果表明，貯藏期對過氧化氫、霉菌和黃曲霉毒素的含量及過氧化氫酶、淀粉酶活性無顯著影響（P>0.05）;貯藏溫度對丙二醛含量、過氧化氫酶和淀粉酶活性及pH值有顯著影響（P<0.05），對霉菌和黃曲霉毒素含量無影響（P>0.05）。高溫下貯藏24 d時霉菌和黃曲霉毒素的含量與貯藏1 d時無差別（P>0.05）。結(jié)果顯示發(fā)酵飼料低溫制粒顆粒料盡量避免高溫貯藏，高溫下貯藏期可以達(dá)到24 d。

關(guān)鍵詞：低溫制粒顆粒料;貯藏期;貯藏溫度;自由基;霉變

中圖分類號：S816.8文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2018）12-0123-04

發(fā)酵飼料具有改善飼料適口性、促進(jìn)豬生長、降低豬糞臭味、改善肉品質(zhì)的良好效果[1，2]，但發(fā)酵飼料為濕料，水分含量達(dá)到50%，飼喂時難以運輸，無法大規(guī)模應(yīng)用，其瓶頸因素為目前大規(guī)模豬場的飼料自動運輸系統(tǒng)為干顆粒料運輸系統(tǒng)。如果發(fā)酵飼料高溫制粒，理論上可以應(yīng)用于大規(guī)模豬場，但高溫制粒耗能多，且破壞益生菌、生物酶、維生素等熱敏物質(zhì)[3]。如果發(fā)酵飼料低溫制粒，則在保留其中益生菌、酶、維生素等物質(zhì)活性的前提下，便于大規(guī)模豬場的應(yīng)用。但低溫制粒的顆粒料水分含量高，容易變質(zhì)，如何貯藏成為難題。飼料變質(zhì)為自由基紊亂[4]、菌群改變[5]的結(jié)果，霉變過程受貯藏溫度、貯藏期等外界條件的影響[6]。確定適宜的貯藏參數(shù)，有助于低溫制粒顆粒料的廣泛使用。目前關(guān)于飼料低溫制粒顆粒料貯藏期的資料缺乏。盛清凱等報道高溫下水分含量為27.53%的全株青綠玉米低溫制粒顆粒料貯藏期不超過8 d[7]。一般高溫制粒顆粒料的水分含量低于8%，其貯藏期可以超過6個月。水分含量居于10%至20%之間低溫制粒顆粒料的貯藏期未見報道。為此，本試驗研究貯藏期及貯藏溫度對發(fā)酵飼料低水分含量低溫制粒顆粒料自由基、酶、霉菌及霉菌毒素等指標(biāo)的影響，為發(fā)酵飼料應(yīng)用提供參考。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

全價飼料低溫制粒顆粒料：將乳酸菌厭氧發(fā)酵成功的全價飼料濕粉料與全價飼料干粉料按一定比例混勻后[8]，輸送入平模顆粒制粒機中，48℃低溫制粒。將制備好的顆粒料裝入呼吸膜塑料袋中貯存待測。低溫制粒顆粒料的初始水分含量為12.27%。

1.2?試驗設(shè)計

采用兩因素試驗設(shè)計，兩因素分別為貯藏環(huán)境溫度與貯藏期。環(huán)境溫度為低溫（0～4℃）、中溫（16～20℃）和高溫（30～34℃），貯藏期分別為1、8、16、24 d。將樣品根據(jù)試驗設(shè)計分為三組，分別存放于低溫、中溫和高溫環(huán)境中，每組10袋，每袋2 kg。試驗開始日上午8時起至次日上午8時為第一天，其余類推。每次上午8時取樣100 g，然后立即將呼吸膜塑料袋封閉并擠壓排出空氣;將所取樣品快速溶于質(zhì)量比10%的蒸餾水中，3 000 r/min離心5 min后取上清液進(jìn)行分析。

1.3?檢測指標(biāo)及方法

過氧化氫、丙二醛、過氧化氫酶、淀粉酶試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。黃曲霉、霉菌毒素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒購自上海優(yōu)甘生物公司。呼吸膜塑料袋由沃進(jìn)公司提供。霉菌采用平板計數(shù)法。

1.4?數(shù)據(jù)處理

采用SAS（V9.2）軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用TWO-WAY ANNOVA進(jìn)行方差分析，采用Student-Newmnan-Keuls法進(jìn)行多重比較。數(shù)據(jù)以平均值表示。

2?結(jié)果與分析

2.1?貯藏期及貯藏溫度對顆粒料自由基的影響

表1顯示，貯藏期和貯藏溫度對過氧化氫含量皆無顯著影響（P>0.05），皆對丙二醛含量影響顯著（P<0.05）。貯藏第1、8、16、24 d，高溫處理丙二醛含量皆顯著高于低溫（P<0.05）。建議顆粒料貯藏時盡量避免高溫。

2.2?貯藏期及貯藏溫度對顆粒料自由基清除劑的影響

表2顯示，貯藏期對過氧化氫酶活性無顯著影響（P>0.05），貯藏溫度對過氧化氫酶活性影響顯著（P<0.05）。貯藏期和貯藏溫度對過氧化物酶活性的影響同過氧化氫酶。對于過氧化氫酶，貯藏第1、8、16、24 d高溫處理的活性皆顯著高于低溫處理（P<0.05）。對于過氧化物酶，貯藏第1 d高溫處理的活性與低溫處理無顯著差異（P>0.05），第8、16、24 d皆顯著低于低溫（P<0.05）。

2.3?貯藏期及貯藏溫度對顆粒料pH值和淀粉酶活性的影響

表3顯示，貯藏期和貯藏溫度對pH值皆有極顯著影響（P<0.01）;貯藏期對淀粉酶活性無顯著影響（P>0.05），而貯藏溫度對淀粉酶活性影響顯著（P<0.05）。貯藏第1、8、16、24 d，高溫處理的pH[JP3]值皆顯著高于低溫處理（P<0.01）。貯藏第1 d高溫處理的淀粉酶活性顯著高于低溫，而第8、16、24 d皆顯著低于低溫處理（P<0.05）。

2.4?貯藏期及貯藏溫度對顆粒料霉菌和黃曲霉毒素的影響

表4顯示，貯藏期和貯藏溫度對霉菌和黃曲霉毒素皆無顯著影響（P>0.05），表明高溫下顆粒料貯藏期可以達(dá)到24 d。

3?討論與結(jié)論

由于低溫制粒的顆粒料初水分含量仍超過10%，遠(yuǎn)高于干顆粒料的8%，因此如何貯藏發(fā)酵飼料低溫制粒顆粒料成為制約大規(guī)模豬場廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵問題之一。

目前未見貯藏期對低溫制粒顆粒料自由基影響的報道。本試驗貯藏期對顆粒料自由基及霉菌無顯著影響的結(jié)果與貯藏期影響發(fā)酵飼料質(zhì)量的結(jié)果[1]不同，差異原因在于本試驗顆粒料為呼吸膜塑料袋中厭氧貯存，而發(fā)酵飼料為有氧貯存。本試驗貯藏期對顆粒料霉菌無顯著影響，其可能原因為：其一，全價飼料厭氧發(fā)酵后碳水化合物降解，產(chǎn)生乳酸等有機酸，有機酸抑制了霉菌、大腸桿菌等的生長[9，10]，從而延長貯藏期;其二，呼吸膜塑料袋有助于飼料的厭氧發(fā)酵[11]，使飼料維持在厭氧的酸性環(huán)境中。

目前國內(nèi)外未見貯藏溫度對低溫制粒顆粒料自由基及霉菌影響的報道。本試驗中貯藏溫度對顆粒料丙二醛含量、過氧化物酶活性等有顯著影響，表明貯藏溫度影響自由基的代謝，這與食品類的相關(guān)研究結(jié)果一致[12，13]。本試驗貯藏溫度對霉菌和黃曲霉毒素?zé)o顯著影響的結(jié)果與食品類的一些研究結(jié)果不同[14，15]，原因可能主要在于厭氧發(fā)酵與有氧發(fā)酵的方式不同。本試驗中隨著貯藏溫度的變化，自由基代謝發(fā)生改變，而霉菌、黃曲霉毒素沒有改變，這與自由基紊亂導(dǎo)致食物變質(zhì)的結(jié)論[16，17]并不矛盾。其中一個可能原因為本試驗自由基代謝雖然發(fā)生變化，原有的自由基產(chǎn)生與清除之間的平衡被打破，但自由基尚未過量產(chǎn)生。盡管自由基能夠攻擊細(xì)胞膜、線粒體等，但本試驗條件下自由基尚未導(dǎo)致飼料的變質(zhì)。本試驗自由基尚未泛濫的原因可能在于貯藏期短或貯藏溫度不高。Mannaa等[18]報道高溫有助于霉菌的生長和霉菌毒素的產(chǎn)生，低溫作用相反。Mondal等[19]報道高溫增加了過氧化氫等自由基的活性，縮短了貯藏期。更高的貯藏溫度及更長的貯藏期對于低溫制粒顆粒料自由基代謝及微生物活性的影響有待進(jìn)一步研究。

本試驗高溫下貯藏期24 d的結(jié)果與盛清凱等[7]的結(jié)果不同，原因在于水分含量不同。目前未見低溫制粒顆粒料中水分含量對貯藏期影響的報道。從本試驗結(jié)果、盛清凱試驗結(jié)果[7]以及高溫制粒顆粒料可以長期貯藏的常識判斷，降低水分含量或許可以延長低溫制粒顆粒料的貯藏期，這有待進(jìn)一步試驗驗證。

本試驗結(jié)果表明，貯藏溫度影響低溫制粒顆粒料自由基的產(chǎn)生與清除以及飼料品質(zhì)。高溫下全價飼料低溫制粒顆粒在呼吸膜塑料袋中貯藏期可以達(dá)到24 d，低溫下可能更長。

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