龍匙片活血化瘀作用研究

孫會靜，李 麗

（1．廣西壯族自治區人民醫院，廣西 南寧 530021； 2．廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530222）

龍匙片主要由匙羹藤、龍血竭、甘草組方，是廣西壯族自治區人民醫院的臨床經驗方，使用時間已超過15年，主要用于治療糖尿病及其并發癥，療效顯著。但其活血化瘀的作用研究目前尚未見相關報道，本研究中通過建立急性血瘀和微循環障礙大鼠模型，觀察龍匙片對血液流變學、微循環障礙、凝血酶原時間（PT）和活化部分凝血活酶時間（APTT）的影響，進一步了解龍匙片的作用特點，為其臨床應用提供依據。現報道如下。

1 材料與方法

1．1 儀器、動物與試藥

1．1．1 儀器

BI－2000型醫學圖像分析系統（成都泰盟軟件有限公司）；全自動動物生化分析儀（美國 Drew公司）；LG－R－80C型全自動血液黏度儀（北京中科富邦 LG－R－80C）；微量離心機（德國艾本德 Minispin plus公司）；體外血栓形成儀、血小板黏附儀(北京第二生化儀器廠)。

1．1．2 動物

SD大鼠 120只，體質量 180～220 g，雌雄各半，實驗動物質量合格證號SCXK桂2009－0003。家兔，體質量 2．0～2．5 kg，實驗動物質量合格證號 SCXK 桂2009－0005。均購自廣西醫科大學實驗動物中心。

1．1．3 試藥

龍匙片由匙羹藤 12．5 g、龍血竭 1．5 g、甘草 9 g組方，龍匙片低、中、高3個劑量（分別相當于臨床日用量的 8 倍、15 倍、30 倍）以龍匙片生藥 3．06，5．75，11．5 g ／（kg·d）制備，加入純凈水，充分研磨，混勻；復方丹參片（陽性對照藥，廣州白云山制藥股份有限公司，批號為130918）；腎上腺素（AD，武漢遠大制藥集團有限公司，批號為20130713）；APTT檢測試劑盒購自上海榮盛生物技術有限公司，PT檢測試劑盒購自保定天岳生物工程有限公司；鏈脲佐菌素(STZ)購自Sigma公司。

1．2 方法

1．2．1 對急性血瘀SD大鼠模型的影響[1－3]

將60只SD大鼠隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組[（復方丹參片 5．0 g ／（kg·d）]，以及龍匙片高、中、低劑量組，各10只。各組按照試驗方案給藥，每日1次，給藥容積為每100 g體質量2 mL，連續14 d。第 13 天，皮下注射 AD（10 μg／kg），2 h 后，將大鼠置0～4℃冰水中游泳5 min；2 h后再次皮下注射AD，建立急性血瘀SD大鼠模型[4－5]。末次給藥后2 h，以25%烏拉坦（7 mL／kg，腹腔注射）麻醉，剪尾取血，測定凝血時間；隨后從頸總動脈取血，其中1．5 mL采用肝素抗凝，置35℃恒溫水浴；1．2 mL注入裝有枸櫞酸鈉的硅管中；0．1 mL用于血小板黏附率測定。以上血樣經抗凝處理后，用于測定血液流變學指標。另取1．8 mL用于體外測定，包括血栓長度（L，mL）、血栓濕重（W，mg），并計算血栓指數（Q）。Q＝L／2＋W。

1．2．2 對大鼠AD誘導微循環障礙模型的影響[6－7]

取SD大鼠60只，隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組[復方丹參片（5．0 g ／（kg·d）]，以及龍匙片高、中、低劑量組，各10只。各組按照試驗方案給藥，每日 1次，給藥容積為每100 g體質量2 mL，連續14 d。末次給藥后2 h，每只大鼠腹腔注射麻醉藥烏拉坦，參照Chambers法制備微循環標本，測定細動脈／細靜脈口徑、血流速度、毛細血管網交點數，觀察血液流態。除正常對照組外，各組于當前視野滴加1∶250 000 AD 0．05 mL后1 min，再次測定以上指標。分別計算滴AD后管徑、流速、網點數的減少值，計算公式如下。

管徑減少值＝滴AD后的管徑－滴AD前的管徑流速減少值＝滴AD后的流速－滴AD前的流速網點數減少值＝滴AD后的網點數－滴AD前的網點數

1．2．3 對家兔PT和APTT的影響[8]

取家兔1只，稱定質量，腹腔注射25%烏拉坦（10 mL／kg）麻醉，行頸總動脈插管采血，使血液流入裝有3．8%枸櫞酸鈉溶液的采血容器中，并不斷攪拌，混勻，控制血液與枸櫞酸鈉的體積比為9∶1。3 000 r／min離心 10 min，制備貧血小板血漿（PPP）。將 PPP分成5組，每組10管，分別與以下各組藥物混合：正常對照組、肝素鈉組（50 U）、龍匙片高濃度組（最終藥物質量濃度為含生藥1．28 g／L）、龍匙片中濃度組（最終藥物質量濃度為含生藥0．64 g／L）、龍匙片低濃度組（最終藥物質量濃度為含生藥0．34 g／L），按照檢測試劑盒說明書操作步驟測定PT和APTT。

1．3 統計學處理

采用SPSS 13．0統計軟件進行分析，計數資料以均數 ±標準差（）表示，行 t檢驗。P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 對大鼠血液流變學的影響

由表1至表3可見，與正常對照組比較，模型組大鼠的全血高切黏度、低切黏度、血漿黏度、還原黏度、血沉、凝血時間、血小板黏附率、纖維蛋白原、血栓（如長度、濕重、Q）等各項指標均較高，差異有統計學意義（P＜0．05），表明造模成功。與急性血瘀模型組比較，龍匙片對血細胞比容無影響（P＞0．05）。龍匙片高、中劑量組各指標顯著低于模型組（P＜0．05）。龍匙片低劑量組的全血高切黏度、血漿黏度、還原黏度、纖維蛋白原含量、Q等指標明顯小于急性血瘀模型組（P＜0．05），全血低切黏度、血沉、凝血時間、血小板黏附率、血栓長度、血栓濕重等指標雖有降低趨勢，但差異無統計學意義（P＞0．05）。提示龍匙片能降低大鼠血黏度，改善血液流變學，防止血栓形成，也就是說能改善中醫“血瘀癥”大鼠血液的“粘、凝、滯”狀態，且呈現一定量效關系[9－10]。

2．2 對腸系膜腎上腺素性微循環障礙模型的影響[11－12]

表1 對大鼠血液黏度的影響（，mPa·s，n＝10）

表1 對大鼠血液黏度的影響（，mPa·s，n＝10）

注：與正常對照組比較，＃P ＜0．05，＃＃P ＜0．01；與急性血瘀模型組比較， P ＜0．05， P ＜0．01。下表同。

組別正常對照組急性血瘀模型組陽性對照組龍匙片高劑量組龍匙片中劑量組龍匙片低劑量組劑量[g ／（kg·d）]5．00 11．50 5．75 3．06全血高切黏度3．26 ± 1．33 5．90 ± 1．25＃＃3．56 ± 1．27 3．78 ± 1．41 3．96 ± 1．30 4．09 ± 1．16全血低切黏度8．98 ± 1．30 15．24 ± 15．24＃＃9．61 ± 9．61 10．87 ± 10．87 11．40 ± 11．45 13．13 ± 13．13血漿黏度2．51 ± 1．41 5．13 ± 1．53＃＃2．53 ± 1．09 2．81 ± 0．81 3．08 ± 1．23 3．61 ± 1．63還原黏度6．13 ± 1．69 10．99 ± 2．10＃＃5．98 ± 1．93 6．16 ± 1．58 7．09 ± 2．62 8．71 ± 1．94

由表4可見，與正常對照組比較，急性血瘀模型組的細動脈管徑、流速及網點數明顯減少（P＜0．01），提示急性血瘀模型造模成功。與急性血瘀組比較，龍匙片大、中劑量均可顯著改善腎上腺素誘導的細動脈管徑、流速及網點數的異常（P＜0．05）；低劑量組雖有改善趨勢，但差異無統計學意義（P ＞0．05）。

表2 對大鼠凝血功能的影響（，n＝10）

表2 對大鼠凝血功能的影響（，n＝10）

組別正常對照組急性血瘀模型組陽性對照組龍匙片高劑量組龍匙片中劑量組龍匙片低劑量組劑量[g／（kg·d）]5．00 11．50 5．75 3．06血細胞比容（%）45．29 ± 5．80 48．27 ± 5．39 47．16 ± 7．25 46．95 ± 6．41 49．18 ± 9．30 48．80 ± 8．41血沉（mm ／h）1．74 ± 0．43 3．29 ± 0．86＃＃1．96 ± 1．00 2．09 ± 0．98 2．37 ± 0．85 3．20 ± 1．11凝血時間（min）2．51 ± 0．78 1．52 ± 0．67＃＃2．37 ± 0．52 2．32 ± 0．76 2．08 ± 0．37 1．83 ± 0．41血小板黏附率（%）21．48 ± 3．84 27．77 ± 6．48＃21．08 ± 3．12 21．61 ± 2．08 22．31 ± 4．37 23．93 ± 4．24

表3 對大鼠血栓指標的影響（，n＝10）

表3 對大鼠血栓指標的影響（，n＝10）

血栓組別 劑量[g ／（kg·d）]Q正常對照組急性血瘀模型組陽性對照組龍匙片高劑量組龍匙片中劑量組龍匙片低劑量組5．00 11．50 5．75 3．06纖維蛋白原（g ／L）2．05 ± 0．93 4．59 ± 0．95＃＃2．93 ± 1．28 2．84 ± 0．82 3．01 ± 1．53 3．20 ± 1．38長度（mm）13．68 ± 2．78 21．07 ± 4．39＃＃13．94 ± 3．24 15．32 ± 4．98 16．62 ± 3．99 18．06 ± 4．23濕重（mg）53．68 ± 8．19 77．68 ± 9．30＃＃58．14 ± 7．57 61．70 ± 6．40 66．96 ± 9．63 69．69 ± 9．57 60．53 ± 8．88 88．22 ± 10．70＃＃65．11 ± 8．04 69．36 ± 7．49 75．27 ± 10．66 78．72 ± 8．58

測定細動脈／細靜脈口徑、血流速度、毛細血管網交點數和觀察流態的數據，將細動脈中的血液流態分為4級。0級：線流，為正常流態；Ⅰ級：虛線流；Ⅱ級：粒流；Ⅲ級：瘀滯。由表5可見，增加數的0級指未發生改變(加重）的例數。與正常對照組比較，急性血瘀模型組的0級流態減少例數及Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ級增加例數均顯著少于正常對照組（P＜0．05），說明急性血瘀模型造模成功。與急性血瘀模型組比較，龍匙片高、中劑量組可明顯抑制AD引起的流態改變，表現為0級流態減少例數及Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ級流態增加例數均明顯減少（P＜0．05）。低劑量組雖有降低趨勢，但差異無統計學意義（P＞0．05），顯示龍匙片能抑制AD引起的微循環流態改變。

表4 對大鼠腸系膜腎上腺素性微循環障礙的作用（n＝10）

表5 對大鼠腸系膜微循環障礙模型流態的影響（，n＝10）

表5 對大鼠腸系膜微循環障礙模型流態的影響（，n＝10）

組別正常對照組急性血瘀模型組陽性對照組龍匙片高劑量組龍匙片中劑量組龍匙片低劑量組劑量[g ／（kg·d）]滴AD前(例) 滴AD后(例) 增加數(例)0Ⅰ級 Ⅱ級 Ⅲ級 Ⅰ級 Ⅱ級 Ⅲ級 Ⅰ級1Ⅱ級10 9 10 2 1 4 3 2 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 4 8 7 7 4 3 1 6 5 2 3 4 4 0 0 1 2 3 1 0 0 0 3 0＃4 4 5．00 11．50 5．75 3．06 9 8 9 2 2 0 0 0 0 1 2Ⅲ級3 1＃0 0 0 3 0級減少數(例)8 5＃2 2 1 5

2．3 對 PT及APTT的影響

由表6可見，與正常對照組比較，肝素組的PT和APTT均有顯著延長（P＜0．01），龍匙片高、中濃度組的 PT和 APTT均明顯延長（P＜0．05）；龍匙片低劑量組能明顯提高 APTT（P＜0．01），但對 PT無影響（P＞0．05），龍匙片對 PT和 APTT的影響顯示出明顯的濃度依賴關系，表明龍匙片有抑制內、外源性凝血系統的作用。

表6 龍匙片對家兔PT及APTT的影響（，n＝10）

表6 龍匙片對家兔PT及APTT的影響（，n＝10）

組別正常對照組肝素組龍匙片高濃度組龍匙片中濃度組龍匙片低濃度組藥物濃度50 U 1．15 g ／L 0．57 g ／L 0．31 g ／L PT（s）11．12 ± 2．26 45．16 ± 5．20＃＃76．89 ± 12．37＃＃16．20 ± 2．82＃＃11．95 ± 2．84 APTT（s）40．26 ± 10．77 295．20 ± 8．11＃＃222．98 ± 35．87＃＃90．72 ± 15．84＃＃60．94 ± 14．49＃

3 討論

龍匙片是臨床經驗方，由匙羹藤、龍血竭和甘草組方，可降低血糖、活血化瘀。匙羹藤 Gymnema sylvestre(Retz．)schult為蘿 科植物匙羹藤屬類植物，性平、味苦，藥理作用主要包括降血糖、調血脂、抗動脈粥樣硬化、抑制甜味、抗齲齒和抑制肥胖等[13]。龍血竭有“血中圣藥”美譽，廣泛用于各種血證，具有活血散瘀、定痛止血、斂瘡生肌等功效[14－17]。甘草的主要生物活性成分包括三萜類化合物、黃酮類化合物及多糖類化合物等，具有抗炎、抗氧化、降血糖、抗血栓等生理活性[18－20]。

本研究中采用動物試驗性急性血瘀模型、急性微循環障礙模型和體外試驗，觀察不同劑量的龍匙片活血化瘀作用。結果表明，龍匙片能改善血瘀后血液流變學的異常，還可抑制機體微循環障礙的形成，體外可抑制內源性和外源性凝血系統。龍匙片有顯著的活血化瘀作用[21]，與其臨床應用相符合，并能相互佐證。

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