反相高效液相色譜法測定復方壯藥艾條中桂皮醛含量

桂裕昌，杜沛霖 ，許建文 ，周雨晴 ，梁 迪 ，饒遠森

（1．廣西中醫藥大學第一附屬醫院，廣西 南寧 530023； 2．廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530200； 3．廣西中醫藥大學附屬國際壯醫醫院，廣西 南寧 530001）

自擬復方壯藥艾條由艾葉、桂枝、橫經席、海風藤、地楓皮、千斤拔、紅魚眼、戰骨、七葉蓮、走馬胎共10味中藥卷制成藥艾條，具有補益肝腎、活血化瘀、通絡止痛、散寒祛濕等功效[1]，尤適于強直性脊柱炎的中醫外治應用。桂枝味辛、甘，性溫，歸心、肺、膀胱經，具有發汗解肌、溫通經脈、助陽化氣的功效[1]，其主要成分桂皮醛廣泛用作中醫外治藥物的有效成分[2－3]。大量研究發現其對神經系統疾病[4]、心血管疾病[5]、腫瘤[6]、病毒性肺炎[7]、糖脂代謝疾病[8]等均有治療作用，但在應用時應注意其使用濃度。本研究中建立了同時測定復方壯藥艾條中桂皮醛含量[9－10]的反相高效液相色譜（RP－HPLC）法，為建立其全面合理的質量控制和評價標準奠定了基礎。現報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent1260型高效液相色譜儀（美國 Agilent公司）；KQ5200B型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；SQP型分析天平（十萬分之一，北京賽多利斯科學儀器有限公司）。

1．2 試藥

藥艾條(組方：艾葉 20 000 g，戰骨 1 250 g，桂枝1 250 g，橫經席 1 250 g，千斤拔 500 g，七葉蓮 500 g，走馬胎 500 g，海風藤500 g，地楓皮 500 g，紅魚眼 500 g)，由廣西醫科大學第一附屬醫院制備；藥材均購于廣西南寧市景昌中藥飲片有限公司；桂皮醛對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為 110710－201619，純度為98．9%)；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法及結果

2．1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Agilent 5 TC －C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm)；流動相：乙腈 － 水(35 ∶65)；檢測波長：290 nm；流速：1 mL ／min；柱溫：35 ℃ 。在此色譜條件下，采用外標法計算含量，理論板數以桂皮醛峰計算應不低于3 000，桂皮醛的保留時間約為15 min。色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

對照品溶液：取桂皮醛對照品0．027 00 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，得質量濃度為 0．540 0 g／L的桂皮醛溶液，取1．0 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，得質量濃度為0．010 68 g／L的對照品溶液。

供試品溶液：取復方壯藥艾條約5．5 g，精密稱定，置干燥錐形瓶中，精密量取25 mL甲醇，稱定質量，超聲30 min，放冷，補足減失的質量，過濾，取濾液 1．0 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，用 0．45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

陰性對照品溶液：按處方制備不含藥材桂皮醛的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制得。

圖1 高效液相色譜圖

2．3 方法學考察

專屬性試驗：精密吸取2．2項下3種溶液各10 μ L，分別進樣測定。結果陰性對照品溶液在相同保留時間處未見干擾。詳見圖1。

線性關系考察：取桂皮醛對照品0．001 4 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，得質量濃度為0．028 g／L的對照品溶液。按擬訂色譜條件測定，分別進樣 1，4，6，8，10，12 μL，以桂皮醛的含量(X)為橫坐標、峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，得 回 歸 方 程 Y＝8 054．066 73 X－2．874 161 5，r＝0．999 9(n＝6)。結果表明，桂皮醛進樣量在 0．028～0．336 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取桂皮醛對照品溶液(質量濃度為 0．010 68 g／L)10 μ L，在擬訂色譜條件下重復進樣6次，測定峰面積。結果峰面積的 RSD為0．4%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批樣品6份，按2．2項下方法制備供試品溶液，進樣測定峰面積，計算含量，得桂皮醛的平均含量為 0．616 2 mg／g，RSD 為 2．7%(n ＝ 6)，表明該方法重復性良好。

穩定性試驗：精密吸取新配制的供試品溶液，在0，3，4，5，8，12 h 時進樣 10 μL，測定。結果的 RSD 為1．6%(n＝6)，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：取6份已知含量的樣品(含量為0．623 mg ／g)，每份約 2．7 g ，精密稱定，精密加入質量濃度為 1．87 g／L 的對照品溶液 1．0 mL，按 2．2 項下方法制備供試品溶液，在擬訂色譜條件下進樣10 μL，按樣品含量測定方法測定、計算。結果見表1。

2．4 樣品含量測定

取3份樣品，按2．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件分別各進樣2次，每次10 μL，測定峰面積，計算含量。結果見表2。

3 討論

3．1 提取溶劑與方法選擇

預試驗中比較了蒸餾水回流提取、70%乙醇回流提取所得與甲醇超聲法提取所得，經HPLC檢測，發現其峰面積相差不大，但雜質峰過多，故采用甲醇超聲法提取。超聲提取30 min和60 min，測定結果基本一致，說明提取30 min已基本提取完全，故提取時間定為30 min。

表1 桂皮醛加樣回收試驗結果(n＝6)

表2 樣品中桂皮醛的含量測定結果(mg／g，n＝6)

3．2 穩定性試驗

供試品溶液在室溫下12 h內基本穩定，但色譜峰峰面積有逐漸降低的趨勢，可能是降解所致。對照品溶液和供試品溶液均不宜久貯。

3．3 流動相選擇

采用流動相乙腈－水(35∶65)對供試品溶液進行系統適用性考察，結果在該流動相下，桂皮醛峰形對稱，分離度符合要求。因此選定流動相乙腈－水(35∶65)作為測定流動相。

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