高效液相色譜法測定消癌平注射液中通關藤苷G含量

王祁民，馬銀玲，李 穎，安 靜

（河北省人民醫院藥學部，河北 石家莊 050051）

消癌平注射液為通關藤（烏骨藤）的根、藤莖提取物制成的水溶液，具有止咳平喘、清熱解毒、化痰軟堅等功效，主要用于治療肺癌、胃癌、肝癌、食道癌等各種惡性腫瘤[1－3]，療效較好，但仍見不良反應報道[4]，因此需要對其成分進行分析。消癌平注射液含多種成分，包括酚酸類、C21甾體苷類、甾醇／環醇類、多糖類、三萜類化合物等，近年的研究顯示，其主要活性成分為甾體苷類化合物[5]。本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測定其中通關藤苷G的含量。現報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 2487紫外檢測器（美國 Waters公司）；PHs－3c型電子 pH計（上海雷磁儀器廠）；AB204－S型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo儀器有限公司）；KQ3200型醫用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；雷勃爾LG16－B型高速離心機（北京雷勃爾離心機有限公司）。

試藥：通關藤苷G對照品（北京北納創聯生物技術研究院，批號為160103，純度＞98%）；消癌平注射液（南京圣和制藥股份有限公司，國藥準字Z20025868，批號分別為201603111，201603021，201604191，規格為每支 20 mL）；甲醇、乙腈為色譜純（美國Merk公司），水為純凈水。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱：Symmetry C18柱（250 mm × 4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈－0．1%磷酸水溶液(45∶55)；檢測波長：230 nm；流速：1 mL ／min；柱溫：25 ℃；進樣量：20 μL。

2．2 溶液制備

取消癌平注射液，用微孔濾膜（0．45 μm）濾過，離心（12 000 r／min）10 min，取上清液作為供試品溶液。取通關藤苷G對照品13．4 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得通關藤苷G質量濃度為1．34 g／L 的對照品溶液。

2．3 方法學考察

專屬性考察：取對照品溶液適量，用甲醇稀釋，得質量濃度為67 μg／mL的對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液（甲醇）各20 μL，進樣測定。結果顯示，陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

標準曲線繪制：精密量取對照品溶液，用甲醇稀釋成質量濃度為 4，6，8，10，20，40，60，80 μg ／mL 的系列溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以色譜峰面積（Y）為縱坐標、待測物質量濃度（X）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝5×106X－6 011．7（r＝0．999 4）。結果表明，通關藤苷 G質量濃度在 4～80 μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取對照品溶液適量，制備成通關藤苷G低、中、高質量濃度（20．1，33．5，40．2 μg ／mL）的對照品溶液，分別重復進樣6次，記錄峰面積。結果低、中、高質量濃度對照品溶液的 RSD分別為1．36%，1．79%和2．11%（n ＝6），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12 h時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果的RSD為2．05%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內穩定。

重復性試驗：取同一批（批號為201603021）樣品6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定。結果的 RSD為1．42%（n＝6），表明方法重復性良好。

耐用性試驗：取同一批（批號為201603021）樣品，改變流動相中磷酸含量（分別為 0．05%，0．1%，0．15%）后進行測定，結果的 RSD 為 1．83% （n＝6）；改變柱溫（分別為20℃，25℃，30℃）后進行測定，結果的RSD為 1．32%（n＝6）；按擬訂色譜條件，分別用色譜柱 Symmetry C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm），Kromisil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm），Phenome－nex Gemini C18柱(250 mm × 4．6 mm，5 μm)進行測定，結果的 RSD為1．78%（n＝6）。結果表明該方法試驗耐用性良好。

加樣回收試驗：取供試品溶液適量，共9份，分別加入同體積低、中、高質量濃度（6．7，10．1，13．4 μg ／mL）對照品溶液，分別精密吸取混合溶液20 μL，注入色譜儀，測定，以峰面積計算回收率。結果見表1。

2．4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定峰面積，計算含量。結果3批（批號分別為201603111，201603021，201604191）樣品通關藤苷 G 含量分別為 9．98，10．02，10．07 μg ／mL。

表1 通關藤苷G加樣回收試驗結果(n＝9)

3 討論

經全波長掃描，通關藤苷G的最大吸收波長為230 nm，因此確定230 nm為檢測波長。流動相篩選發現，以乙腈－水（45∶55）等度洗脫時，對照品溶液中通關藤苷G出峰較好，但供試品溶液中的通關藤苷G與相鄰色譜峰分離度較差；以乙腈－0．1%磷酸水溶液（45∶55）為流動相時，通關藤苷G色譜峰與相鄰峰分離好（分離度大于1．5），故最終選定等度洗脫。

消癌平注射液含有甾體皂苷、酚酸、萜類、多糖等多種成分[6]，C21甾體皂苷是其主要活性成分[7]。目前，從通關藤藥材中提取分離出的C21甾體皂苷達50多種[8]，C21甾體皂苷是一類苷元為孕甾烷衍生物與2－去氧糖等形成的苷，廣泛分布于龍膽科、薯蕷科、毛茛科、夾竹桃科、蘿 科等植物。通關藤苷G在通關藤藥材中有一定含量，但在消癌平注射液中的含量需要建立可行的方法測定才能明確，結合預試驗結果，最終選擇通關藤苷G作為消癌平注射液含量測定的指標成分。

[1]李邇娜，王 芳，欽 松，等．消癌平注射液抗腫瘤作用機制研究進展[J]．中國中醫藥信息雜志，2012，19(9)：111 －112．

[2]謝麗艷．消癌平注射液藥物相互作用研究[D]．南京：南京中醫藥大學，2013．

[3]曾慶花．消癌平注射液的藥代動力學及相互作用研究[D]．上海：第二軍醫大學，2013．

[4]朱 紅，劉峰群．醫院13例消癌平注射液不良反應報告分析[J]．中國藥業，2015，24(17)：69 － 70．

[5]錢 軍，華海濤，秦叔逵．通關藤制劑抗腫瘤作用研究進展[J]．中國中藥雜志，2009，34(1)：11 － 13．

[6]韓 麗，張 慧，康廷國，等．中藥通關藤的研究進展[J]．中華中醫藥學刊，2016，34(10)：2329 －2331．

[7]謝麗艷，居文政，周 玲，等．通關藤及其制劑的藥理作用和臨床應用進展[J]．現代藥物與臨床，2011，26(6)：439 －443．

[8]方奕奇，孫雪梅．通關藤化學成分及抗腫瘤作用的研究進展[J]．中國生化藥物雜志，2011，32(2)：165 －167．