趨化因子GRO-a在宮頸癌中的表達(dá)及意義

張隆英 葉永志 陳豪

宮頸癌是全球婦女僅次于乳腺癌的惡性腫瘤，在一些發(fā)展中國家其發(fā)病率居第1位［1］。我國每年新增宮頸癌病例＞11萬，嚴(yán)重威脅女性的生命安全［2］。趨化因子是一類在生理條件下發(fā)揮重要作用的蛋白質(zhì)，負(fù)責(zé)細(xì)胞骨架的重構(gòu)、細(xì)胞遷移，參與免疫反應(yīng)等，近年研究表明較多趨化因子還參與癌癥的發(fā)生與惡化。其在腫瘤的生長、轉(zhuǎn)化、局部浸潤與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為中可能起重要作用［3-4］。趨化因子中生長相關(guān)癌基因（growth-related oncogene，GRO）表達(dá)與多種癌組織，如胃癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤等存在相關(guān)性，但與宮頸癌的關(guān)系目前尚不清楚。作者通過檢測手術(shù)后宮頸癌組織GRO-a的表達(dá)，探討其與宮頸癌的相關(guān)性，為臨床靶向治療宮頸癌提供依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2012年1月至2016年1月臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院宮頸癌患者23例，年齡28～75歲，平均年齡（48.45±12.57）歲。術(shù)后均經(jīng)病理檢查確診。隨機抽取慢性宮頸炎［年齡21～69歲，平均年齡（47.12±11.69）歲］及宮頸上皮內(nèi)瘤變［年齡23～61歲，平均年齡（45.12±12.21）歲］患者活檢組織各40例作為對照。三組患者年齡差異比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《中華婦產(chǎn)科學(xué)》中關(guān)于慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的臨床表現(xiàn)及實驗室影像學(xué)檢查。（2）原發(fā)宮頸病變。（3）影像學(xué)資料齊全。（4）術(shù)前未行放化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）宮頸轉(zhuǎn)移性腫瘤。（2）影像學(xué)資料不全。（3）有明顯手術(shù)禁忌證。

1.2 方法 多克隆兔抗人GRO-a抗體，購自Biomedical Technologies公司，即用型SP試劑盒（PV-6000）購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化方法：采用SP法測定GRO-a的表達(dá)。主要步驟包括標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋切片，二甲苯脫蠟梯度酒精水化，3%過氧化氫滅活，抗原修復(fù)，兔血清液封閉，滴加Ⅰ抗、Ⅱ抗及鏈霉素抗生素蛋白-過氧化物酶復(fù)合物，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水封片。PBS代替Ⅰ抗進(jìn)行陰性對照。抗體稀釋濃度為1：50。

1.3 結(jié)果判定 光鏡下觀察細(xì)胞著色情況。陽性細(xì)胞的胞漿呈棕色或棕黃色，每張切片隨機觀察5個視野（×200），取其平均值為每張切片的觀察結(jié)果。按陽性細(xì)胞所占比例判定結(jié)果分析。陰性（-）：陽性細(xì)胞＜5%；弱陽性（+）：陽性細(xì)胞數(shù)5%～24%；陽性（++），陽性細(xì)胞數(shù)為25%～50%；強陽性（+++）：陽性細(xì)胞數(shù)＞50%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件。計量資料用（x±s）表示，組間比較用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

免疫組化結(jié)果顯示陽性細(xì)胞的胞漿呈棕黃色。GRO-a主要表達(dá)在宮頸癌組織和正常宮頸上皮組織的胞漿內(nèi)。三組GRO-a蛋白的陽性率1次為（73.91%，45.00%，30.00%），三組陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=13.13，P＜0.05）。宮頸癌與上皮內(nèi)瘤變比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=15.2，P＜0.05）；宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸炎比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=2.01，P＞0.05）。見表1。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者GRO-a蛋白的表達(dá)陽性率也高于無轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.05，P＜0.05）。見表 2。

表1 GRO-a蛋白在病變宮頸組織中的比較

表2 伴或不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌中GRO-a 蛋白的比較

3 討論

趨化因子是對免疫細(xì)胞具有趨化作用的細(xì)胞因子，其分子量一般為8～10kD，氨基酸序列有20%～50%的同源性。幾乎所有的趨化因子都含有兩對相對保守的半胱氨酸殘基形成的分子內(nèi)二硫鍵，根據(jù)靠近N端的一對半胱氨酸殘基的排列順序?qū)②吇蜃臃譃镃X3C、CXC、CC、XC四個亞家族，GRO-a屬于CXC類［5］。GRO蛋白的受體為CXCR2，為鳥苷酸結(jié)合蛋白（guanylate binding protein，簡稱G蛋白）偶聯(lián)受體。其是僅含一條肽鏈的糖蛋白，其N端在細(xì)胞外側(cè)，C端在細(xì)胞內(nèi)，中段形成七個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)［6］。GRO-a早期被發(fā)現(xiàn)主要趨化中性粒細(xì)胞至炎癥部位參與免疫反應(yīng)，近年來發(fā)現(xiàn)其對腫瘤的增殖與遷移起一定的作用，可能成為治療腫瘤的靶點。

惡性腫瘤的本質(zhì)是克隆性增殖和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，趨化因子可能起著重要的作用。當(dāng)GRO-a與CXCR2結(jié)合后，激發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)轉(zhuǎn)而參與細(xì)胞的多種生物學(xué)過程，包括促進(jìn)立早基因的表達(dá)，引起細(xì)胞的持續(xù)增生［7］。Owen等［8］發(fā)現(xiàn)黑色素瘤中 GRO-a，GRO-β，GRO-γ持續(xù)高表達(dá)，在體外應(yīng)用抗GRO-a或抗CXCR2抗體可以抑制黑色素瘤的生長。Folkman［9］研究表明，GRO-a是潛在的血管生成因子，可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞的趨向性，促進(jìn)腫瘤新生血管生長。Haghnegahdar［10］報道，GRO-a可通過自分泌或旁分泌促進(jìn)腫瘤血管的形成而推動腫瘤的生長。Muller等［11］研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的轉(zhuǎn)移是在趨化因子引導(dǎo)下的一個有序、分步驟進(jìn)行的過程。首先，癌變組織克隆性增生，侵入局部組織，并誘導(dǎo)血管形成，同時在其表面表達(dá)相應(yīng)受體；繼之，癌細(xì)胞與原發(fā)瘤分離，通過血液或淋巴系統(tǒng)，定植與能產(chǎn)生高水平配體的器官，受體與配體結(jié)合，侵入遠(yuǎn)處組織，形成轉(zhuǎn)移性腫瘤。

本資料結(jié)果顯示，宮頸癌組織中GRO-a蛋白表達(dá)陽性率顯著高于宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤變的組織，這提示隨著腫瘤細(xì)胞的形成，GRO-a蛋白表達(dá)增強，這也提示GRO-a可能參與宮頸癌的進(jìn)程。本資料中，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者GRO-a蛋白的表達(dá)陽性率高于無轉(zhuǎn)移組，這也提示GRO-a蛋白的高表達(dá)可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移也有一定的關(guān)系。

綜上所述，宮頸癌組織中GRO-a蛋白表達(dá)水平增加，其可能參與宮頸癌組織生物進(jìn)程，故針對GRO-a的免疫治療有一定的價值，值得進(jìn)一步研究。

［1］ 曹澤毅,翁梨駒,郎景和,等.中華婦產(chǎn)科學(xué). 第二版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:2012-2020.

［2］ 應(yīng)倩,夏慶民,鄭榮壽,等.中國2009年宮頸癌發(fā)病與死亡分析.中國腫瘤,2013,22(8):612-616.

［3］ De Filippo K, Dudeck A, Hasenberg M, et al. Mast cell and macrophage chemokines cxcl1/cxcl2 control the early stage of neutrophil recruitment during tissue inflammation.Blood, 2013,121(24): 4930-4937.

［4］ Maeda A,Bandow K,Kusuyama J,et al.Induction of cxcl2 and ccl2 by pressure force requires il-1 beta-myd88 axis in osteoblasts.Bone,2015,74(7):76-82.

［5］ 高曉明.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)基礎(chǔ).第一版.北京:北京醫(yī)科大學(xué)出版社,2001:168-173.

［6］ Lee HJ,Song IC,Yun HJ,et al.Cxc chemokines and chemokine receptors in gastric cancer:From basic findings towards therapeutic targeting.Word J Gastroenterol,2014,20(7):1681-1693.

［7］ 劉石,王鑫,徐秀玉.生長相關(guān)癌基因-1在喉癌中的表達(dá)及其與VEGF的相關(guān)性.臨床耳鼻咽喉科雜志,2006,20(6):541-544.

［8］ Owen JD,Serieter R,Burdick M,et al.Enhanced tumor forming capacity for immortalized melanocytes expressing melanoma growth stimulatory activity/growth-regulated cytokine beta and gamma proteins. Int J Cancer,1997,73(1):94-103.

［9］ Folkman J.What is the evidence that tumor are angiogenesis dependent.J Natl Cancer Inst,1990,82(1):4-6.

［10］ Haghnegahdar H. The tumorigenic and angiogenic effects of MGSA/GRO proteins in melanoma. J Leukoc Biol,2000,67(1):53-62.

［11］ Muller YA,Christinger HW,Keyt BA,et al.The crystal structure of vascular endothelial growth factor(VEGF)refined to 1.93 A resolution:multiple copy flexibility and receptor binding.Structer,1997,5(10):1325-1328.