HR-HPV E6/E7 mRNA聯合TCT檢查在宮頸病變篩查中的應用

農昌芬 金敏 張興翔 王敏

宮頸癌（SCC）是常見的婦科惡性腫瘤之一，全世界每年約50萬新發病例，占所有婦科癌癥的10%，且其發病有年輕化趨勢［1-3］。從宮頸上皮內瘤變（CIN）發展為SCC是一個連續的過程，所需時間較長，一般在10～15年。因此，進行高效篩查、早期發現病變、及時明確診斷并進行合理的治療和隨訪管理是防治宮頸癌的關鍵步驟［4-5］。人乳頭瘤病毒（HPV）感染與SCC的發病有密切關系。目前，篩查宮頸癌的方法有液基細胞學（TCT）和HPV DNA，TCT特異性高，但陽性率較低，易漏診；HR-HPV DNA陽性率高，但特異性較低［6-7］。近年來，新的檢查技術HR-HPV E6/E7mRNA的應用同時兼顧敏感度和特異度，與病理活檢符合程度高，現報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2014 年1月至2016 年12月因宮頸疾病就診的患者430 例，年齡21～79 歲，平均年齡（43.0±15.5）歲。所有患者行宮頸 TCT、HR-HPV E6/E7mRNA 、HR-HPV DNA和陰道鏡下活檢組織病理學檢查。

1.2 方法 （1）HR-HPV DNA 檢測：標本試管中加入1 ml無菌生理鹽水洗脫標本，吸取液體轉至1.5 ml離心管中，12000r/min離心5min，棄上清液取沉淀加入50 ml核酸提取液，混勻后2000r/min離心10s，100℃水浴10min，12000r/min離心10min，上清液中加入試劑上機檢測。（2）HR-HPV E6/E7 mRNA檢測：轉移前混勻 Thinprep 細胞保存液瓶，開蓋取出1ml至相應的樣本轉移試劑管中，加入檢測試劑，通過靶標捕獲、轉錄介導的等溫擴增法（TMA）進行的靶標擴增、通過雜交保護反應（HPA）檢測擴增產物（擴增子），檢測 14 種高危型別包括 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66 和 68 型。

1.3 統計學方法 采用SPSS 14.0統計軟件。計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA陽性患者各組間陽性率比較 CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和SCC組HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA陽性率均顯著高于炎癥組，CINⅡ、CINⅢ和SCC陽性率顯著高于CINⅠ（P＜0.05）；炎癥組HR-HPV DNA陽性率顯著高于 HR-HPV E6/E7 mRNA（P＜0.05）（見表 1）。

表1 HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA陽性患者病理活檢結果［n（%）］

2.2 HR-HPV E6/E7 mRNA和HR-HPV DNA敏 感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值和約登指數比較 HR-HPV E6/E7 mRNA特異度和陽性預測值顯著高于HR-HPV DNA（P＜0.05）見表2。

表2 HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA對宮頸病變診斷評價

2.3 HR-HPV E6/E7 mRNA、TCT單獨和聯合檢測的意義 聯合檢測陽性檢出率顯著高于單獨檢測（P＜0.05）見表 3。

表3 單獨使用HPV E6/E7 mRNA、TCT檢測與聯合檢測的比較

3 討論

宮頸癌是所有癌癥中目前唯一明確病因的癌癥，其主要原因為HPV的持續感染［8］。但大部分女性感染HPV病毒后通過自身免疫調節功能將其清除，且HPV感染至發生癌前病變和頸宮癌是一個漫長的過程，僅極少部分HR-HPV感染會引起宮頸病變［9-11］。

E6蛋白含151個氨基酸，與抑癌基因p53蛋白和細胞內的E6相關蛋白（E6AP）結合，導致突變增加、DNA的完整性受損；E7癌基因在宮頸癌發生中主要起轉化作用，E6、E7聯合作用可使有絲分裂紡錘體形成缺陷和中心體數目異常，導致染色體異常基因不完整以及多倍體細胞的出現，促使細胞惡變和腫瘤的發生［12-14］。Johansson H［15］等對 HR-HPV DNA 陽性，TCT為無明確診斷意義的不典型鱗狀上皮細胞（ASCUS）或低度鱗狀細胞上皮內病變（LSIL）的患者進行4-5年的隨訪后發現，ASCUS患者HPV E6/E7 mRNA表達率90.0%，LSIL患者為95.4%，HPV E6/E7 mRNA陰性婦女進展為CINⅡ～Ⅲ的風險低。Duvlis S等［16］通過對413例婦女的HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA和細胞病理學進行檢測，發現CINⅡ+婦女，HPV E6/E7 mRNA的特異性和陽性預測值均明顯高于HPV DNA。

本資料結果顯示，HR-HPV DNA總陽性率為49.30%，HR-HPV E6/E7 mRNA總陽性率為33.49%。隨著病理級別的升高，HR-HPV E6/E7mRNA 和HRHPV DNA陽性率均呈現趨勢性升高，CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 和 SCC組HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA陽性率均顯著高于炎癥組，CINⅡ、CINⅢ和SCC陽性率顯著高于CINⅠ（P＜0.05），但CINⅡ+組間陽性率差異無統計學意義（P＞0.05）。從相同組患者比較HR-HPV E6/E7 mRNA和HR-HPV DNA陽性檢出率，只有炎癥組HR-HPV DNA陽性率顯著高于HR-HPV E6/E7 mRNA（P＜0.05），CINⅠ+組HRHPV DNA和HR-HPV E6/E7 mRNA陽性檢出率差異無統計學意義（P＞0.05）。HR-HPV E6/E7 mRNA 和 HRHPV DNA敏感度分別為66.67%和73.81%，陰性預測值分別為80.42%和79.82%，兩者對宮頸病變診斷差異無統計學意義（P＞0.05）；特異度分別為87.79%和66.41%，陽性預測值分別為77.78%和58.49%，對宮頸病變診斷差異有統計學意義（P＜0.05）。HR-HPV E6/E7 mRNA單獨檢測陽性率為66.67%，TCT單獨檢測陽性率為79.76%，兩者聯合檢測則達到90.48%，聯合檢測陽性檢出率顯著高于單獨檢測（P＜0.05）。

總之，HR-HPV DNA檢測對宮頸病變的風險預測過早，而HR-HPV E6/E7 mRNA的表達是導致宮頸細胞惡性轉化并發展至宮頸癌的必要過程，相對于HRHPV DNA檢測，HR-HPV E6/E7 mRNA檢測能夠更精確預測細胞向高度病變和癌癥轉變的可能性。HRHPV E6/E7 mRNA和TCT聯合檢測能提高陽性檢出率，防止漏診。

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