苗藥三兩銀的生物堿成分研究

霍少杰 吳繼春 杜 江

貴陽中醫學院藥學院/貴州省苗醫藥重點實驗室,貴州 貴陽 550025

羽脈野扇花(LindlSarcococcahookeriana.)為黃楊科(Buxaceae)野扇花屬植物，常綠灌木。本屬約有20種，分布于亞洲東部和南部，我國已知有8種及幾個變種[1]，是傳統的民族民間用藥。羽脈野扇花和野扇花(S. ruscifolia Stap)同為貴州苗族民間習用藥材，常混用，又名三兩銀、三兩金、羊不食等，用于治療胃潰瘍、胃痛、腹瀉、發熱、咽喉痛、跌打損傷、腦憨癥等疾病[2-3]。野扇花屬植物的化學成分研究始于上世紀60年代，從中發現大量孕甾烷生物堿，以及三萜、甾體、糖苷等類型化合物。迄今已從該屬植物中分離得到100余個孕甾烷生物堿[4]，它們中的大多數化合物因具有明顯的膽堿酯酶抑制活性而受到各國學者的廣泛關注[5-9]，有望從中發現新的治療阿爾茨海默病的先導化合物。從羽脈野扇花中還分離到一系列具有抗利什曼蟲[10-12]、抗瘧原蟲[9]、抗菌[11-12]、細胞毒[13-14]、抗炎[15]、免疫抑制[16]及促雌激素生成[17]等活性的成分。本課題組前期對野扇花和羽脈野扇花中的化學成分進行了初步研究，并對研究成果做了相關的文獻報道[18,19]。為了深入研究該屬植物的活性成分，課題組繼續對黔產羽脈野扇花的生物堿成分進行了分離研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 JEOL ECX-400導核磁共振譜儀(日本電子株式會社)；R-215型旋轉蒸發儀(瑞士步琦)；ZF-2型紫外光譜儀(上海安亭電子儀器廠)；RE-5210旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-DⅢ型多用真空泵(鄭州華儀器有限責任公司)；SK8210HP超聲儀(上海科導超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 層析硅膠：(200-300目、300-400目)青島海洋化工有限公司；顯色劑：改良碘化鉍甲試劑；其它試劑均為國產分析純。

實驗藥材于2015年7月采于貴州省赫章縣韭菜坪，由貴陽中醫學院趙能武教授鑒定為羽脈野扇花(BaillSarcococcahookeriana.)。

2 提取分離

羽脈野扇花根莖(14.5 kg)自然干燥后粉碎，用95%甲醇超聲提取四次，提取液減壓回收溶劑，濃縮后得總提取物。總提取物用1% H2SO4溶液調pH到1，乙酸乙酯萃取除去脂溶性雜質，剩余酸水液用飽和Na2CO3溶液調pH至9，二氯甲烷萃取得總生物堿156 g。總生物堿進行硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇(100∶0→5∶1)梯度洗脫，薄層層析檢測，分為A-E五個部分。A部分進行硅膠柱層析，石油醚-二氯甲烷-二乙胺(100∶1∶1→5∶1∶1)梯度洗脫，分為A1-A5五個部分。A1部分通過反復硅膠柱層析(分別以石油醚-二氯甲烷-二乙胺和二氯甲烷-甲醇為洗脫系統)得化合物1(188 mg)和2(76 mg)。B部分進行硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇(100∶1→10∶1)梯度洗脫，分為B1-B3三個部分。B3部分通過反復硅膠柱層析(分別以石油醚-二氯甲烷-二乙胺和二氯甲烷-甲醇為洗脫系統)得化合物3(46 mg)。

3 結構鑒定

化合物1白色細針狀晶體，易溶于氯仿，改良碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色。1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 5.36 (m, 1H, H-6), 3.36 (s, 3H, OCH3), 3.07 (tt,J= 11.3, 4.5 Hz, 1H, H-3), 2.17 (s, 3H, NMe2), 1.00 (s, 3H, H-19), 0.88 (d,J= 6.4 Hz, 3H, H-21), 0.68 (s, 3H, H-18).13C NMR (CDCl3, 100MHz) δ: 140.8 (C-5), 121.6 (C-6), 80.3 (C-3), 61.1 (C-20), 56.9 (C-14), 55.6 (OMe), 54.7 (C-17), 50.1 (C-9), 41.4 (C-13), 39.9 (NMe2), 39.5 (C-12), 38.6 (C-4), 37.2 (C-1), 36.9 (C-10), 31.9 (C-8), 31.8 (C-7), 28.0 (C-2), 27.7 (C-16), 24.1 (C-15), 21.1 (C-11), 19.4 (C-19), 12.1 (C-18), 9.8 (C-21)。以上數據與文獻[20]報道的NMR數據基本一致，故鑒定化合物1為Pachyaximine (A)。

化合物2 無色細針狀晶體，易溶于氯仿，改良碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色。1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ:5.35 (m, 1H, H-6), 3.61 (s, 1H,H-16), 3.35 (s, 3H,OMe),3.06 (tt,J= 11.3, 4.5 Hz, 1H,H-3),2.89 (d,J= 6.4 Hz, 1H,H-20), 2.28 (s, 6H,NMe2),1.01 (s, 3H,H-19), 0.91 (s, 3H,H-18),1.17 (d,J=6.7 Hz, 3H, H-21).13C-NMR (CDCl3, 100MHz) δ:141.1(C-5), 121.4(C-6), 80.3(C-3), 73.6(C-17), 61.1(C-16), 56.0(C-20), 55.8(OMe), 50.5(C-9), 45.6(C-14), 43.2(NMe2), 42.1(C-13), 38.8(C-4), 37.2(C-10), 37.2(C-1), 32.9(C-12), 31.7(C-7), 30.4(C-8), 28.1(C-2), 27.4(C-15), 20.8(C-11), 19.5(C-19), 15.8(C-18), 13.6(C-21)。以上數據與文獻[17]報道的NMR數據基本一致，故鑒定化合物2為(20S)-20-(N,N-dimethylamino)-16α,17α-epoxy-3β-methoxy-pregn-5-ene。

化合物3白色細針狀晶體易溶于氯仿，改良碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ: 5.62 (d,J=8.9 Hz, 1H,NH),5.50(s,1H,H-2′),5.26(t,J=2.8Hz,1H,H-4),5.11(d,J=3.6Hz,1H,H-2),4.32(dt,J=8.4,4.0Hz,1H,H-3),2.46(t,J=8.6Hz,1H),2.10(s,3H,MeCO),2.08(s,3H,MeCO),1.12(s,3H,H-19),0.89(d,J=6.5Hz,3H,H-21),0.63(s,3H,H-18).13C-NMR (CDCl3,100MHz)δ:170.7(MeCO), 170.5(MeCO), 166.1(C-1′), 152.2(C-3′), 118.1(C-2′), 74.2(C-4), 72.0(C-2), 61.4(C-20), 56.4 (C-9), 55.7(C-17), 49.3(C-3), 48.8(C-5), 41.8(C-13), 40.9(C-1), 39.9(NMe2), 39.6(C-12), 34.9(C-8), 34.8(C-10), 31.8(C-7), 27.7(C-16), 27.3(C-6), 25.2(C-15), 24.1(C-5′), 21.5(C-11), 21.2(MeCO), 20.7(MeCO), 20.0(C-4′), 15.4(C-19), 12.4(C-18),10.1(C-21)。以上數據與文獻[21]報道的NMR數據基本一致，故鑒定化合物3為(2α,3β,4β,20S)-2,4-bis(acetoxy)-20-(N,N-dimethylamino)-3-[(3-methylbut-2-enoyl)amino]-5α-pregnane。

4 討論

野扇花屬植物在貴州省資源豐富，民間使用廣泛，國外學者從該屬植物中分離出大量的孕甾烷生物堿，然而關于該屬植物的化學成分研究，國內報道較少。本實驗從黔產苗藥三兩銀中分離鑒定了3個孕甾烷生物堿，分別為Pachyaximine (A) (1)、(20S)-20-(N,N-dimethylamino)-16α,17α-epoxy-3β- methoxy-pregn-5-ene (2)、(2α,3β,4β,20S)-2,4-bis(acetoxy)-20-(N,N-dimethylamino)-3-[(3-methylbut-2-enoyl)amino]-5α-pregnane (3)，化合物結構見圖1。3個化合物均為首次從該植物中分離得到。

苗族人民在長期與疾病斗爭的過程中形成了獨特的診療體系，在治療外傷和一些地方性多發病方面往往有獨到的效果。課題組在民間調研時發現野扇花屬植物在苗族民間廣泛應用于治療胃腸潰瘍、腦憨癥等疾病。結合三兩銀在民間醫藥中的應用，本實驗對其進行系統的化學成分和生物活性研究,為合理開發苗藥三兩銀的藥用價值提供理論基礎。

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