膠原蛋白酶解制備肽工藝研究進展

張崟，郭思亞，熊偉，向鵬妍，吳婷，孟婧，張婷

(成都大學肉類加工四川省重點實驗室，成都 610106)

畜禽及水產品加工副產物，如畜禽骨、畜禽皮、魚皮、魚鱗、魚頭、魚骨、魚鰭等，其中含有豐富的膠原蛋白。由于膠原蛋白中甘氨酸、脯氨酸和羥脯氨酸的含量較高，所以常用其制備氨基酸或作為補充甘氨酸、脯氨酸和羥脯氨酸的蛋白質原料。近年來，有關膠原蛋白功能性的最新研究結果發現，膠原蛋白水解所得的膠原肽，不僅表現出很好的可消化性，而且還具有保護胃黏膜、抗氧化、抗潰瘍、抗衰老、抗過敏、降血壓、促進軟骨再生、促進角膜上皮細胞的修復和生長，促進皮膚膠原代謝、免疫調節等諸多獨特的生理活性[1-3]。因此，水解膠原蛋白制備肽的工藝及膠原肽的功能性研究越來越多地受到國內外科研機構的重視。

目前，常用的制備膠原肽的方法主要有酸法、堿法和酶法[4,5]。酸法和堿法均采用化學試劑促使膠原蛋白分解產生小分子肽。這兩種水解方法不僅過程難以控制，而且反應比較強烈，會造成氨基酸變性，產生有毒物質等不利結果[6]。因此，使用可替代化學法的酶法水解膠原蛋白技術日益受到重視。酶法水解膠原蛋白不僅反應條件溫和，具有較高的回收率，而且水解反應速率快，對環境污染較小，所得膠原肽較酸法和堿法更安全。因此，被廣泛應用于功能性食品、化妝品及其他產品開發[7]。為了更好地促進酶法水解膠原制備肽工藝改進和對酶解肽功能性的研究，本文對近年來有關酶法水解膠原蛋白制備肽的工藝進行了對比分析。

1 膠原蛋白概述

膠原蛋白又名膠原質，是一種白色、不透明、無支鏈的纖維狀結構蛋白質。膠原分子有著典型的長且堅韌的三螺旋結構，由2條α1肽鏈和1條α2肽鏈組成。3條α肽鏈交互纏繞形成繩索狀的超螺旋結構。每條肽鏈的序列為連續重復的Gly-X-Y(X為脯氨酸，Y為羥脯氨酸或羥賴氨酸)[8]。

2 酶解膠原肽的功能性及用途

膠原蛋白獨特的三股超螺旋結構使其具有十分穩定的化學性質，微弱的酸很難使其分解。因此膠原蛋白難以被人體直接消化利用。但是，將膠原蛋白水解，形成分子量較小的膠原多肽后，可顯著提高其生物利用性，更有利于被人體吸收和利用[9]。酶法水解膠原蛋白制備膠原肽的原理是通過蛋白酶，如膠原酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶等對其進行水解，得到多肽[10]。

常見的酶解膠原蛋白制備膠原肽的反應條件、所得肽的功能性及用途見表1。酶解膠原蛋白所得肽具有抗氧化、ACE抑制、抗菌活性，其主要用途包括清除自由基、防止脂質過氧化、降血壓及抗菌?？蓪⒚附饽z原肽添加到點心、乳制品及其他食品中，改善食品的營養價值[11]。還有將膠原蛋白肽添加于飲料中，制作體能恢復性飲料的報道。近年來，酶解膠原蛋白制備膠原肽的研究已全面展開，而且隨著國內外對膠原蛋白肽研究的不斷深入，膠原肽的功能性及其利用價值將會被更多地發掘。

表1 酶解膠原蛋白的產物特性及其用途Table 1 Characteristics and applications of enzymatic hydrolysates of collagen

注：ACE指血管緊張素轉換酶(angiotensin-converting enzyme)。

3 酶解膠原蛋白工藝分類

膠原蛋白的來源及其類型不同，其中的氨基酸構成及多肽的種類會出現差異。在采用酶法水解膠原蛋白時，酶的選擇和酶解工藝對膠原肽的制備有重要影響。通過分析近年來國內外膠原蛋白的酶解工藝發現，目前酶解膠原蛋白的工藝主要分為單酶水解和多酶水解兩種方法，其中多酶水解法又分為混合酶水解法或分步酶水解法。酶解膠原蛋白的工藝選取通常應考慮要開發的產品對肽分子量的要求。如果欲得到分子量較小的膠原多肽，一般采用多酶水解法，反之則采用單酶水解法[24]。

3.1 單酶水解法

在單酶水解膠原蛋白工藝建立上，國內外研究人員多在單因素實驗基礎上，采用正交實驗或響應面法設計實驗方案，然后建立最優的酶解工藝[25-27]。采用單酶水解膠原蛋白的酶解工藝及酶解效果比較見表2。

表2 單酶酶解膠原蛋白工藝比較Table 2 Comparison of enzymatic hydrolysis of collagen protein with one proteinase

續 表

由表2可知，在原料方面，涉及的畜禽加工副產物包括畜禽骨、皮；水產加工副產物包括鱗、皮、肉及骨，其中畜禽加工副產物中酶解骨膠原制備肽的工藝較多；在水產品加工副產物方面，水解魚鱗膠原的報道較多。

在酶的來源方面，以外加蛋白酶居多，其次是采用內源性蛋白酶水解膠原制備肽。酶用量、酶解溫度、酶解時間及pH對酶解效果影響大，以魚鱗為例，采用菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶水解，兩者的水解度差異近2倍。

畜禽骨的水解度在1.613%～32.46%變化。在水產加工副產物方面，可能受原料和酶解條件的共同影響，水解度的變化較大，在1.46%～36.2%變化，其中羅非魚下腳料的水解度最高。在水解產物功能性方面，單酶水解效果多采用水解度評價水解效果，其次是膠原蛋白提取率、自由基清除率及ACE抑制活性。

3.2 混合酶水解法

由于酶的專一性，采用單酶水解膠原蛋白時，只能分解其中一些具有特定結構的肽鍵。因此，底物結構對單酶水解效果影響較大。隨著水解時間增加，水解度不會再增加，而且水解程度受限，所得膠原肽的分子量一般較大。為了避免單酶水解的這一缺陷，近年來出現了采用多種酶混合法對膠原蛋白進行水解的報道(見表3)。多種蛋白酶的混合，可以發揮不同酶的水解特性，優勢互補，實現對膠原蛋白的多位點分解。因此，所得酶解產物的水解度較高，有利于提高底物轉化率，縮短水解時間[64]。多酶水解還可以減少因為單酶水解不徹底，造成疏水性氨基酸含量較高而引起酶解液苦味較重[65]、酶解液風味不足、腥味較重等不利結果[66,67]。

表3 混合酶水解膠原蛋白工藝Table 3 Comparison of enzymatic hydrolysis of collagen protein with poly-proteinase

由表3可知，在原料方面，混合酶解用到的畜禽副產物包括豬骨、雞骨及雞皮、豬皮，水產品加工副產物方面有魚皮及魚鱗。在酶的混合方式方面，以雙酶酶解居多，其次是三酶水解，尚未見有4種或更多酶復合酶解的報道。比較表2和表3中豬皮的水解度可知，多酶酶解使豬皮的水解度提高了近1倍，由單酶水解度9.55%到雙酶水解度17.7%。在酶解效果評價方面，目前報道的文獻主要有水解度和肽回收率對酶解效果進行評價，未見對酶解肽的功能性評價。

3.3 分步酶水解法

蛋白酶按作用位點可分為內切酶和外切酶。內切酶的種類主要有胃蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶；外切酶主要有菠蘿蛋白酶、風味蛋白酶、動物蛋白水解酶。內切酶從肽鏈內部將多肽水解成小片斷，外切酶作用于肽鏈末端的肽鍵，逐個將氨基酸水解下來。在混合酶水解膠原蛋白基礎上，應用復合酶分步水解，在酶解第一階段先使用內切酶，使蛋白質顆粒水解成肽片段，第二階段再使用肽鏈外切酶進一步水解，減小肽鏈的長度，降低水解液中的疏水氨基酸的比率，進一步提高水解度和改善風味[76,77]。分步復合酶水解膠原蛋白，能克服單一酶解反應中酶解程度受限，混合酶水解時可能會出現酶相互抑制的問題。分步酶解的缺點是工藝復雜，酶解效果還要根據相應指標如水解度、酶解物風味及抗氧化性等來確定。近年來報道的分步酶水解膠原蛋白工藝比較見表4。

表4 分步酶水解膠原蛋白工藝Table 4 Comparison of enzymatic hydrolysis of collagen protein with proteinase step by step

由表4可知，在原料方面，分步酶解采用的畜禽副產物原料有畜禽皮和骨，水產副產物方面主要是骨和皮。分步酶解采用的酶多為雙酶，其次是三酶水解，尚未見有4種或更多酶分步酶解的報道。在酶解效果方面，涉及的評價指標包括水解度、自由基清除率、鈣離子螯合率及ACE抑制活性。比較表2和表3發現，分步酶解涉及的原料還比較少。因此，未來可在酶分步水解方面做更多探索。

4 膠原蛋白酶解過程存在的問題

盡管目前國內外已經對膠原蛋白的酶解工藝開展了較為廣泛的研究，但是目前尚存在的問題：(1)酶解效率不高。因膠原蛋白的天然硬質結構，導致酶解效率低，產物的回收率不高的現象較普遍。以水解度為例，單酶水解度最高的尚達不到50%，但導致問題的機理尚不清楚。(2)原料的一致性有待改進。畜禽及水產品加工副產物的差異，導致酶解制備膠原肽的原料一致性難以保障。原料的一致性會引起后續實驗的可重復性和實驗結果的穩定性。(3)酶的種類與水解效果缺乏統一。從本文中的酶解膠原文獻可以發現，酶解時使用的原料較廣泛，采用的酶種類也較多，尚缺乏酶的種類和原料酶解效果的統一，這直接導致工業化應用時缺乏依據。

5 結論

我國是畜禽和水產品生產大國，每年產生的畜禽及水產品副產物量大，如何將這些副產物高附加值利用，減少資源浪費和環境污染，是直接影響我國畜禽及水產品產業發展的關鍵制約因素。目前國內外已經在畜禽及水產品副產物利用萬面開展了一些探索。隨著我國的環境保護要求越來越高，節能、綠色、環保的新技術在畜禽及水產品加工副產物回收利用中的應用將越來越受到重視。本文對近年來有關低污染、高效、節能的生物酶解技術在畜禽及水產品副產物利用的研究進展進行了對比分析，通過分析發現，在膠原酶解工藝方面，主要以單酶水解工藝居多，其次是多酶水解技術。在原料方面，涉及更多的骨、鱗及皮。在產物評價方法方面，更多的是采用水解度、自由基抑制率及肽的提取率、ACE抑制活性。在今后的研究中，期待在酶解效率提高及其機理探索、膠原肽的功能性評價、原料一致性及酶的種類差異與酶解效果評價關系方面有更多探索。

[1]耿浩,劉云玲,馬超,等.多棘海盤車體壁膠原蛋白肽的制備及其抗氧化活性[J].食品與發酵工業,2011,37(6):42-46.

[2]Kumar S,Sugihara F,Suzuki K,et al.A double-blind,placebo-controlled,randomised,clinical study on the effectiveness of collagen peptide on osteoarthritis[J].Journal of the Science of Food and Agriculture,2015,95:702-707.

[3]Fujii T,Okuda T,Yasui N,et al.Effects of amla extract and collagen peptide on UVB-induced photoaging in hairless mice[J].Journal of Functional Foods,2013(5):451-459.

[4]胡建平.魚鱗膠原蛋白的酸法提取及性質研究[J].糧食科技與經濟,2012(3):141-148.

[5]溫慧芳,趙利,陳麗麗,等.堿法提取鮰魚皮膠原蛋白工藝優化的研究[J].食品工業科技,2015,36(19):233-236.

[6]Linder M,Fanni J,Parmentier M,et al.Protein recovery from veal bones by enzymatic hydrolysis[J].Journal of Food Science,1995,60(5):949-952.

[7]余東華,徐志宏,魏振承.豬皮膠原蛋白的高效利用研究進展[J].食品工業科技,2011,32(2):359-361.

[8]Zhang Y,Olsen K,Grossi A,et al.Effect of pretreatment on enzymatic hydrolysis of bovine collagen and formation of ACE-inhibitory peptides[J].Food Chemistry,2013,141(3):2343-2354.

[9]Fan Jian,Zhuang Yongliang,Li Bafang.Effects of collagen and collagen hydrolysate from jellyfish umbrella on histological and immunity changes of mice photoaging[J].Nutrients,2013(5):223-233.

[10]李國英,張忠楷,雷蘇,等.膠原、明膠和水解膠原蛋白的性能差異[J].四川大學學報(工程科學版),2005,37(4):54-58.

[11]閆征,劉卉,李雙石,等.魚皮水解膠原蛋白在面包中的應用研究[J].中國食品添加劑,2017(3):127-132.

[12]Stadtman E R,Levine R L.Free radical-mediated oxidation of free amino acids and amino acid residues in proteins[J].Amino Acids,2003,25(3):207-218.

[13]任俊鳳,任婷婷,朱蓓薇.河豚魚皮膠原蛋白肽的提取及其抗氧化活性的研究[J].中國食品學報,2009,9(1):77-83.

[14]Elias R J,Kellerby S S,Decker E A.Antioxidant activity of proteins and peptides[J].Critical Reviews in Food Science and Nutrition,2008,48(5):430.

[15]焦駝文,孔繁東,祖國仁,等.酶解蛋白制備抗氧化多肽的研究現狀與展望[J].中國釀造,2007,26(3):5-7.

[16]雷亞君,唐亞麗,盧立新,等.初步探究酶法制備草魚魚皮膠原蛋白ACE抑制肽[J].飼料工業,2014,35(8):50-53.

[17]Ichimura T,Yamanaka A,Otsuka T,et al.Antihypertensive effect of enzymatic hydrolysate of collagen and Gly-Pro in spontaneously hypertensive rats[J].Bioscience Biotechnology & Biochemistry,2009,73(10):2317-2319.

[18]Park C H,Kim H J,Kang K T,et al.Fractionation and angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity of gelatin hydrolysates from by-products of Alaska pollock surimi[J].Fisheries & Aquatic Science,2009,12(2):79-85.

[19]Cheng F Y,Wan T C,Liu Y T,et al.Determination of angiotensin-I converting enzyme inhibitory peptides in chicken leg bone protein hydrolysate with alcalase[J].Animal Science Journal,2009,80(1):91-97.

[20]Faria M,Da C E,Gontijo J A,et al.Evaluation of the hypotensive potential of bovine and porcine collagen hydrolysates[J].Journal of Medicinal Food,2008,11(3):560-567.

[21]徐懷德,殷金蓮,馮麗丹,等.甲魚蛋白酶解產物體外ACE抑制和抗氧化活性研究[J].中國食品學報,2008,8(2):58-64.

[22]Gomez G M C,Lopez C M E,Lopez L,et al.Sea by-products as real material: new ways of application[M].Kerala,India:Transworld Research Network Signpost,2010:89-115.

[23]張順亮,成曉瑜,潘曉倩,等.牛骨膠原蛋白抗菌肽的制備及其抑菌活性[J].肉類研究,2012(10):5-8.

[24]胡孝勇,袁曉玲,蔣寅,等.膠原蛋白酶解的研究進展[J].現代食品科技,2008,24(10):1075-1078.

[25]Zhang B,Chen Y Z,Wei X F,et al.Optimization of conditions for collagen extraction from the swim bladders of grass carp(Ctenopharyngodonidella) by response surface methodology[J].Intern J Food Engin,2010,6(3):1556-1772.

[26]陳新峰,張治國,王君虹,等.風味蛋白酶水解畜產膠原蛋白的工藝[J].浙江農業科學,2011(2):352-354.

[27]趙妍嫣,胡林林,方芳,等.骨膠原蛋白的酶解工藝條件[J].食品科學,2010,31(22):153-155.

[28]張根生,岳曉霞,葉暾昊,等.火雞骨膠原多肽口服液的研究[J].食品科學,2005,26(8):563-567.

[29]王晨,吳暉,李曉鳳,等.胃蛋白酶酶解提取雞骨膠原蛋白工藝的研究[J].現代食品科技,2008,24(12):1300-1303.

[30]吳暉,王晨,李曉鳳,等.Alcalase 2.4 L催化牛骨膠原蛋白水解反應及其動力學研究[J].食品工業科技,2009,30(11):68-71.

[31]趙玉紅,韓琳琳,高天.鹿骨膠原蛋白的酶解及其水解物羥自由基清除活性的研究[J].東北農業大學學報,2007,38(6):780-783.

[32]張崟,王衛,張佳敏,等.響應面法和正交試驗對骨素酶解工藝優化的比較[J].食品研究與開發,2012,33(7):53-56.

[33]李誠,余霞,付剛,等.豬皮膠原蛋白酶解及其酶解產物的抗氧化活性[J].食品科學,2011,32(23):147-151.

[34]唐旭,施建臣,陳宇,等.菠蘿蛋白酶酶解魚鱗蛋白的工藝優化研究[J].食品工業科技,2013,34(13):181-183.

[35]黃煥,王欣,劉寶林,等.木瓜蛋白酶水解魚鱗膠原蛋白的工藝研究[J].食品科學,2009,30(24):23-25.

[36]劉春娥,劉峰,李剛杰,等.鱈魚皮膠原蛋白酶解液的制備及抗氧化研究[J].安徽農業科學,2011,39(34):21328.

[37]劉艷,劉章武,唐婧苗,等.酶解淡水魚鱗制備水解膠原蛋白的研究[J].武漢輕工大學學報,2009(2):11-14.

[38]申鋒,楊莉莉,熊善柏,等.胃蛋白酶水解草魚魚鱗制備膠原肽的工藝優化[J].華中農業大學學報,2010,29(3):387-391.

[39]王雨生,冷云,陳海華,等.黃鰭金槍魚皮膠原肽酶解工藝及抗氧化活性研究[J].中國食品學報,2015,15(2):73-77.

[40]劉小玲,林瑩,尹秀華,等.羅非魚皮膠原肽的制備及抗氧化活性研究[J].食品與機械,2007,23(3):92-95.

[41]趙梅,吳成業.羅非魚下腳料酶解工藝的響應面法優化[J].食品研究與開發,2007,28(5):48-53.

[42]任婷婷,董秀萍,朱蓓薇,等.響應面法優化海參膠原蛋白肽的制備條件[J].食品與機械,2010,26(3):120-123.

[43]馬儷,王曉丹,程賀,等.響應面法優化酶法提取鱈魚皮中膠原蛋白條件[J].中國釀造,2010,29(9):83-85.

[44]程波,吳潔,張玉蓉,等.酶法提取人工養殖鱘魚皮中膠原蛋白的工藝研究[J].食品研究與開發,2009,30(3):1-4.

[45]陸劍鋒,萬全,殷章敏,等.中華鱉裙邊膠原蛋白的提取及其特征[J].水產學報,2010,34(6):801-808.

[46]郭恒斌,曾慶祝.酶法提取魷魚皮膠原蛋白工藝條件的研究[J].南方水產科學,2008,4(1):58-63.

[47]秦玉青,劉承初,王慥,等.魷魚皮膠原蛋白的測定與回收[J].上海海洋大學學報,2002,11(2):138-144.

[48]陳小娥,方旭波,鐘秋琴.安康魚皮中膠原蛋白的提取工藝研究[J].食品工業科技,2007,28(3):131-133.

[49]張根生,范愛月,韓冰,等.響應曲面法優化堿性蛋白酶提取林蛙殘體膠原蛋白[J].食品科學,2011,32(2):93-97.

[50]韓冰,石彥國,張根生,等.Alcalase 蛋白酶制備鯉魚魚鱗膠原多肽[J].食品科學,2009,30(24):51-55.

[51]劉偉,丁丁,黃雅欽,等.魚鱗膠原蛋白水解物的制備[J].明膠科學與技術,2013,33(2):63-67.

[52]楊立,鄒波,李玓,等.魚鱗抗氧化肽的酶法制備工藝及特性[J].食品科學,2011,32(12):115-119.

[53]洪瑤.大黃魚魚鱗酶解制備膠原蛋白多肽的研究[D].杭州：中國計量學院,2014.

[54]莊永亮,李八方,趙雪,等.酶解海蜇膠原蛋白制備抗氧化肽工藝[J].農業工程學報,2009(s1):129-133.

[55]肖楓,曾名勇.海棒槌膠原蛋白的酶解工藝及其產物清除自由基活性的研究[J].食品科學,2006,27(11):336-339.

[56]王群,鄭海濤,葛堯,等.酶法制備鰈魚魚皮膠原蛋白肽及其清除超氧陰離子自由基的研究[J].中國農學通報,2011,27(14):87-93.

[57]馬華威.雙酶分步酶解制備鮟鱇魚皮膠原蛋白肽及生物活性的研究[D].舟山：浙江海洋學院,2014.

[58]顧明廣,蘇芳,劉艷霞.酶解魚皮膠原蛋白制備抗氧化肽工藝研究[J].食品與機械,2014,30(2):149-151.

[59]魏庭浩.豬骨膠原多肽的制備及其血管緊張素轉換酶抑制活性的研究[D].成都：四川農業大學,2010.

[60]馮雅蓉,馬儷珍.羊骨降血壓肽制備工藝的研究[J].山西農業大學學報(自然科學版),2011,31(3):253-256.

[61]劉少華.鹿角盤膠原蛋白的提取及血管緊張素轉化酶(ACE)抑制肽活性研究[D].長春：吉林農業大學,2015.

[62]賀江,趙自龍,彭磊,等.草魚魚鱗膠原蛋白提取及活性肽制備研究[J].食品研究與開發,2017,38(5):52-55.

[63]朱迎春,許小琴,馬儷珍.鯰魚骨酶解物的降血壓肽活性研究[J].青島農業大學學報(自然科學版),2009,26(1):61-65.

[64]楊銘鐸,沈春燕,張根生.豬骨呈味物質提取的研究(Ⅰ)——酶解豬骨最佳工藝條件[J].食品科學,2007,28(9):210-215.

[65]Hevial P,Olcott H S.Flavor of enzyme-solubilized fish protein concentrate fractions[J].Agrc Food Chem,1977,25(4):772-775.

[66]徐文超.扇貝蛋白的酶降解研究[D].青島：中國海洋大學,2015.

[67]Montecalvo J,Constantinides S M,Yang C.Optimization of processing parameters for the preparation of flounder frame protein product[J].Journal of Food Science,1984,49(1):172-176.

[68]王曙光,賈士儒, 喬長晟,等.響應面法優化雞骨泥酶解條件的研究[J].中國釀造,2009,28(2):80-83.

[69]戴丹琴,翁佩芳.復合酶制備牛皮膠原多肽[J].精細化工,2013,30(5):561-565.

[70]李巖,班玉鳳,郭洪臣,等.pH值漸變條件下雙酶協同水解豬皮制備膠原蛋白寡肽的研究[J].食品科學,2003,24(7):74-79.

[71]王國強,何力,賈魯君,等.長鰭金槍魚魚皮膠原蛋白肽制備工藝的研究[J].食品研究與開發,2016,37(7):105-110.

[72]曾慶冉,張慜,陳世豪.多種酶復合制備雞皮膠原蛋白短肽[J].食品與生物技術學報,2013,32(2):129-134.

[73]廉志清,王金,任濤,等.酶法耦合膜技術制備魚鱗膠原蛋白低聚肽的研究[J].化學與生物工程,2009,26(8):64-66.

[74]宋芹,顏軍,郭曉強,等.酶法制取羅非魚魚鱗膠原蛋白寡肽的工藝[J].食品研究與開發,2011,32(4):39-43.

[75]葉欣,冉旭.人工飼養大鯢皮膠原蛋白肽提取工藝研究[D].肉類工業,2014(4):29-33.

[76]汪濤,曾慶祝,謝智芬.內肽酶與端肽酶水解扇貝邊蛋白質工藝的研究[J].大連水產學院學報,2003,18(2):125-129.

[77]林孌,陳麗嬌.文蛤肉復合酶分步酶解工藝的研究[J].食品科學,2009,30(9):158-162.

[78]朱夕波,周培根,李燕,等.豬皮膠原蛋白水解產物中的抗氧化活性肽的分離及其氨基酸組分[J].天然產物研究與開發,2009,21(1):122-124.

[79]符群.雞骨膠原蛋白肽的酶法制備及其抗氧化性研究[J].哈爾濱：東北林業大學,2009.

[80]付文雯,馬美湖,蔡朝霞,等.牛骨蛋白分步酶解制取膠原多肽螯合鈣的研究[J].食品工業,2010(1):1-4.

[81]胡君景,劉景圣,張大力,等.復合酶分步酶解法提取牛骨膠原蛋白工藝的研究[J].肉類研究,2010(1):34-36.

[82]李彥春,祝德義,侯立杰,等.酶解膠原蛋白多肽的制備與分析[J].中國皮革,2004,33(5):22-26.

[83]朱靜靜,潘道東,孫楊贏,等.酶解法制備膠原蛋白肽及其抗氧化活性的研究[J].寧波大學學報(理工版),2016,29(4):26-32.

[84]孟昌偉,陸劍鋒,宮子慧,等.鮰魚骨膠原多肽的制備工藝研究[J].肉類工業,2011(9):35-39.

[85]陳晶,劉友明,熊善柏,等.復合蛋白酶與風味蛋白酶分步水解魚骨蛋白工藝的優化[J].華中農業大學學報(自然科學版),2007,26(5):704-708.

[86]劉振鋒,戴圣佳,黃小鳴,等.酶法制備魷魚皮膠原蛋白肽工藝的條件優化[J].食品研究與開發,2016,37(5):72-76.

[87]陳勝軍,李來好,曾民勇,等.羅非魚魚皮膠原蛋白降血壓酶解液的制備與活性研究[J].食品科學,2005,26(8):229-233.

[88]王運改,林琳,李明輝,等.鮰魚皮明膠抗氧化肽的制備工藝研究[J].食品科學,2010,31(19):254-258.