早產(chǎn)兒血液中Notch3的變化對支氣管肺發(fā)育不良早期診斷價值的研究

陳穎　張金鳳　麥麗珊

[摘要]目的 探討早產(chǎn)兒血液中Notch 3的變化對支氣管肺發(fā)育不良（BPD）的早期診斷價值。方法 回顧性分析佛山市婦幼保健院2016年1月～2017年2月接收的胎齡27～32周，存活28 d以上的患兒78例，其中患有BPD 23例，非BPD患兒55例，將BPD患兒組設(shè)定為觀察組，將同期在新生兒科診治的、與BPD組患者胎齡性別相匹配、未診斷BPD的患兒設(shè)為對照組。測定兩組患兒體內(nèi)Notch 3表達情況。結(jié)果 觀察組患兒在第7、14、21天體內(nèi)Notch 3值逐漸增加，且顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 BPD的發(fā)病過程中存在Notch 3高表達，Notch 3值對BPD有較高的早期診斷價值。

[關(guān)鍵詞]支氣管肺發(fā)育不良；早產(chǎn)兒；Notch 3；早期診斷

[中圖分類號] R722.6 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）1（a）-0082-03

[Abstract]Objective To investigate the value of Notch 3 in the blood of preterm infants in the early diagnosis of bronchopulmonary dysplasia （BPD）.Methods A total of 78 patients with gestational age of 27 to 32 weeks received in Maternal and Child Health Hospital of Foshan City from January 2016 to February 2017 were recorded.There were 23 patients with BPD and 55% of non-BPD children.The BPD group was set as the observation group，and the children who had not been diagnosed with BPD were matched with the gestational age of BPD group in the neonatal department.The expression of Notch 3 in the two groups was measured.Results The values of Notch 3 in the observation group were significantly higher than those in the control group，and the difference between the observation group and the control group was statistically significant （P<0.05）.Conclusion Notch 3 is highly expressed in the pathogenesis of BPD，and Notch 3 has a high early diagnostic value for BPD.

[Key words]Bronchopulmonary dysplasia；Premature children；Notch 3；Early diagnosis

隨著新生兒重癥監(jiān)護技術(shù)的迅速發(fā)展，越來越多的早產(chǎn)兒和極低出生體質(zhì)量兒（very low birth weight infant ）得以存活，支氣管肺發(fā)育不良（BPD）成為引起早產(chǎn)兒疾病和死亡的重要原因，是早產(chǎn)兒最常見的遠期并發(fā)癥之一[1]。在存活者中BPD延長了住院時間，增加了再入院和神經(jīng)發(fā)育障礙的風(fēng)險。在BPD放置肺表面活性物質(zhì)（pulmonary surfactant）替代治療、新的機械通氣策略、限制液體輸入和利尿劑的使用、最優(yōu)化的營養(yǎng)支持及對動脈導(dǎo)管未閉（patent ductus arteriosus）的積極處理均已取得共識，糖皮質(zhì)激素的使用仍是目前最具爭議的領(lǐng)域[2]。探尋BPD的早期預(yù)測因子，適時阻斷BPD的發(fā)病進程，減少BPD的發(fā)生發(fā)展尤為重要。早產(chǎn)兒出生后正常的肺泡發(fā)育程序被打亂，最終可導(dǎo)致肺泡組織學(xué)上的單一化及同質(zhì)異構(gòu)性，肺組織從囊泡期向肺泡期的發(fā)育受到阻滯，從而出現(xiàn)BPD的新特征肺發(fā)育停滯[3]。Notch家族由一組高度保守蛋白質(zhì)組成。Notch信號參與胚胎發(fā)育、血管損傷修復(fù)、血管重構(gòu)，在肺發(fā)育過程中動態(tài)表達。有研究提示Notch3與肺微血管形態(tài)異常相關(guān)。本研究對早產(chǎn)兒不同時段血液中Notch 3含量進行測定，分析其對BPD早期診斷的價值，為BPD早期干預(yù)提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

回顧性分析我院2016年1月～2017年2月接收的胎齡27～32周，存活28 d以上的患兒共78例，其中患有BPD 23例，非BPD患兒55例，將BPD患兒設(shè)定為觀察組，將同期在新生兒科診治的、與BPD組患者胎齡性別相匹配、未診斷BPD的患兒設(shè)為對照組。BPD診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《實用新生兒學(xué)》3版：1 min阿氏評分8～10分，不伴有先天性心臟病、氣漏、肺動脈高壓、ARDS、缺氧缺血性腦病、BPD等其他病變[4]，任何氧依賴（>21%）超過28 d的新生兒。排除情況：①先天明顯畸形，合并先天性心臟病等，神經(jīng)系統(tǒng)與呼吸系統(tǒng)發(fā)育明顯畸形；②遺傳有先天性代謝疾病；③重要資料缺失；④染色體明顯異常；⑤其他器官功能障礙。入組所有患兒均不在排除條件之內(nèi)，所有受試者監(jiān)護人對本研究知情，本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法

標(biāo)本采集及測量：所有患兒在出生后的第7、14、21天留取血液樣本，使用ELISA方法檢測Notch 3含量。endprint

治療方案：使用經(jīng)鼻持續(xù)氣道正壓通氣（NCPAP）或呼吸機進行輔助通氣，并應(yīng)用PS，逐漸變?yōu)榈土髁课?，最后停止吸氧，適當(dāng)限制液體入量，感染者根據(jù)藥敏試驗及用藥經(jīng)驗選擇合適的抗生素，對出現(xiàn)呼吸暫停的患兒使用氨茶堿（石藥集團歐意藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H13021033）或咖啡因，輸紅細胞懸液糾正貧血等綜合治療手段[5]。

1.3觀察指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)

對患兒出生后第7、14、21 d體內(nèi)的Notch 3值進行測量。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS l6.0統(tǒng)計軟件包處理，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

觀察組患兒在7、14、21 d體內(nèi)Notch 3值逐漸增加，且顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

3討論

早產(chǎn)兒的肺部發(fā)育往往正處于管道形成期結(jié)束和囊泡期的開始，且體內(nèi)抗氧化酶活性低下，對于活性氧代謝產(chǎn)物清除不足，出生后也更容易暴露于高氧濃度、炎癥反應(yīng)、感染、氣壓傷等不利的生長環(huán)境中，各種因素導(dǎo)致急性肺損傷后果，且損傷后修復(fù)過程同樣出現(xiàn)異常[6]。肺組織從囊泡期向肺泡期的發(fā)育受到阻滯，從而出現(xiàn)BPD的新特征肺發(fā)育停滯[7]。新型BPD病理改變以肺泡和肺微血管發(fā)育不良為主要特征，表現(xiàn)為肺泡數(shù)目減少、體積增大、肺泡結(jié)構(gòu)簡單化，肺微血管形態(tài)異常，并可見持續(xù)炎癥反應(yīng)，而肺泡和氣道損傷以及纖維化較輕[8]。

Notch家族是由一組高度保守的蛋白質(zhì)組成，其信號途徑通過局部細胞間相互作用，實現(xiàn)細胞間通訊、胞漿內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及核內(nèi)轉(zhuǎn)錄，從而控制細胞的增殖、分化、凋亡、遷移及黏附等，在機體的整個生長發(fā)育過程的調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用[9]。Notch信號參與胚胎發(fā)育、血管損傷修復(fù)、腫瘤生長過程中的血管重構(gòu)，在肺發(fā)育過程中呈動態(tài)表達，并可能在調(diào)控肺泡上皮、血管內(nèi)皮細胞的分化、發(fā)育中起關(guān)鍵作用[10]。有研究報道應(yīng)用γ分泌酶抑制劑DPAT抑制Notch信號通路后，能抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的肺血管重構(gòu)，降低肺動脈壓力，為肺動脈高壓的治療提供了新思路[11]。有學(xué)者的研究表明：肺動脈高壓小鼠的肺動脈血管平滑肌細胞內(nèi)Notch 3蛋白過度表達，且肺動脈高壓病情的嚴(yán)重程度與肺內(nèi)Notch 3蛋白表達量具有正相關(guān)性；通過對基因敲除Notch 3的小鼠模型研究后發(fā)現(xiàn)缺失Notch 3的小鼠不會罹患肺動脈高壓；使用γ分泌酶抑制劑阻斷Notch 3活化，可逆轉(zhuǎn)小鼠肺動脈高壓[12]。這些研究都說明Notch 3信號與肺動脈高壓的發(fā)生關(guān)系密切，也提示Notch 3與肺微血管形態(tài)異常相關(guān)。

肺動脈高壓是發(fā)生肺血管疾病的重要環(huán)節(jié)，主要特征為動脈平滑肌的細胞增殖，血管阻力升高等。在肺部發(fā)育的關(guān)鍵時期，肺部循環(huán)的各類損傷容易導(dǎo)致肺動脈高壓[13-14]。通過動物實驗發(fā)現(xiàn)，Notch 3通過Hes 5等方式參與肺部動脈平滑肌的增殖和肺部血管重構(gòu)，肺部血管中Notch 3活化程度與蛋白質(zhì)的表達量和肺部動脈高壓嚴(yán)重程度成正相關(guān)關(guān)系[15-16]。

本研究觀察組患兒Notch 3的表達情況在整個病程中動態(tài)變化，從第7天開始持續(xù)升高，第21天仍處于高值。Notch 3的動態(tài)變化過程與BPD疾病的發(fā)病過程相符，推測隨著Notch 3表達的升高，肺動脈壓力相對高，肺部動脈平滑肌增殖和肺部血管重構(gòu)，肺泡發(fā)育受阻。BPD組第7天Notch 3即已高表達，提示該組患兒出生后不久即有BPD發(fā)病傾向。因此，在胎齡較小的早產(chǎn)兒早期通過檢測Notch 3預(yù)判BPD發(fā)生，采取有效的綜合防治措施，降低疾病發(fā)生風(fēng)險。

本研究僅檢測血液中Notch 蛋白高表達，組織病理學(xué)等方面的研究尚存在較大的局限性，有待于多中心、大樣本的研究論證。

[參考文獻]

[1]莫煒明，姚臻，趙善和，等.早產(chǎn)兒應(yīng)用rhEPO治療支氣管肺發(fā)育不良前后血液中IL-1β、TNF-α變化及意義[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2015，（2）：18-19.

[2]曹冰冰，黃為民.糖皮質(zhì)激素防治新生兒支氣管肺發(fā)育不良利弊研究進展[J].中國婦幼保健，2016， 31（7）：1557-1560.

[3]張亞芥，潘家華.支氣管肺發(fā)育不良的臨床觀察及肺功能隨訪[J].臨床肺科雜志，2017，22（9）：1599-1601.

[4]金漢珍，黃德珉，官希吉.實用新生兒學(xué)[M].3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003.

[5]喬莉娜，許紅波，石坤，等.抑制Notch信號對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的肺血管重構(gòu)的影響[J].中國當(dāng)代兒科雜志，2011， 13（6）： 503-508.

[6]紀(jì)鳳娟，殷勇，徐娟，等.早產(chǎn)兒生后早期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素預(yù)防支氣管肺發(fā)育不良的Meta分析[J].中國當(dāng)代兒科雜志，2017，19（6）：638-645.

[7]Li X，Zhang X， Leathers R，et al.Notch 3 signaling promotes the development of pulmonary arterial hypertension[J].Nat Med，2009，15（11）：1289-1297.

[8]曾云清，劉賽紅.早產(chǎn)兒支氣管肺發(fā)育不良的危險因素分析[J].現(xiàn)代診斷與治療，2013，24（4）：913-914.

[9]楊雪，馮征，張寧，等.TGF-β上調(diào)Notch 3誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在促進肺癌骨轉(zhuǎn)移中的作用[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2016， 24（18）： 2851-2857.

[10]楊丹丹，郭書文，孫晴，等.Notch蛋白在心肌梗死后大鼠心肌中的表達及益氣活血方干預(yù)的研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2016，39（6）：461-465.

[11]曹靜，朱艷萍，李明霞.缺氧誘導(dǎo)因子-1α及下游因子在缺氧性肺動脈高壓新生大鼠肺內(nèi)的表達研究[J].中國新生兒科雜志，2014，29（3）：194-199.

[12]田青水，張寶明，劉毅.Notch信號通路相關(guān)蛋白在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[J].中國普通外科雜志，2016，25（4）： 547-551.

[13]萬磊，劉健，黃傳兵，等.新風(fēng)膠囊通過調(diào)節(jié)肺泡Ⅱ型上皮細胞Notch/Jagged-HES軸改善佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠肺功能[J]. 細胞與分子免疫學(xué)雜志，2017，33（7）：942-946.

[14]楊國良，胡丹丹.益氣養(yǎng)陰方對Lewis肺癌移植小鼠腫瘤生長影響的實驗研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報， 2017，41（3）：273-276.

[15]張衛(wèi)芳，祝田田，熊愛珍，等.鈣蛋白酶介導(dǎo)低氧誘導(dǎo)的肺動脈高壓肺血管重構(gòu)[J].中南大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2016， 41（9）：929-936.

[16]韓新源，陳春燕，范粉靈，等.5-羥色胺對大鼠肺動脈外膜成纖維細胞增殖、遷移及α-平滑肌肌動蛋白表達的影響[J].山東醫(yī)藥，2017，57（24）：46-47.

（收稿日期：2017-09-25 本文編輯：崔建中）endprint