CD147在涎腺粘液表皮樣癌中的表達及意義

廖垠林 黎明（通訊作者）

（1達州市中心醫院口腔科 四川 達州 635000）（2昆明醫科大學附屬口腔醫院 云南 昆明 650031）

粘液表皮樣癌是最常見的涎腺惡性腫瘤，在涎腺上皮性惡性腫瘤中約占30%[1]。本研究采用免疫組化SP法檢測CD147蛋白在粘液表皮樣癌組織中的表達，探討其臨床病意義。

1.標本來源

收集1991年1月—2011年3月在昆明醫科大學附屬口腔醫院口腔頜面外科行手術切除后的涎腺組織存檔的石蠟切片標本，共52個，其中，涎腺粘液表皮樣癌組織32例，正常涎腺組織20例。涎腺惡性腫瘤發生于大涎腺者（腮腺、頜下腺及舌下腺）24例，發生于小涎腺者（腭腺、唇腺、頰腺及磨牙后腺）8例；年齡14～78歲，平均46歲；腫瘤直徑≤2cm者20例，＞2cm者12例；伴有癌細胞侵潤周圍組織者25例，伴有淋巴結轉移者7例。

1.2 主要試劑

兔抗人CD147多克隆抗體，購自北京博奧森生物技術有限公司，超敏鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶連接法(S-P法)免疫組化試劑盒：購自福州邁新生物技術開發公司；

1.3 實驗方法

免疫組織化學染色方法（VltrasensitiveTM S-P免疫組化）依據試劑盒說明書進行。取凍存的部分涎腺腫瘤組織行石蠟包埋，石蠟塊作4μm 切片供免疫組織化學染色。SP免疫組織化學法檢測涎腺腫瘤標本中CD147的表達，CD147抗體濃度配制為原濃度的1/300倍。以PBS代替一抗作為陰性對照。用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 判斷標準

HE染色切片由兩名病理科主任醫師讀片證實診斷，在帶有moticam2005醫學圖像分析系統的顯微鏡下觀察并采集圖像，每例隨機觀察高倍鏡下200個腫瘤細胞，CD147陽性表達根據陽性細胞染色程度和百分率進行半定量結果判定。CD147主要定位于細胞膜，以細胞膜和/或細胞質呈棕黃染色為陽性，無陽性細胞記0分，陽性細胞數1%～25%記1分，26～50%記2分，51%～75%記3分，≥76%記4分；胞漿和/或胞膜基本不著色記0分，染色棕黃色計1分，染色棕色計2分，染色棕褐記3分。評價方法：每張切片以陽性細胞百分率和染色程度兩項得分乘積分數分為4級，即陰性(-)為0～1分，弱陽性(+)為2～3分，陽性(++)為4～6分，強陽性(+++)為≥6分。所有染色結果均用雙盲法測定。

1.5 統計學處理

采用SPSS 13.0軟件包對數據進行統計學處理，CD147在粘液表皮樣癌和正常唾液腺組織的不同表達采用χ2檢驗，CD147的表達與臨床病理特征的相關性用spearman等級相關檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 CD147在正常唾液腺組織和粘液表皮樣癌中的表達

CD147蛋白在正常涎腺組織中主要表達于分泌管上皮細胞的細胞膜和細胞漿，呈弱陽性染色，正常腺泡細胞不表達（圖1）。CD147在涎腺粘液表皮樣癌中的表達主要為腫瘤細胞的細胞膜和細胞漿染色，以黏液細胞和表皮樣細胞為主（圖2)。

圖1 正常涎腺組織

圖2 涎腺粘液表皮樣癌

2.2 CD147在涎腺粘液表皮樣癌組織中的表達結果

CD147在正常涎腺組織中CD147陽性表達率為10.0%(2/20)；在32例涎腺粘液表皮樣癌中CD147（-）6例，（+）9例，（++）12例，（+++）5例，陽性表達率為81.1%(26/32)。涎腺粘液表皮樣癌中CD147的表達高于正常涎腺，CD147陽性表達率在正常涎腺組與涎腺粘液表皮樣癌組之間差異有統計學意義(Z=-6.495，P=0.000＜0.05)。

2.3 CD147表達與MEC臨床病理特征之間的關系

CD147在癌細胞侵犯周圍組織的MEC陽性表達率為92.3%(12/13)，CD147在癌細胞未侵犯周圍組織的MEC陽性表達率為73.7%(14/19)。CD147在MEC中的表達與癌細胞侵犯周圍組織顯著相關(P=0.014＜0.05)；在粘液表皮樣癌組織中CD147蛋白的表達與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤原發部位、淋巴結轉移等均無關(均P＞0.05)。

3.討論

細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN/CD147）是一種高度糖基化的跨膜蛋白，廣泛表達于腫瘤細胞表面，可刺激腫瘤周圍間質細胞產生基質金屬蛋白酶，從而降解細胞外基底膜和間質成分，從而促進腫瘤的侵襲和轉移[2]。

本實驗結果顯示，CD147在粘液表皮樣癌組織中的陽性表達率明顯高于正常涎腺組織中的表達。以往研究表明，CD147在腫瘤的演變過程中起著十分關鍵的作用[3]。本實驗結果表明，在癌細胞侵犯周圍組織的粘液表皮樣癌組織中CD147表達較無癌細胞侵犯周圍組織者明顯升高，差異有統計學意義(P=0.014＜0.05)，說明CD147與粘液表皮樣癌的侵襲性密切相關。

本實驗結果表明，CD147在涎腺粘液表皮樣癌組織中有特異性表達[4]。結合有關實驗結果，我們可以推測在涎腺粘液表皮樣癌的治療中用siRNA干擾CD147的表達，可以抑制腫瘤細胞的惡性行為，同時還可以增強腫瘤細胞對化療藥物的敏感性。這將為涎腺惡性腫瘤的治療提供一個新的策略與方向。

[1]于世鳳口腔組織病理學[M]第4版.北京:人民衛生出版社.2000:250-253.

[2]Suzuki S，Sato M，Senoo H，et al.Direct cell-cell interaction enhances pro-MMP-2 production and activation in co-culture of laryngeal cancer cells and fibroblasts:involvement of EMMPRIN and MT1-MMP[J].Exp Cell Res，2004，293(2):259-266.

[3]Lim M，Martinez T，Jablons D，et al.Tumor-derived EMMPRIN (extracellular matrix metalloproteinase inducer)stimulates collagenase transcription through MAPK p38[J].FEBS Lett，1998，441(1):88-92.

[4]楊新杰，雷德林，張圃，等.CD147和MMP-2、VEGF在腺樣囊性癌侵襲轉移中的作用[J].實用口腔醫學雜志，2009，25(3):372-376.