返滴定法測定白礬散中白礬的含量

熊 玥，宋慧敏，畢昊容(江蘇省獸藥飼料質量檢驗所，南京 210036)

白礬散收載于《中國獸藥典》2015年版二部，由白礬、黃芩等九味中藥組成，主治肺熱咳嗽，具有清熱化痰，下氣平喘的功效[1]。現行的質量標準主要集中在顯微鑒別及薄層鑒別，未對方中君藥白礬進行有效控制。白礬為臨床常用礦物類中藥，始載于《神農本草經》[2]，為硫酸鹽類礦物明礬石經加工提煉而成的結晶，主要化學成分為含水硫酸鋁鉀〔KAl(SO4)2·12H2O〕，外用解毒殺蟲，燥濕止癢；內用止血止瀉，祛除風痰。白礬氣微，味酸、微甘而極澀，性寒，有微毒，可少量食用。有文獻報道白礬大劑量內服，刺激性強，會引起嘔吐腹瀉、虛脫甚至死亡[3]。故需建立白礬散中白礬含量測定的方法，以控制白礬散的質量。研究在相關檢測方法[4]的基礎上進行了改進，選用返滴定法測定白礬散中白礬的含量，并根據《獸藥質量標準分析方法驗證指導原則》對新建立方法的專屬性、精密度、重復性、準確度等進行了考察。結果表明新建立的方法各項方法學指標均比較理想，可有效控制白礬散中白礬的含量，從而保證其療效。

1 儀器與材料

1.1 儀器 XA105DU電子天平，德國梅特勒-托利多公司；L9/11/B170高溫電爐，德國納博熱公司；XMTD-8222恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設備有限公司；DK-98-Ⅱ電子調溫萬用電爐，天津泰斯特儀器有限公司。

1.2 試藥 含水硫酸鋁鉀(廣州光華化學廠有限公司，分析純，純度≥99.5%， 批號20070830，作為對照品使用)、乙二胺四醋酸二鈉(南京化學試劑股份有限公司)、硫酸鋅(西隴化工股份有限公司)，二甲酚橙(天津市化學試劑研究所)、醋酸銨(南京化學試劑股份有限公司)、冰醋酸(南京化學試劑股份有限公司)、鹽酸(南京化學試劑股份有限公司)等均為分析純，水為純化水。白礬散按《中國獸藥典》2015年版二部規定處方制備，購買白礬等九味飲片，粉碎，過篩，混勻，即得。共制備三批，批號分別為161209、161210、161211。另制備不含白礬的陰性對照樣品一批。

1.3 試劑配制 鋅滴定液(0.05 mol/L)、乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05 mol/L)：配制及標定參照《中國獸藥典》2015年版二部滴定液(附錄8006)。醋酸-醋酸銨緩沖液(pH 6.0)：配制參照《中國獸藥典》2015年版二部緩沖液(附錄8004)。二甲酚橙指示劑：配制參照《中國獸藥典》2015年版二部指示劑與指示液(附錄8005)。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備及測定 取白礬散約1.5 g，精密稱定，置坩堝中，緩緩熾熱，至完全炭化時，移入高溫電爐中600 ℃灰化2 h，取出，放冷，在坩鍋中小心加入稀鹽酸10 mL，用表面皿覆蓋坩鍋，置水浴上加熱10 min，表面皿用熱水5 mL沖洗，洗液并入坩堝中，濾過，用水50 mL分次洗滌坩堝及濾渣，合并濾液，加0.025%甲基紅乙醇溶液1滴，滴加氨試液至溶液顯微黃色，加醋酸-醋酸銨緩沖液(pH 6.0)20 mL，精密加乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05 mol/L) 25 mL，煮沸5 min，放冷，加二甲酚橙指示液1 mL，即得供試品溶液。用鋅滴定液(0.05 mol/L) 滴定至供試品溶液自黃色轉變為紅色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1 mL的乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05 mol/L) 相當于23.72 mg的含水硫酸鋁鉀〔KAl(SO4)2·12H2O〕。

2.2 專屬性考察 取不含白礬的陰性對照樣品1.17 g，精密稱定，按2.1項操作，結果供試品溶液消耗鋅滴定液的體積為25.07 mL(n=3)，空白試驗消耗鋅滴定液體積為25.12 mL(n=3)，兩者消耗鋅滴定液體積無明顯差異，說明經過高溫灰化處理后，處方中其他藥味對白礬的含量測定無明顯干擾，方法的專屬性良好。

2.3 精密度考察 取含水硫酸鋁鉀〔KAl(SO4)2·12H2O〕對照品0.3 g，精密稱定，按2.1項制備成供試品溶液，按上述方法測得對照品中含水硫酸鋁鉀〔KAl(SO4)2·12H2O〕的含量，平行測定6份，以測定結果的相對標準偏差表示試驗的精密度，計算RSD為0.2%，表明方法的精密度良好。

2.4 重復性考察 取白礬散(批號20161209)約1.5 g，平行6份，精密稱定，按2.1項分別制成供試品溶液，進行測定，樣品中白礬含量以含水硫酸鋁鉀〔KAl(SO4)2·12H2O〕計為0.3234 g/g，RSD為0.7%，表明該方法具有良好的重現性。

2.5 穩定性考察 取白礬散(批號20161209)約1.5 g，平行6份，精密稱定，按2.1項方法制備供試品溶液，在室溫條件下放置，每隔2 h，測定樣品含量。考察供試品溶液在室溫存放0、2、4、6、8、10 h含量的變化。測得在不同時間的含量平均值為0.3224 g/g，RSD為0.4%。結果表明，供試品溶液室溫放置10 h，含量基本未變，說明供試品溶液在室溫下比較穩定，滿足含量測定對供試品溶液穩定性的要求。

2.6 加樣回收考察 取已知含量的白礬散(批號：20161209)約0.75 g，精密稱定，按高(120%)、中(100%)、低(80%)三個濃度水平分別添加含水硫酸鋁鉀〔KAl(SO4)2·12H2O〕對照品(每個濃度水平制備3份)，制得添加樣品。按2.1項方法制備供試品溶液，進行含量測定。用實測量與樣品中所含被測成分量之差，除以對照品添加量計算回收率，結果見表1，結果表明，高中低三個濃度水平加樣回收率在96.36%～98.87%之間，平均加樣回收率為97.62%，RSD為0.8%，表明方法回收率良好。

表1 加樣回收率測定結果Tab 1 Results of recovery test

2.7 含量測定 取批號分別為161209、161210、161211的三批自制樣品，按2.1項方法制備供試品溶液，分別測定，樣品中含白礬以含水硫酸鋁鉀〔KAl(SO4)2·12H2O〕計，分別為0.3234、0.3188、0.3302 g/g，結果見表2。

表2 白礬散中白礬含量測定結果(n=3)Tab 2 The contents of alumen in baifan powder(n=3)

3 討論與小結

3.1 檢測方法的選擇 目前測定白礬含量，主要通過測定其中AL3+的含量，常見的AL3+測定方法有化學分析法(配位滴定法、重量法等)和儀器分析法(原子吸收分光光度法[5]、ICP-MS[6]、可見分光光度法[7]等)。儀器分析方法測定AL3+，靈敏度高，選擇性好，對測定微量鋁更有優勢，但需要借助分析儀器，不適合我國大部分獸藥生產企業的日常檢測。滴定法簡單易行，但AL3+對二甲酚橙指示劑有封閉作用，故不宜采用直接滴定法，需要采用返滴定法。AL3+與EDTA-2Na配位緩慢，需要調節溶液pH值到5～6，加入過量EDTA-2Na并加熱煮沸，配位反應才比較完全，再用鋅滴定液滴定剩余的EDTA-2Na，從而計算出白礬的含量。該方準確度較高，測定范圍寬，基本符合實驗要求。

3.2 樣品提取方法的優化 考察多種樣品提取方法，結果發現直接用水/鹽酸超聲提取，過濾后滴定，操作簡單，但提取液顏色過深，對滴定終點判定有明顯干擾；用高氯酸-硝酸消解樣品，不僅提取液顏色有干擾，而且高氯酸產生煙霧會對環境造成污染；本實驗最終采用馬弗爐高溫灰化法，除去樣品中大部分有機物，消除方中其他藥物對滴定終點的影響。白礬散在450 ℃灰化4 h才能完全，在600 ℃時2 h即可完全灰化。高溫下白礬會失去結晶水分解為難溶于水的枯礬及Al2O3[8]，加入稀鹽酸水浴加熱，可使不同形態的鋁全部換成溶于水的AL3+，溶液澄清無色，提取完全，重復性好。

3.3 樣品中其他金屬元素對測定結果的影響 EDTA及其鹽能與大多數金屬離子形成1∶1的配合物。喬婷婷等[9]利用ICP-OES/MS技術對不同產地的12批白礬飲片的無機元素進行了分析，結果表明常量元素在白礬中K、Al的含量最高，均值分別為8.8%、7.4%，微量元素中除 Cr、Sr外，平均含量都低于1 mg/kg，重金屬和有害元素含Hg、Cd、As、Pb、Cu的平均含量依次為0.004、0.002、0.096、0.229、0.182 mg/kg 。除了白礬以外，處方中其他飲片，如黃芩等也均含有微量的金屬元素[10]。設計實驗考察樣品中其他金屬元素對滴定終點的影響，處理樣品時加入適量的掩蔽劑NH4F，NH4F與溶液中的 AL3+在pH值5～6時發生配位掩遮，使得AL3+不再與EDTA-2Na發生配位反應，用鋅滴定液進行滴定，消耗鋅滴定液的體積為25.04 mL(n=3)，與空白實驗消耗鋅滴定液體積25.12 mL(n=3)，無明顯差異，說明其他金屬離子的存在對本實驗干擾較小，影響基本可以忽略。

[1] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典 2015年版(二部)[S].

Commission of Chinese Veterinary Pharmacopoeia.Veterinary Pharmacopoeia of the Pecple's Republic of China(the second volume of 2015 edition)[S].

[2] 吳 普. 神農本草經[M].北京:科學技術文獻出版社,1996:4.

Wu P. Shen Nong Ben Cao Jing[M].Beijing: Science and Technology Literature Press ,1996:4.

[3] 中國獸藥典委員會. 中華人民共和國獸藥典獸藥使用指南中藥卷 2010年版[S].

Commission of Chinese Veterinary Pharmacopoeia.The Use Guide of Veterinary Pharmacopoeia of the Pecple's Republic of China(2010 edition)[S].

[4] 姚 三, 洪海燕. 中藥炮制品中白礬含量測定[J].中國中藥雜志,1988,13(12):24-25.

Yao S ,Hong H Y.Determination of Alum in processed Chinese drugs by EDTA titration[J].China Journal of Chinese Materia Medica,1988,13(12):24-25.

[5] 杜 珊, 趙玉珠, 劉 偉.蒙脫石混懸液中三氧化二鋁含量測定研究[J].天津化工,2017,31(1):45-47.

Du S, Zhao Y Z, Liu W. Determination of Al2O3in smectite suspension[J]. Tianjin Chemical Industry,2017,31(1):45-47.

[6] 李麗敏, 陸繼偉, 楊盈盈,等. 膽石利通片中白礬的電感耦合等離子體質譜法測定[J].中國醫藥工業雜志,2013,44(9):929-931.

Li L M, Lu J W, Yang Y Y,etal. Determination of alum in Danshi Litong tablets by ICP-MS[J].Chinese Jourmal of Pharmaceuticals,2013,44(9):929-931.

[7] 袁 迎, 楊 錦. 市售3種中成藥中鋁的含量測定[J].中國藥房,2010,21(27):2557-2559.

Yuan Y, Yang J. Content detemination of Aluminium in 3 kinds of Chinese patent medicine for sale[J].China Pharmacy,2010,21(27):2557-2559.

[8] 尤淑霞, 吳德康, 劉圣金, 等. 白礬的炮制研究概況[J].中藥材,2010,33(7):1192-1194.

You S X,Wu D K,Liu S J,etal.Research on processing of Alumen[J].Joumal of Chinese Medicinal Materials,2010,33(7):1192-1194.

[9] 喬婷婷, 劉圣金, 林瑞超, 等. 基于ICP-OES/MS技術的白礬及其偽品銨明礬的無機元素差異性分析[J].中藥材,2016,39(11):2462-2468.

Qiao T T,Liu S J,Lin R C,etal.Differences of Inorganic Elements Between Alumen and Its Counterfeit Ammonium Alum Based on ICP/MS Technique[J].Journal of Chinese Medicinal Materials,2016,39(11):2462-2468.

[10] 張宜凡. 中藥黃芩中微量元素的主成分分析和聚類分析[J].中醫藥導報,2012,18(10):72-73.

Zhang Y F.Principal Component Analysis and Cluster Analysis of Trace Elements in Radix Scutellariae on Chinese traditional medicine[J].Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy,2012,18(10):72-73.