越南伯克氏菌及其組合生防菌防治黃瓜根結(jié)線蟲田間試驗

王貽蓮 ，王珍偉 ，劉寶軍 ， 潘明 ，李紀(jì)順*

(1.齊魯工業(yè)大學(xué)(山東省科學(xué)院),山東省科學(xué)院生態(tài)研究所,山東省應(yīng)用微生物重點實驗室，山東 濟南 250103；2.濟南五福生物技術(shù)有限公司，山東 濟南250103)

根結(jié)線蟲(Meloidogynespp.) 是一種高度專化型的雜食性植物病原線蟲，常造成蔬菜的大面積減產(chǎn)，每年造成的經(jīng)濟損失達幾十億美元[1-2]，嚴(yán)重制約了設(shè)施蔬菜的可持續(xù)發(fā)展。目前,對根結(jié)線蟲的防治,生產(chǎn)上主要以化學(xué)防治為主,為防止引起環(huán)境和食品安全等問題,利用生物防治替代化學(xué)防治是減輕根結(jié)線蟲危害的重要策略之一[3]。

根結(jié)線蟲的生物防治工作，國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)進行了大量的研究，但大多都停留在試驗階段，究其原因是因為生防菌田間應(yīng)用的防治效果不穩(wěn)定。為解決這一問題，研究人員正探索不同的措施，Siddiqui等[4]用哈茨木霉和熒光假單胞菌一起有效防治番茄根結(jié)線蟲。Liu等[5]用多粘芽孢桿菌和菌根真菌聯(lián)合防治根結(jié)線蟲。冀宇等[6]用淡紫擬青霉、鏈霉菌和蒼白桿菌研制功能復(fù)合型微生物菌劑來防治黃瓜根結(jié)線蟲。馬玉琴等[3]將短短芽孢桿菌、淡紫擬青霉、交枝頂孢霉和鉤狀木霉與生物有機肥結(jié)合制成菌肥防治黃瓜根結(jié)線蟲。肖同建等[7]利用生物熏蒸結(jié)合拮抗菌X5覆膜日光消毒技術(shù)防治番茄根結(jié)線蟲。金娜等[8]報道，通過土壤太陽能消毒、生物熏蒸或施有機肥料等措施能提高線蟲生防菌的田間防效。為提高實驗室防治效果良好的生防菌對蔬菜根結(jié)線蟲病的田間防治效果，本文通過添加營養(yǎng)基質(zhì)和生物有機肥的措施，研究了越南伯克氏B418及其與蠟樣芽胞桿菌BCJB01、木霉菌LTR-2和T11-W的組合菌劑防治黃瓜根結(jié)線蟲的配套應(yīng)用技術(shù)，以期為微生物菌劑的推廣應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌劑、菌肥及營養(yǎng)基質(zhì)

微生物菌劑：B418粉劑，2×108cfu/g；BCJB01粉劑，2×109cfu/g；LTR-2和T11-W孢子粉，5×108cfu/g(自制)。生物菌肥：加更優(yōu)(濟南五福生物技術(shù)有限公司)。營養(yǎng)基質(zhì)：有機添加劑(市售，主要成分暫不公開)。

1.2 供試作物

黃瓜，品種為“518”(濟南綠嘉園蔬菜種苗公司)。

1.3 防治對象

黃瓜根結(jié)線蟲(Meloidogynespp.)。

1.4 試驗方法

試驗在濟陽曲堤鎮(zhèn)黃瓜棚內(nèi)進行，黃瓜棚為12年連續(xù)種植棚，根結(jié)線蟲病株率在85%以上。試驗于2017年6月19日整地，撒施生物菌肥(320 千克/畝(1畝=666.7 m2))、營養(yǎng)基質(zhì)(400 千克/畝)和微生物菌劑(10～30千克/畝)，然后旋耕，旋耕深度約15 cm。6月30日移栽黃瓜苗，同時穴施微生物菌劑。2017年9月26日挖根調(diào)查,試驗期間不施用防治根結(jié)線蟲的其他藥劑。

1.5 試驗處理

撒施底肥及穴施處理共6組，分別為施用微生物混合菌劑+菌肥處理、施用微生物混合菌劑+菌肥+營養(yǎng)基質(zhì)的處理、施用微生物不同混合菌劑+營養(yǎng)基質(zhì)的處理及微生物菌劑B418粉劑單處理(詳見表1)。設(shè)未施用微生物菌劑、菌肥及營養(yǎng)基質(zhì)的常規(guī)對照1組，每處理6行，共計42行，隨機分布，每組處理面積約0.1畝。

表1 試驗處理Table 1 Test treatment

1.6 調(diào)查及病害統(tǒng)計方法

2017年9月26日，挖根調(diào)查植株受害級別，每處理組調(diào)查總株數(shù)不低于180株，記錄調(diào)查總株數(shù)和各級病株數(shù)，計算根結(jié)指數(shù)和防治效果；病株根結(jié)分級標(biāo)準(zhǔn)為0級：無根結(jié)；1級: 有少數(shù)根結(jié)，2級:大部分根上有根結(jié)；3級：在蟲癭上有再生根結(jié)；4級：根結(jié)互相連接成根結(jié)團塊[9]。

病株率=各級病株總數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100%；

病情指數(shù)=[Σ(各級病株數(shù)×相應(yīng)級數(shù)值)/(調(diào)查總株數(shù)×最高病級)]×100%；

防治效果=(對照根結(jié)指數(shù)-處理根結(jié)指數(shù))/對照根結(jié)指數(shù)×100%。

統(tǒng)計分析用SPSS16.0 軟件進行，多重比較采用鄧肯氏新復(fù)極差檢驗法。

2 結(jié)果與分析

越南伯克氏菌及其組合生防菌對黃瓜根結(jié)線蟲的田間防治效果，詳見表2。由表2 可知，所有處理組的根結(jié)線蟲病株率均比常規(guī)對照的低，不同處理組對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果存在差異。其中，處理2和處理5，即營養(yǎng)基質(zhì)+生物菌肥+微生物菌劑LTR-2和T11-W + BCJB01 + B418粉劑和營養(yǎng)基質(zhì)+微生物菌劑B418粉劑處理對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果最好，防效分別為88.04%和90.05%； 處理3和處理4對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果次之，防效分別為73.06%和78.96%。處理1和處理6對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果較弱，防效分別為60.28%和58.21%。

表2 越南伯克氏菌及其組合生防菌對黃瓜根結(jié)線蟲的田間防治效果Table 2 Field control effectiveness of Burkholderia vietnamiensis and its composite microbial flora on cucumber root knot nematodes

注：每行數(shù)據(jù)后不同字母表示差異顯著(P≤ 0.05)。

3 結(jié)論與討論

近年來，為提高生防菌的田間防治效果，利用多種微生物混合防治根結(jié)線蟲的報道越來越多。Siddiqui 等[4]報道，哈茨木霉和熒光假單胞菌一起使用可有效防治番茄根結(jié)線蟲。張雪艷等[10]報道了單一或組合生防菌對田間番茄植株生長和線蟲的影響。冀宇等[6]報道以淡紫擬青霉、紅灰鏈霉菌和蒼白桿菌組成的復(fù)合菌劑對移栽后38 d 和105 d的黃瓜根結(jié)線蟲防效分別為56.5%和42.5%；馬玉琴等[3]報道，短短芽孢桿菌、淡紫擬青霉、交枝頂孢霉和鉤狀木霉生防菌劑配比的生物有機菌肥對黃瓜根結(jié)線蟲病的防治效果為54.2%。本文以黃瓜根結(jié)線蟲為研究對象，在整地時添加營養(yǎng)基質(zhì)、生物菌肥，移栽時穴施微生物菌劑的處理方式，對越南伯克氏B418及其與蠟樣芽胞桿菌BCJB01、木霉菌LTR-2和T11-W的組合配套應(yīng)用技術(shù)進行了初步研究。

越南伯克氏菌及其組合生防菌劑對黃瓜根結(jié)線蟲的田間防治結(jié)果顯示：

(1)單用B418菌劑處理的防治效果最弱，防效為58.21%。 而在整地時添加營養(yǎng)基質(zhì)處理，即營養(yǎng)基質(zhì)+B418菌劑處理對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果最好，防治效果為90.05%。由此表明，整地時添加營養(yǎng)基質(zhì)，可顯著提高B418菌劑對黃瓜根結(jié)線蟲的田間防治效果。

(2)在混合菌劑處理中，對比處理1、處理2和處理3可知，在整地時同時添加生物菌肥和營養(yǎng)基質(zhì)的處理對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果好于單加營養(yǎng)基質(zhì)或生物菌肥處理，即營養(yǎng)基質(zhì)+生物菌肥+ LTR-2 + T11-W + BCJB01 + B418菌劑處理對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果最好，防效為88.04%。表明同時添加生物菌肥和營養(yǎng)基質(zhì)可提高混合微生物菌劑(LTR-2 + T11-W + BCJB01 + B418)對黃瓜根結(jié)線蟲的田間防治效果。

(3)在營養(yǎng)基質(zhì)+微生物菌劑處理中，對比處理3、處理4和處理5可知，B418單一菌劑+ 營養(yǎng)基質(zhì)對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果優(yōu)于其與其他菌劑的組合處理，造成這一結(jié)果的原因，可能菌株間存在不相容，也可能是選用的營養(yǎng)基質(zhì)有利于B418定殖，而不利于其他微生物菌劑定殖，該問題有待進一步的研究驗證。

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[7]肖同建，李蕊，王小慧，等.施用生防菌菌劑與日光消毒和生物熏蒸相結(jié)合防治番茄根結(jié)線蟲的研究[J]中國生物防治學(xué)報，2012，28(2)262-268.

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