白細胞介素6與子宮內(nèi)膜癌侵襲和轉(zhuǎn)移的相關性分析

車 祺， 劉素英， 董 曦

復旦大學附屬中山醫(yī)院生殖醫(yī)學中心，上海 200032

目前，子宮內(nèi)膜癌發(fā)病人數(shù)在美國及歐洲等發(fā)達地區(qū)已接近新發(fā)婦科惡性腫瘤的50%。2016年，美國子宮內(nèi)膜癌新發(fā)病例為54 870例，死亡病例為10 170例。近年來，我國子宮內(nèi)膜癌也出現(xiàn)了發(fā)病率升高和發(fā)病年輕化的趨勢。2001年以來，子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率明顯高于宮頸癌，2008年后已成為發(fā)病率最高的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤[1-3]。雖然Ⅰ期子宮內(nèi)膜樣腺癌(內(nèi)膜癌)的5年生存率接近90%，但這其中有30%的腫瘤患者存在高風險，一旦腫瘤浸潤至深肌層或者出現(xiàn)盆腔轉(zhuǎn)移，5年生存率即顯著降低，其中進展至Ⅲ和Ⅳ期的患者5年生存率分別為57%～66%和20%～26%[4]。全子宮切除、激素治療以及放化療的聯(lián)合應用對于早期子宮內(nèi)膜癌有效，一旦腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，療效即下降。因此，研究子宮內(nèi)膜癌的侵襲和發(fā)展機制，尋找可以預測其惡性潛能的生物學標志物，采取有效的預防措施，選擇新的治療靶點，并制定合理有效的綜合治療方案，具有十分重要的意義，本研究對其進行了探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年3月至2016年10月在復旦大學附屬中山醫(yī)院經(jīng)手術治療的子宮內(nèi)膜癌患者的癌組織標本及臨床資料。選擇病理資料(包括組織學分級、FIGO分期[5]、組織學類型、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管浸潤)完整者共78例；患者年齡為33～78歲，平均(56.9±8.8)歲，中位年齡為57 歲。另選取42例正常子宮內(nèi)膜標本作為對照，均來源于因子宮良性疾病(如子宮肌瘤和子宮腺肌病等)接受子宮切除手術的患者；患者年齡34～70歲，平均(53.9±8.6)歲，中位年齡為53歲。同時收集26例不典型增生的子宮內(nèi)膜組織標本，患者年齡為35～75歲，平均(52.9±7.8)歲，中位年齡為52歲。所有入選患者均來自復旦大學附屬中山醫(yī)院，在術前均未接受過放化療或激素治療。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準，患者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 免疫組織化學染色 實驗所用的免疫組化試劑盒購自上海明睿生物技術有限公司，其中白細胞介素6(interleukin-6，IL-6)抗體的工作液稀釋比例為1∶100。首先用4%甲醛溶液固定腫瘤組織，石蠟包埋，按3 μm連續(xù)切片，60℃恒溫箱中烘烤過夜以備用；二甲苯2次脫蠟，梯度乙醇溶液水化；抗原修復以封閉內(nèi)源性過氧化物酶，加入一抗并置于濕盒中，4℃孵育過夜；加入二抗，37℃孵育30 min；用鏈霉親和素標記辣根過氧化物酶于37℃條件下孵育10 min；每張切片滴加DAB顯色劑50 μL，光學顯微鏡下控制顯色 3～5 min，適時用蒸餾水(或PBS溶液)沖洗以終止顯色；蘇木精對比染色細胞核；梯度乙醇溶液脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3 免疫組織化學染色結(jié)果判定 以細胞核或細胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。采用半定量積分法，對每個視野的陽性細胞所占百分率及陽性細胞著色強度分別進行分級計分：陽性細胞著色強度計為0分(陰性)、1分(弱)、2分(中)和3分(強)；陽性細胞所占百分率計為0分(<1%)、1分(2%～25%)、2分(26%～50%)、3分(>50%)。免疫組化評分=陽性細胞著色強度計分+陽性細胞所占百分率計分；得分范圍為0～6分，總分>3分者評定為陽性[6]。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。分類數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關檢驗。檢驗水準(α)為0.05。

2 結(jié) 果

2.1 IL-6在子宮內(nèi)膜組織中的表達 免疫組化染色結(jié)果(圖1)顯示：IL-6主要表達于子宮內(nèi)膜組織的腺上皮細胞質(zhì)中。免疫組化半定量分析顯示：IL-6在42 例正常子宮內(nèi)膜組織中表達陽性率為4.8%(2例)，在26例不典型增生的子宮內(nèi)膜組織中表達陽性率為30.8%(8例)，在78例子宮內(nèi)膜癌組織中表達陽性率為60.3%(47例)；IL-6在正常子宮內(nèi)膜、不典型增生、子宮內(nèi)膜腺癌中的表達呈遞增趨勢，有等級相關性，Spearman等級相關系數(shù)為0.638，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

圖1 免疫組織化學染色示IL-6在正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達

2.2 IL-6陽性表達與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的相關性 Spearman等級相關分析結(jié)果(表1)顯示：IL-6表達陽性率與肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均存在等級相關性，等級相關系數(shù)分別為0.589、0.655，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；IL-6表達陽性率與子宮內(nèi)膜癌的FIGO分期、組織學分級、組織學類型和脈管浸潤等參數(shù)無明顯相關性。

表1 IL-6表達與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理參數(shù)的相關性 N=78

3 討 論

IL-6是在1986年被Hirano首次發(fā)現(xiàn)，由1條單鏈多肽組成的糖蛋白，相對分子質(zhì)量為2.6×104。人類編碼IL-6的基因位于第7號染色體，其編碼蛋白由213個氨基酸組成，在多種生理和病理過程(如機體自穩(wěn)、免疫系統(tǒng)和急性期反應等)中扮演重要角色[7-8]。研究[9-10]發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌和頭頸部腫瘤中，IL-6激活和腫瘤細胞的生長、增殖密切相關。另外，不同組織中IL-6的產(chǎn)生需要不同刺激因子的誘導。這些刺激因子包括多種抗原和非抗原性物質(zhì)，如DNA或RNA病毒、細菌內(nèi)毒素以及細胞因子等。

IL-6通過不同機制促進子宮內(nèi)膜癌發(fā)生和發(fā)展的作用已有文獻報道。研究發(fā)現(xiàn)，IL-6可通過ERK/NF-κB信號通路促進子宮內(nèi)膜癌細胞的生長和增殖[11]，或通過正反饋作用促進子宮內(nèi)膜癌局部雌激素的合成[12]等。IL-6在卵巢癌和宮頸癌等婦科腫瘤中的促進作用也已被肯定，提示在各種婦科惡性腫瘤中，IL-6通過炎性反應、免疫及內(nèi)分泌等各種機制對腫瘤的發(fā)生和發(fā)展起重要作用[13-14]。然而，IL-6與子宮內(nèi)膜癌患者各種臨床參數(shù)的相關性目前鮮見報道。

本研究發(fā)現(xiàn)，與正常子宮內(nèi)膜組織相比，不典型增生子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜癌組織中IL-6的表達均明顯上調(diào)；這與張靜等[15]的研究結(jié)果相一致。本研究進一步分析發(fā)現(xiàn)，IL-6陽性表達與子宮內(nèi)膜癌的肌層浸潤(r=0.589)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=0.655)正相關，提示IL-6可能與子宮內(nèi)膜癌的侵襲和轉(zhuǎn)移有一定關系。IL-6/STAT3信號通路是IL-6下游的經(jīng)典信號通路[16]。IL-6能否通過這一通路促進子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展，以及患者血清中IL-6能否作為監(jiān)測子宮內(nèi)膜癌復發(fā)以及腫瘤進展的臨床指標，有待在今后工作中進一步探討。此外，本研究入組病例中，子宮內(nèi)膜癌分期以Ⅰ期為主，組織學分級以G1級為主，但IL-6與FIGO分期及組織學分級不相關。因此，本研究結(jié)論還需要今后通過進一步擴大樣本量來證實。

此外，若證實雌激素通過靶向IL-6促進子宮內(nèi)膜癌的浸潤和侵襲，將為內(nèi)膜癌局部雌激素合成理論[12]提供重要的補充，從而擴展人們對于內(nèi)膜癌發(fā)生和發(fā)展機制的理解，并為尋找內(nèi)膜癌靶向治療途徑開拓新的思路。本課題組今后將進一步探討IL-6在子宮內(nèi)膜癌侵襲和轉(zhuǎn)移過程中的相關信號通路，為子宮內(nèi)膜癌的保守治療研究提供可靠的生物學依據(jù)，并期待使用抗IL-6的藥物來達到減輕和治療子宮內(nèi)膜癌的目的，為罹患子宮內(nèi)膜癌的年輕患者保留生育功能探索新的途徑。

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