液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋中尼卡巴嗪殘留標志物

□ 張宗明 歐銳君 羅羚豐 廣州京誠檢測技術(shù)有限公司

1 前言

尼卡巴嗪是4, 4-二硝基均二苯脲（DNC）和2-羥基-4,6-二甲基嘧啶（HDP）組成的復合物，其中殘留標志物是DNC。尼卡巴嗪是一種高效、廣譜、穩(wěn)定的抗球蟲藥物，主要用于預防雞和火雞球蟲病[1]。

目前，動物性食品中尼卡巴嗪標志殘留物的測定標準有《食品安全國家標準 動物性食品中尼卡巴嗪殘留標志物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB 29690-2013）[2]和《食品安全國家標準 雞可食性組織中尼卡巴嗪殘留量的測定 高效液相色譜法》（GB 29691-2013）[3]。 其 中 GB 29690-2013的前處理中凈化步驟只有正己烷脫脂，凈化不充分，凈化效果不佳；而GB 29691-2013用C18固相萃取柱凈化（SPE），SPE凈化效果雖好，但是每個樣品凈化需要耗時約30分鐘，檢測時間較長。

QuEChERS，是一種快速（Quick）、簡單（Easy）、成本低（Cheap）、高效（Efficient）、可靠（Rugged）、安全（Safe）的前處理方法，是目前一種相當成熟前處理手段[4，5，6]，《食品安全國家標準 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（GB 23200.113-2018）[7]已采用QuEChERS法作為凈化方法。本文在GB 29690-2013的基礎上，結(jié)合QuEChERS法，建立一種檢測雞蛋中尼卡巴嗪標志殘留物DNC的準確便捷方法。

2 材料與方法

2.1 主要儀器

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（沃特世，TQ-S，配ESI離子源）。

2.2 試劑

乙腈（色譜純）；甲酸（色譜純）；正己烷（色譜純）；無水硫酸鈉（分析純）；QuEChERS凈化管（50 mg乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA），150 mg硫酸鎂，50 mg十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18），2 mL；上海安譜）；標準物質(zhì)見表1（上海安譜）；雞蛋（購于當?shù)厥袌觯?/p>

2.2.1 標準溶液配制

標準儲備液（100 μg/mL）：稱取DNC 0.001 0 g，用二甲基甲酰胺定容10 mL。標準中間液（1 μg/mL）：準確量取標準儲備溶液100 μL，用乙腈定容至10 mL。內(nèi)標標準儲備液（100 μg/mL）：稱取DNC-D80.001 0 g，用二甲基甲酰胺定容10 mL。內(nèi)標中間液（1 μg/mL）：準確量取內(nèi)標標準儲備溶液100 μL，用乙腈定容至10 mL。標準溶液使用液：用乙腈將標準中間液稀釋至下列濃度：10、20、40、60、80、100 μg/L，然后加入 10 μL內(nèi)標中間液。

表1 標準品信息

2.3 方法

2.3.1 提取

參照《食品安全國家標準 動物性食品中尼卡巴嗪殘留標志物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB 29690-2013），稱取2 g試樣置于50 mL具塞離心管中，加10 μL內(nèi)標中間液，加無水硫酸鈉2 g，乙腈8 mL，于旋渦混合器上混勻30 s，待凈化。

2.3.2 凈化

提取液5 000 r/min離心10 min，轉(zhuǎn)移至另一離心管中，40 ℃氮吹至干，加乙腈飽和的正己烷1 mL，于旋渦混合器上混勻10 s，再加乙腈1 mL渦旋混合，于40 ℃水浴中靜置5 min，以2 000 r/min離心5 min，取下層清液，轉(zhuǎn)移至QuEChERS凈化管中，渦旋30 s，靜置30 s，過0.22 μm微孔濾膜后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

2.3.3 色譜條件

2.3.4 結(jié)果計算

雞蛋中DNC含量以公式（1）計算：

W——雞蛋中DNC含量（μg/kg）

m——樣品質(zhì)量（g）

C——提取液濃度（μg/L）

V——定容體積（mL）

f——稀釋倍數(shù)

3 結(jié)果

3.1 線性范圍

含量在5～50 μg/kg范圍內(nèi)，工作曲線為Y=2.61577x+0.73884，相關(guān)系數(shù)為0.996，線性良好。

3.2 回收率和精密度

在陰性樣品進行10 μg/kg和40 μg/kg兩個含量水平進行加標回收實驗，回收率范圍為89.7%～96.1%；在陰性樣品進行30 μg/kg水平進行6次加標回收實驗，相對標準偏差為2.68%。

3.3 檢出限

以3倍信噪比對應的DNC含量為檢出限，以10倍信噪比對應的DNC含量為定量限，此方法檢出限和定量限分別是0.10 μg/kg和0.33 μg/kg。

3.4 色譜圖與保留時間

在2.3.3的色譜條件下，由DNC色譜圖（圖1）可知，DNC保留時間為3.10 min，峰型較好，無干擾峰，色譜條件可靠。

4 結(jié)論與討論

符合《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404-2008）[8]和《獸藥殘留實驗室質(zhì)量控制規(guī)范》（NY/T 1896-2010）[9]要求，可滿足日常檢測的質(zhì)量控制要求。

農(nóng)業(yè)部235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》[10]規(guī)定了雞的肌肉、皮、脂、肝和腎中尼卡巴嗪最大殘留量不可超過200 μg/kg。目前，尚未制定在雞蛋中的最大殘留量，但此方法檢出限遠低于200 μg/kg，此方法可以為市場上蛋類食品質(zhì)量安全檢測提供參考。

GB 29690-2013中，只用正己烷對樣品進行脫脂處理，并沒有其他凈化手段，本法在GB 29690-2013的基礎上增加QuEChERS凈化，提高了凈化效果，降低雜質(zhì)對檢測結(jié)果的影響和對儀器的污染。另外，QuEChERS高效便捷，不會顯著增加檢測時間，可廣泛應用于食品中農(nóng)藥和獸藥殘留檢測。

表2 流動相和梯度洗脫程序

表3 定性離子對、定量離子對、錐孔能量、碰撞能量

圖1 標準溶液中 DNC 和內(nèi)標（DNC-D8）的特征離子色譜圖