解毒扶正顆粒對內毒素致急性肺損傷小鼠的保護作用*

普勇斌 劉曉敏 陶相宜 崔向朋 李海濱 柳 蹊 徐 瑞 唐 彬

（云南省中醫醫院，云南 昆明 650021）

急性肺損傷（ALI）是在嚴重感染、休克、創傷及燒傷等非心源性疾病［1］過程中等各種肺內、肺外致病因素導致的急性彌漫性炎癥性肺損傷，進而引起急性呼吸衰竭，以肺血管通透性增高、肺泡腔滲出富含蛋白質的液體、肺水腫及透明膜的形成為主要病理特征，臨床上表現為進行性低氧血癥和呼吸窘迫，肺部影像學上表現為非均一性的滲出性病變［2］。ALI是多系統器官功能不全（MODS）的一個組成部分，也是非常重要的的一個始動環節，且病情兇險，預后惡劣。解毒扶正顆粒是云南省中醫醫院據趙淳教授驗方制成的院內制劑，臨床運用于肺系疾病治療［3-4］，取得較好療效。本研究觀察解毒扶正顆粒對ALI小鼠的影響?，F報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級健康雌性Wistar小鼠，體質量22～24 g。由重慶騰鑫生物技術有限公司提供，許可證號：SCXK（川）2015.030，飼養于云南省中醫醫院實驗中心SPF級實驗室。適應性喂養1周后開始實驗。

1.2 試藥與儀器 1）試驗藥物：清熱解毒扶正顆粒為國家級名老中醫趙淳教授經驗方（大黃、翼首草、菲牛蛭、葶藶子、黃芪等），藥材均由云南省中醫醫院中藥房提供，按原方比例水煎后濃縮成含生藥3 g/mL，放置在4℃冰箱保存備用。動物給藥前以蒸餾水倍比稀釋成含生藥3、1.5、0.75 g/mL 3個不同劑量。2）陽性組藥物：地塞米松（DEX）（浙江仙琚制藥股份有限公司）。3）試劑：內毒素（LPS）（批號：055：B5，美國 Sigma 公司）。4）儀器：血氣分析儀由美國雅培公司提供，型號ISTAT 300-G。

1.3 造模與分組 采用一次性腹腔注射LPS（5 mg/kg）復制ALI模型，模型滿足ALI組織病理特點。按隨機數字表法將70只小鼠分為6組，即：空白對照組、模型組、陽性藥物組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，分別稱體質量并記錄。

1.4 研究方法 各組小鼠行適應性喂養1周，各組別小鼠按照以下方法進行處理?？瞻讓φ战M：正常飲食及飲水，第11天同其他組別一同處死。模型組：正常飲食及飲水，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。陽性藥物組：平時正常飲食及飲水，每日予地塞米松腹腔灌注每日1次，連續腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。中藥低劑量組：平時正常飲食及飲水，每日予解毒扶正顆粒低劑量溶液腹腔灌注每日1次，連續腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。中藥中劑量組：平時正常飲食及飲水，每日予解毒扶正顆粒中劑量溶液腹腔灌注每日1次，連續腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。中藥高劑量組：平時正常飲食及飲水，每日予解毒扶正顆粒高劑量溶液腹腔灌注每日1次，連續腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。

1.5 標本采集與檢測 1）動脈血采集。相應的時間點麻醉，在隔絕空氣條件下采集動脈血2 mL，肝素抗凝，測動脈血氧分壓（PaO2）。2）肺組織病理學檢測。將小鼠解剖，取小鼠右上肺葉，置于體積分數10%甲醛中固定，石蠟包埋制作5 μm切片，HE染色后顯微鏡觀察并照相。由云南省中醫醫院病理醫師讀片。3）動脈血氣分析。相應的時間點麻醉，在隔絕空氣條件下采集動脈血2 mL，肝素抗凝，測動脈血PaO2。3）肺水含量計算。肺標本脫水前后濕質量與干質量比值（W/D）表示肺組織含水量，開胸取肺，肺水含量測定各組于相應的時間點麻醉處死動物，開胸取出右上肺，稱濕質量后，置烤箱（80℃，48 h）烤至衡重，稱干質量，計算濕/干質量比。

1.6 統計學處理 應用SPSS18.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，對計量資料進行t檢驗和方差分析，計數資料進行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠肺W/D、動脈血PaO2水平比較 見表1。模型組W/D與空白對照組比較顯著升高（P＜0.01），與模型組比較，解毒扶正顆粒高劑量組、中劑量組、低劑量組肺濕/干質量差異具有統計學意義（P＜0.05），其中中劑量組下降最明顯（P＜0.01）。所有實驗大鼠的吸氧濃度均為21%，故以動脈血氧分壓PaO2代替氧合指數進行比較，LPS可以誘導大鼠PaO2顯著降低 （P＜0.01），PaO2在模型組較對照組顯著降低（P＜0.01），解毒扶正顆粒各劑量組、陽性藥物組則較模型組顯著增加（P＜0.01）。

表1 各組大鼠肺W/D、動脈血PaO2水平比較（±s）

表1 各組大鼠肺W/D、動脈血PaO2水平比較（±s）

與空白對照組比較，*P＜0.01；與陽性藥物組比較，△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組 別 n W/D P a O 2（m m H g）空白對照組 6 3.9 5±0.5 1 9 5.5±8.7模型組 6 4.2 4±0.4 9* 6 0.7±1 1.0*陽性藥物組 6 4.0 9±0.4 8 8 9.0±1 0.5▲▲解毒扶正顆粒高劑量組 6 4.2 2±0.3 6△▲ 8 5.5±1 3.8△▲▲解毒扶正顆粒中劑量組 6 4.1 4±0.4 7△▲▲ 8 7.0±1 6.9△▲▲解毒扶正顆粒低劑量組 6 4.2 4±0.3 9△▲ 7 4.3±1 7.4△▲▲

2.2 各組小鼠肺病理組織觀察結果 見圖1，圖2。光鏡觀察：對照組肺泡結構完整、清晰，肺泡間隔無水腫。模型組：毛細血管內紅細胞較多，充滿管腔，肺泡腔纖維蛋白滲出較多，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細胞滲出，肺泡間隔增寬。空白對照組：毛細血管可見少數紅細胞，纖維蛋白滲出充滿肺泡腔，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細胞滲出，肺泡間隔增寬。陽性藥物組：毛細血管可見少數紅細胞，纖維蛋白滲出充滿肺泡腔，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細胞滲出，肺泡間隔增寬。解毒扶正顆粒高劑量組：毛細血管可見少數紅細胞，肺泡腔少許纖維蛋白，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細胞滲出，肺泡間隔增寬。解毒扶正顆粒中劑量組：毛細血管可見少數紅細胞，肺泡腔少許纖維蛋白，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細胞滲出，肺泡間隔增寬。解毒扶正顆粒低劑量組：毛細血管可見少數紅細胞，肺泡腔少許纖維蛋白，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細胞滲出，肺泡間隔增寬。

3 討 論

目前ARDS/ALI是臨床危重癥治療的難點，膿毒癥及感染性休克時肺損傷最早出現，也常常是導致患者死亡的原因。感染的細菌多以革蘭陰性菌為主，細胞壁的主要成分為LPS，LPS的大量和持續釋放是導致ALI發生發展的重要因素。

圖1 各組大鼠右上肺葉病理形態比較（HE染色，10倍）

圖2 各組大鼠右上肺葉病理形態比較（HE染色，20倍）

ALI屬中醫“喘證”“結胸”“喘脫”“暴喘”等病的范疇。病位在肺，與心、腎、大腸相關。趙淳教授認為ALI在發病早期的中醫病機主要是肺失宣降、氣機逆亂、毒邪壅滯。其中的毒邪包括熱、毒、痰、瘀等。患者熱、毒、痰、喘、瘀、閉的表現突出，宜運用清熱解毒、宣肺平喘、豁痰開竅、攻里通下等治法。趙淳教授指出，與此同時正邪相爭，導致正氣耗傷，表現為正氣虛衰，在肺即為肺氣虛。此時邪毒壅滯，呈現正虛邪實之征。出現臟腑虛損，陰陽逆亂，此即為急性虛癥［5］。天津市第一中心醫院急救醫學研究所王金達等［6-7］在20世紀80年代就提出了全身炎癥反應綜合征導致膿毒癥的急性虛證的概念。不論外傷、邪毒、六淫、癘氣等原因導致的陰陽、氣血、臟腑功能迅速虛衰的證候，表現為“邪實未去，正氣已虛”，具有發病急、病情重、存活率低等特點，它的發生與機體免疫狀態高度相關。正盛邪退則病愈，正虛邪盛則病進［8］。故救治ALI應采取清熱解毒與控制感染、扶正祛邪與增強機體免疫力，活血化瘀與改善微循環等治則。趙淳教授經驗方清熱解毒扶正顆粒具有益氣通絡、扶正固本、清熱解毒功效。趙淳教授認為，血為氣母，氣為血帥；氣行則血行，氣虛、氣滯則血瘀，血瘀則水停；肺朝百脈，主氣而司呼吸，主宣發肅降，通調水道，并與大腸相表里。ALI，肺之臟真受損，肺氣虛弱，血脈瘀滯，水壅于肺，失其宣降之職，故發暴喘。治療上，當以益氣活血，瀉肺平喘為法，或“肺實瀉大腸”，即用通腑瀉肺之法，在此法指導下，趙老創制解毒扶正湯一方，易方為顆粒，即解毒扶正顆粒，由大黃、翼首草、菲牛蛭、葶藶子、黃芪共奏，達益氣、活血、行水、瀉肺、平喘之效。該方中，菲牛蛭俗稱金邊螞蟥，其抗凝血作用、抗血栓作用優于其他水蛭［9］。黃芪甘，微溫。歸肺、脾經［10］，其有效成分皂苷類、黃酮類、多糖類、氨基酸、微量元素等，可以增強免疫功能［11］；抗自由基、調節代謝、保護線粒體［12］；對多種細菌有抑制作用［13］，組成該方中的大黃研究發現，大黃在抗炎方面，具有多靶點作用，對內毒素性肺損傷有其獨特優勢，大黃素是中藥大黃主要有效成分之一，現代研究證明，大黃素具有抑菌抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫調節、保肝利膽、護腎利尿、改善微循環、松弛血管、促進胃腸蠕動等作用［14-15］。葶藶子中的芐基芥子油具有廣譜抗菌作用，對酵母菌等20種真菌及數十種其他菌株均有抗菌作用［16］，有研究認為葶藶子有改善ALI的效果，與其改善水通道蛋白5含量或者活性有關［17］。在臨床實踐中，該方可改善ALI患者的癥狀，減輕肺水腫、改善肺循環，提高肺的順應性，從而改善肺通氣，提高氧合指數，對提高ALI患者的預后有積極作用。

本次研究中，模型組動物肺組織切片光鏡下提示毛細血管內紅細胞較多，充滿管腔，肺泡腔纖維蛋白滲出較多，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細胞滲出，肺泡間隔增寬，提示復制ALI模型成功。

通過本實驗發現解毒扶正顆粒能顯著抑制LPS引起的ALI，表現在解毒扶正顆?？梢鹉Ｐ托∈蠓谓M織濕質量/干質量比的提高，同時高劑量組、中劑量組、低劑量組動物血PaO2較模型組明顯提高；病理結果也提示，解毒扶正顆粒不同劑量組動物，其肺病理切片能減少炎癥細胞的肺內積聚，減少肺泡萎陷及肺毛細血管滲出。根據本實驗結果，可以證實解毒扶正顆粒對肺損傷有保護作用，為進一步研究提供了實驗依據。

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