不同灸溫對高脂血癥大鼠血脂及肝脂酶活性的影響

張會芳 孫舟紅 耿婷婷 徐旺芳

【摘要】目的 觀察艾灸溫度對高脂血癥大鼠模型血脂四項及肝脂酶活性的影響，探討艾灸不同調脂途徑。方法 采用灌胃造模方法制備高脂血癥模型。將40只清潔級健康雄性SD大鼠隨機分為四組，分別為正常組、模型組、38℃組、43℃組，干預四周后，眼眶取血，測定血清膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白含量及肝脂酶活性。結果 與模型組比較，43℃組可明顯提高HL的活性，差異具有非常顯著性意義（P<0.05），38℃組數值略有提高，但無統計學意義（P>0.05）；與38℃組比較，43℃組可明顯提高HL的活性，差異具有非常顯著性意義（P<0.05），說明HL的活性受溫度的影響，適宜的溫度可提高其活性；與模型組比較，43℃組及38℃組TC、TG、LDL-C明顯降低，差異具有顯著性意義（P<0.05）；與38℃組比較，43℃組降低TC、TG、LDL-C明顯，差異具有顯著性意義（P<0.05），說明46℃組降脂療效優于38℃組，療效與溫度有關，適宜的溫度是取效的關鍵。HDL-C模型組高于正常組，與大鼠自身調制機制有關，兩組溫度對其影響區別不大，差異沒有統計學意義（P>0.05）。結論 不同灸溫對血脂及HL影響不同，HL途徑是TRPV1調節血脂途徑之一。

【關鍵詞】高脂血癥；灌胃造模；高密度脂蛋白

【中圖分類號】R245 【文獻標識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2017.28..02

高脂血癥是中老年人常見的病癥，其主要危害是導致動脈粥樣硬化，從而引起眾多相關疾病，嚴重危害人類的健康。臨床研究表明，灸法治療高脂血癥療效可靠。以“溫”促“通”是灸法的本質與靈魂[1]，而適宜的灸溫是灸效產生的重要條件，大于43℃的艾灸刺激能產生有效調脂通脈的效應[2]。關于灸法調脂途徑的研究，目前鮮見報道，與TRPV1相關性研究，尚無報道。肝脂酶（Hepatic lipase，HL）是多種脂蛋白代謝的關鍵酶，在脂質代謝和轉運過程中起重要作用，其活性降低，可引起高脂血癥，本課題根據TRPV1的激活條件，設計38℃和43℃兩個溫度，通過觀察不同艾灸溫度對高脂血癥大鼠血脂及HL的影響，證實TRPV1通過介導HL途徑調節血脂，進一步明確灸法調脂的生物學基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料

（1）實驗動物：由上海實驗動物資源中心（西普爾-必凱）提供健康成年雄性SD大鼠（許可證號：SCXK（滬）2013-0016，清潔級），體重（180±20）g。大鼠購回后，將大鼠飼養于南京中醫藥大學實驗動物中心，溫度20℃～25℃，相對濕度60%左右的實驗環境。本實驗過程中對動物處置符合2006年科學技術部發布的《關于善待實驗動物的指導性意見》。

（2）主要試劑及藥品：艾條為動物用艾條，生產公司為南陽漢醫艾絨有限責任公司，

直徑7 mm，動物專用清艾條。豬油（自制）；丙基硫氧嘧啶片生產廠家上海朝暉藥業有限公司，批號：1506N17；Bile salts生產廠家sigma-alorich pcode公司，pcode-101691716， lot-BCBQ3263V，貨號：48305-50G-F；1，2丙二醇由生產廠家成都市科龍化工試劑廠提供，批號：20150712；吐溫80生產廠家為成都市克隆化工試劑廠，批號為2014112601；膽固醇生產廠家為成都市科龍化工試劑廠，批號為2014071401。

（3）試劑和儀器：血脂四項。HL酶聯免疫分析試劑盒購于上海聯碩生物科技有限公司上海聯碩生物科技有限公司。儀器SpectraMax M2酶標儀為美國Molecular Devices Corporation（MDC）公司產品。

1.2 方法

（1）脂肪乳劑配置方法

參照劉明[3]及倪鴻昌[4]的高脂模型制作方法，超市購買豬油，自行煉油去渣，冰箱8℃保存待用，取100 g豬油放于500 mL燒杯中，用電磁爐加熱成液態，先后分別加入5g丙基硫氧嘧啶和100 mL吐溫80，充分攪拌至完全溶解，同時準備另一個500ml燒杯，先后分別加入蒸餾水150 mL及1，2丙二醇100 mL，將其加熱至60攝氏度，后再加入10 gBile salts，充分攪拌后，將此燒杯的溶液緩慢倒入第一個燒杯中，邊倒邊攪拌，防止因熱而溢出燒杯外，之后加蒸餾水至500 mL，用玻璃棒充分攪勻后，冷卻至37攝氏度后灌胃。本方法制成的脂肪乳劑含1%丙基硫氧嘧啶、20%豬油、10%膽固醇、2%膽鹽。

（2）動物分組與模型復制

分組：大鼠適應性喂養1周后，稱量各大鼠體重后，根據體重隨機分為正常組、模型組、43℃組、38℃組，每組10只。正常組大鼠予生理鹽水10 ml/kg灌胃，每日1次，其它3組予脂肪乳劑10 ml/kg灌胃，每日1次。4周后，用毛細玻璃管眼眶后靜脈采血、離心取血清后檢測總膽固醇和甘油三酯，經統計學分析，模型組高于正常組，且差別具有統計學意義（P<0.05），說明模型復制成功，開始干預治療，同時除正常組外，模型組、兩個不同灸溫的艾灸組繼續用高脂乳劑灌胃，至取材結束。

（3）干預方法

用大鼠固定板將大鼠仰臥位固定，用剪刀將大鼠足三里及神闕穴位區0.5 cm×0.5 cm鼠毛剪除，暴露出局部皮膚。43℃組：艾條保持紅火狀態（每隔10 s彈灰1次）下距離皮膚（10±2）mm；38℃組：艾條保持紅火狀態（每隔10 s彈灰1次）下距離皮膚（35±5）mm；正常組及模型組：不作任何治療，每日陪同抓取、固定。溫度控制：通過掌控彈灰的速度和頻率掌控紅火狀態，通過掌控紅火狀態下艾條距離皮膚的距離來控制溫度，同時測溫儀來精確監控溫度變化。每日干預1次，共干預4周。

（4）取材及處死

四組大鼠干預四個星期之后，開始取材，取材前一天晚上8點禁食不禁水，第二天早上8點開始采血，采血前用剪刀剪去大鼠要采血眼睛同側的胡須，避免血液污染發生溶血，之后用中性玻璃毛細管眼眶靜脈叢采血法取血，即用左手緊捏大鼠頭頸部皮膚，將大鼠頭部固定，使大鼠眼球暴露充血，右手持長約4 cm、內徑0.9 mm，壁厚0.15 mm的毛細玻璃管傾斜45度角，快速旋轉插進眼內角，如無出血，可快速旋轉毛細血管，調整角度及方向，用規格為5 mL的采血管采血，采血后放置采血架上靜置待離心，大鼠在用無菌脫脂棉球壓迫眼睛止血后，用頸椎脫臼法處死大鼠，即用左手拇指與食指用力向下按住大鼠后頭部，右手抓住大鼠尾巴用力向后上方拉，將脊髓與腦髓拉斷，此時左手可感覺到頸椎與頭部分離的空虛感，即成功處死大鼠。

（5）指標檢測

取血后，放置采血架上靜置30 min，用離心機按照每分鐘3000轉的速度離心15分鐘，用移液槍吸取上清液滴入1.5 mL的離心管中，裝盒-80℃冰箱保存待測。血清膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）檢測采用生化比色法測定，肝脂酶（HL）采用酶聯免疫法測定[5-6]。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件對數據進行統計分析。計數資料以例（n），百分數（%）表示，采用x2檢驗；計量資料以“x±s”表示，采用t檢驗；以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同灸溫對高脂血癥大鼠血脂四項的影響

與模型組比較，43℃組及38℃組TC、TG、LDL-C明顯降低，差異具有顯著性意義（P<0.05）；與38℃組比較，43℃組降低TC、TG、LDL-C明顯，差異有顯著性意義（P<0.05），說明46℃組降脂療效優于38℃組，療效與溫度有關，適宜的溫度是取效的關鍵。HDL-C模型組高于正常組，與大鼠自身調制機制有關，兩組溫度對其影響區別不大，差異沒有統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 不同灸溫對高脂血癥大鼠HL活性的影響

與正常組比較，模型組HL活動性明顯降低，差異具有顯著性意義（P<0.05），說明造模成功，與模型組比較，43℃組可明顯提高HL的活性，差異具有非常顯著性意義（P<0.01），38℃組雖有所提高，但差異無顯著性意義（P>0.05）；與38℃組比較，43℃組可明顯提高HL的活性，差異具有非常顯著性意義（P<0.01），說明HL的活性受溫度的影響，適宜的溫度可提高其活性；

3 討 論

肝脂酶（Hepatic lipase，HL）是一種主要由肝實質細胞合成和分泌的糖蛋白，主要兩種生理功能，一種是具有水解各種脂蛋白中的甘油三酯和磷脂，改變各種脂蛋白顆粒的大小和密度的功能；另一種是作為配體促進肝細胞攝取含載脂蛋白B（apolipoprotein B，apoB）類脂蛋白，影響著血漿中脂蛋白的濃度，在脂蛋白微粒分解和LDL與HDL轉換過程中起關鍵作用。研究表明[7-9]，維持和提高HL活性對調節血脂、防治動脈硬化有重要意義，因此，維持和提高HL的活性，已成為治療高脂血癥的主要途徑之一。

本實驗研究表明：不同灸溫對血脂四項影響不同，43℃組可明顯優于38℃組，43℃是TRPV1激活的關鍵條件，說明TRPV1參與了脂代謝，TRPV1的激活與艾灸調脂效應密切相關，直接或者間接參與了血脂的代謝。同時，本研究表明不同溫度對肝脂酶的活性影響亦不一樣，HL的活性受溫度的影響，適宜的溫度可促進其活性，43℃組可明顯提高HL的活性，且優于38℃組，說明HL途徑是TRPV1調節血脂途徑之一，進一步明確了灸法調脂的生物學基礎。

參考文獻

[1] 王玲玲.艾灸的特點及溫通效應[J].中國針灸，2011，31（10）：865-868.

[2] 張會芳，王玲玲，張建斌，姜勁峰.艾灸溫通調脂臨床研究[J].世界中醫藥，2013，8（8）：871-879.

[3] 劉 明，董超仁，蘇靜怡.一種簡便實用的大鼠高脂血癥模型[J].中國藥理學通報，1989，5（2）：119.

[4] 倪鴻昌，李 俊，金 涌，等.大鼠實驗性高脂血癥和高脂血癥性脂肪肝模型研究[J].中國藥理學通報，2004，20（6）：703-706.

[5] Nozakl S， Kubo M， Matsuzawa Y，et al.Sensitive non-radioisotopic method for measuring lipoprotein lipase and hepatic triglyceride lipase in post-heparin plasma.Clin Chem，1984，30：748-751.

[6] Kobayshi J，Hashimoto H，Fukamachi I， et al.Lipoprotein lipase mass and activity in severe hypertriglycerdemia.Clin Chim Acta，1993，216：113-123.

本文編輯：李 豆