氣相色譜法測定韭菜中腐霉利的不確定度評估

竇銀花

(上海必諾檢測技術服務有限公司，上海 200436)

韭菜是一種常見的多年生宿根蔬菜，可以補腎溫陽、益肝健胃、行氣補血、潤腸通便，但病蟲害較多，尤其是雨水偏多的夏季，其中灰霉病和銹病頻繁發生[1]。腐霉利作為一種廣譜內吸式殺菌劑[2]，低毒高效[3]，常用于韭菜種植過程中灰霉病的防治[1]。GB 2763—2014 中規定了腐霉利的最大殘留量(MRL)值為0.2 mg/kg[4]；歐盟規定韭菜中腐霉利的 MRL值為0.01 mg/kg[5]。測量不確定度[6-8]作為一種參數與測量結果的紐帶，客觀地評價檢測數據，保障結果的準確性以及提高實驗室的技術水平，便于實施內部質量控制，為氣相色譜法的不確定度評估提供參考。為了有效回避潛在的食用風險和提高檢測結果的準確性，筆者依據NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》[9]，選用氣相色譜法測定韭菜中腐霉利的含量，參考JJF 1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》[10]，找出影響測量結果的不確定度，并對其加以準確地評估。

1 材料與方法

1.1主要材料與試劑電子分析天平(BP211D，德國賽多利斯公司)；Agilent 7890B氣相色譜儀(配ECD檢測器)；弗羅里硅土柱；移液管、容量瓶等常規玻璃儀器。乙腈，色譜純；正己烷，色譜純；丙酮，色譜純；氯化鈉(優級純)；腐霉利標準物質，(100.0 ± 0.1)μg/mL，上海市農業部環境保護科研檢測所。韭菜購自上海農工商超市。

1.2儀器條件使用HP-5(30 m×0.25 mm×0.25 μm)石英毛細管柱，初始化溫度50 ℃，保持1 min，然后以5 ℃/min升溫至100 ℃，再以15 ℃/min 升溫至260 ℃，保持2 min；載氣：氮氣，純度≥99.999%；流速：1.0 mL/min； 進樣口溫度：230 ℃； 進樣量：1 μL； 進樣方式：無分流進樣；檢測器溫度：250 ℃。

1.3試驗方法準確稱取25.00 g試樣于高腳燒杯中，用容量瓶量取50.0 mL乙腈加入燒杯，用勻漿機高速勻漿2 min，用濾紙過濾，濾液收集到裝有8 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，蓋上蓋子，劇烈振蕩1 min，室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相完全分層。用移液管吸取10.00 mL乙腈溶液，放入50 mL小燒杯中，將燒杯在80 ℃水浴鍋上加熱，杯內緩緩通入氮氣，蒸發至近干，加入2.0 mL正己烷，凈化液倒入活化好的弗羅里硅土柱，用15 mL刻度離心管接收洗脫液，用5.0 mL丙酮+正己烷(1∶9)沖洗燒杯后淋洗弗羅里硅土柱，并重復1次，氮吹蒸發小于5.0 mL，最后定容至5.0 mL，使用漩渦振蕩器混勻，裝進樣瓶后供測定[9]。進樣量1 μL，外標法定量。

為了測定提取液中腐霉利的濃度，用移液管移取100 μg/mL 標準溶液1 mL至10 mL 容量瓶中，得到10 μg/mL標準儲備溶液，再分別移取0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mL標準儲備溶液至10 mL 容量瓶中，配制成0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 μg/mL的工作溶液。

1.4數學模型的確立韭菜中腐霉利含量測定的數學模型公式如下：

式中，ω為在試樣里腐霉利的含量(mg/kg)；Cγ為樣品液測定濃度(μg/mL)；V1為提取溶劑總體積(mL)；V2為分取體積(mL)；V3為待測液定容體積(mL)；m為韭菜稱樣量(g)。

2 結果與分析

2.1不確定度來源根據試驗方法的數學模型來分析，有配制標準溶液的過程、稱量樣品的過程、定容樣品的過程、擬合標準曲線的過程以及重復測量樣品的過程引入的不確定度等為影響腐霉利測定過程中不確定度的主要因素[11]。所以，樣品中腐霉利含量的相對不確定度公式為：

式中，Urel為樣品中腐霉利含量引起的不確定度；Urel1為配制標準溶液的過程引起的不確定度；Urel2為稱量樣品的過程引起的不確定度；Urel3為定容樣品的過程引起的不確定度；Urel4為擬合標準曲線的過程引起的不確定度；Urel5為重復性測量樣品的過程引起的不確定度。

2.2配制標準溶液過程引入的不確定度評定

2.2.1由標準樣品純度引起的不確定度。上海市農業部環境保護科研檢測所為此次試驗提供標準物質腐霉利，標準物質證書顯示的校準值為(100.0±0.1)μg/mL，按照正態分布95% 置信概率計算，其相對標準不確定度為Urel1-1=0.1/(1.96×100)=0.000 51。

10 μg/mL標準儲備溶液的配制過程中需要的A級單標線10 mL 容量瓶和1 mL 移液管的容量允許差分別為 ±0.020和±0.008 mL，按上述方法可得腐霉利標準儲備液相對標準不確定度為Urel1-2=U(V)/V=0.039 99/10=0.004 00。

2.2.3玻璃器具在標準工作溶液配制過程中引起的不確定度。工作溶液的配制過程中需要使用吹出式刻度移液管移取0.05 、0.10和0.20 mL 儲備液，其容量允許差分別為±0.004、±0.004和±0.006 mL[15]；使用 1 mL A級刻度移液管移取0.5、1.0 mL儲備液，其容量允許差均為±0.008 mL[15]；定容用 A 級單標線 10 mL容量瓶，其容量允許差均為 ±0.020 mL[16]，正己烷的膨脹系數為1.36×10-3mL/℃。按“2.2.2”評定方法計算，玻璃器具引入的不確定度結果見表1。

表1 不同濃度標準溶液配制過程引入的不確定度

2.4定容樣品過程引起的不確定度

2.4.1提取液體積(V1)引起的不確定度。使用A級50 mL容量瓶定容樣品溶液，經檢驗認定，其最大允許偏差為±0.05 mL，乙腈的膨脹系數為1.37×10-3mL/℃，按“2.2.2”評定方法計算，定容提取液的過程中體積產生的相對標準不確定度為Urel3-1=0.003 54。

2.4.2分取體積(V2)引入的不確定度。樣品分取過程中使用A級10 mL單標線吸管，經檢定，其允許最大誤差為±0.02 mL，按矩形分布計算，相對標準不確定度為Urel3-2=0.001 15。

2.4.3待測液定容體積(V3)引入的不確定度。所用離心管5 mL標線處最大誤差為±0.05 mL，按矩形分布計算，相對標準不確定度為Urel3-3=0.005 77。

2.5最小二乘法擬合標準曲線引入的不確定度以0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mg/L 5種不同濃度(C)的標準工作溶液為橫坐標，腐霉利峰面積(A)為縱坐標，利用最小二乘法得出線性回歸方程：A=82 663C+281.14(R2=0.999 6)。同一標樣濃度同時測定2次的峰面積及對應標樣濃度見表2。

表2 標樣濃度與對應峰面積

2.8合成標準不確定度和擴展標準不確定度合成標準不確定度為Uc=Urel×C=0.049 50×0.16=0.007 92；取置信概率p=95%，包含因子k=2，得到相對擴展不確定度：U=k×UCC=0.015 80。

2.9含量的不確定度表達式用NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》[9]方法重復6次測定韭菜中腐霉利的平均含量為(0.160±0.016)mg/kg(k=2)。

3 結論

用NY/T 761—2008[9]的方法測定韭菜中腐霉利的含量過程中，樣品的重復性測試過程、標準曲線的擬合過程和標準溶液的配制過程對不確定度的影響較大，其他因素的不確定度影響較小。因此，檢測人員在檢測過程中需要科學合理化改進不確定的主要因素，保證檢測結果的準確性。

[1] 張群，吳南村，張月，等.氣相色譜-串聯質譜法測定韭菜中的三唑酮和腐霉利殘留[J].農藥學學報，2016，18(3)：397-401.

[2] 盧曉宇，陳躍，王金花，等.氣相色-質聯用法測定食品中腐霉利殘留量[J].北京化工大學學報(自然科學版)，2008，35(3)：35-38.

[3] 毛春玲，劉洋，趙薇薇，等.平菇和榆黃蘑及培養料中腐霉利的殘留動態研究[J].食用菌，2014(4)：72-73.

[4] 中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會.食品中農藥最大殘留限量：GB 2763—2014[S].北京：中國標準出版社，2014.

[5] European Union.Amending Annexes II，III and V to Regulation(EC)No 396/2005 of the European Parliament and of the Council as regards maximum residue levels for carbaryl，procymidone and profenofos in or on certain products：Commission Regulation(EU)No 1096/2014[S].Rue Froissart：European Commission，2014.

[6] 王巖，宋磊.GC-MS 法測定小麥粉中溴氰菊酯的不確定度評定[J].山東化工，2016，45(19)：66-67，71.

[7] 中國實驗室國家認可委員會.化學分析中不確定度的評估指南[M].北京：中國計量出版社，2002：14-31.

[8] 中國合格評定國家認可委員會.化學分析中不確定度的評估指南：CNAS-GL06—2006[S].北京：中國計量出版社，2006：1-145.

[9] 中華人民共和國農業部.蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定：NY/T 761—2008[S].北京：中國農業出版社，2008：1-16.

[10] 國家質量監督檢驗檢疫總局.測量不確定度評定與表示：JJF 1059.1—2012[S].北京：中國標準出版社，2012：16.

[11] 趙康，江小平.GC-MS 法測定塑料包裝材料中DBP含量的不確定度評估[J].安徽農業科學，2017，45(2)：103-105.

[12] 劉黎，鄧可.氣相色譜-質譜聯用法測定番茄中腐霉利農藥殘留量的不確定度評定[J].農業與技術，2017，37(8)：55-57，59.

[13] 程堅，王彩霞，邵棟梁.高效液相色譜法檢測白酒中三氯蔗糖含量的不確定度評估[J].現代農業科技，2011(15)：13-14.

[14] 國家質量監督檢驗檢疫總局.常用玻璃量器檢定規程：JJG 196—2006[S].北京：中國計量出版社，2006.

[15] 北京玻璃儀器廠.實驗室玻璃儀器 分度吸量管：GB/T 12807—1991[S].北京：中國標準出版社，1992.

[16] 北京玻璃儀器廠，國家輕工業玻璃產品質量監督檢測中心.實驗室玻璃儀器 單標線容量瓶：GB/T 12806—2011[S].北京：中國標準出版社，2012.